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特表2024-540174ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを用いたがんの治療
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-31
(54)【発明の名称】ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを用いたがんの治療
(51)【国際特許分類】
C07K 16/46 20060101AFI20241024BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20241024BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20241024BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241024BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20241024BHJP
【ＦＩ】
C07K16/46 ZNA
C07K16/28
A61P35/00
A61P35/02
A61K39/395 N
A61P43/00 121
A61K45/00
A61K39/395 T
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024525622
(86)(22)【出願日】2022-10-31
(85)【翻訳文提出日】2024-06-11
(86)【国際出願番号】 EP2022080329
(87)【国際公開番号】W WO2023073225
(87)【国際公開日】2023-05-04
(31)【優先権主張番号】21205746.7
(32)【優先日】2021-11-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】514099673
【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】ヘーネル， ジェラルフ
(72)【発明者】
【氏名】クライン， クリスティアン
(72)【発明者】
【氏名】ノイマン， アンネ－ゾフィ
(72)【発明者】
【氏名】サブクレーベ， ザビネ マリオン
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZB26
4C084ZB27
4C084ZC75
4C085AA16
4C085BB01
4C085BB11
4C085CC23
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、がんの治療、特にＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを用いたがんの治療に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
個体におけるがんの治療における使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体であって、前記治療が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと組み合わせた前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の投与を含む、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項2】
個体におけるがんの治療における使用のための４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストであって、前記治療が、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた前記４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む、使用のための４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト。
【請求項3】
個体におけるがんの治療のための医薬の製造におけるＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の使用であって、前記治療が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと組み合わせた前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の投与を含む、使用。
【請求項4】
個体におけるがんの治療のための医薬の製造における４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの使用であって、前記治療が、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた前記４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む、使用。
【請求項5】
個体におけるがんを治療するための方法であって、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを前記個体に投与することを含む、方法。
【請求項6】
ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体を含む第１の医薬と、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含む第２の医薬とを含み、場合により、個体においてがんを治療するための前記第２の医薬と組み合わせた前記第１の医薬の投与のための説明書を含む添付文書をさらに含む、キット。
【請求項7】
前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体が、（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２および配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分、ならびに
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２および配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２および配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分
を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、方法またはキット。
【請求項8】
前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体が、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合する第３の抗原結合部分、ならびに／または第１のサブユニットおよび第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、方法またはキット。
【請求項9】
前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体が、（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２および配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変領域または定常領域のいずれかが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２および配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２および配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分であって、前記第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分が、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニットおよび第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと、を含み、
前記第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記第１の抗原結合部分の前記Ｆａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、前記第１の抗原結合部分が、前記Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、前記第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第２のサブユニットのＮ末端に融合している、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項10】
前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含み、かつ／または前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分および（存在する場合）第３の抗原結合部分が、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である、軽鎖可変領域配列とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、方法またはキット。
【請求項11】
前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、前記Ｆａｂ軽鎖および前記Ｆａｂ重鎖の可変領域が交換されたクロスオーバーＦａｂ分子であり、前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分および（存在する場合）第３の抗原結合部分が従来のＦａｂ分子であり、定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって独立して置換されており、１２３位のアミノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって独立して置換されており、定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸（Ｋａｂａｔ ＥＵ ｉｎｄｅｘによる番号付け）がグルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって独立して置換されており、２１３位のアミノ酸（Ｋａｂａｔ ＥＵ ｉｎｄｅｘによる番号付け）が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって独立して置換されている、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項12】
前記ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の前記Ｆｃドメインが、前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットおよび前記第２のサブユニットの会合を促進する改変を含み、ならびに／または前記Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合および／もしくはエフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項13】
前記４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが、４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片、特に、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメインまたはそれらの断片を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項14】
前記４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片が、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７および配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列、特に配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項15】
前記４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが、腫瘍関連抗原、特に線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部分を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項16】
ＦＡＰに特異的に結合する前記抗原結合部分が、配列番号３９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号４０のＨＣＤＲ２および配列番号４１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４３のＬＣＤＲ２および配列番号４４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１５に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項17】
ＦＡＰに特異的に結合する前記抗原結合部分が、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、請求項１５または１６に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項18】
前記４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが、第１のサブユニットおよび第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項19】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの前記Ｆｃドメインが、前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットおよび前記第２のサブユニットの会合を促進する改変を含み、かつ／または前記Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合および／もしくはエフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１８に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項20】
前記４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニストが、（ｉ）４－１ＢＢＬの第１、第２および第３の外部ドメイン、またはそれらの断片と、
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分であって、Ｆａｂ分子である抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニットおよび第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと、
（ｉｖ）ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインと、
を含む抗原結合分子であり、
前記抗原結合分子が、
（ａ）（ａ１）４－１ＢＢＬの前記第１の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端において４－１ＢＢＬの前記第２の外部ドメインまたはその断片のＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの前記第１の外部ドメインまたはその断片、（ａ２）４－１ＢＢＬの前記第２の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端において前記ＣＬドメインのＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの前記第２の外部ドメインまたはその断片、（ａ３）前記ＣＬドメインであって、そのＣ末端において前記Ｆｃドメインのサブユニットのうちの１つ（例えば、前記第１のサブユニット）のＮ末端に融合した前記ＣＬドメイン、および（ａ４）前記Ｆｃドメインのサブユニットのうちの１つ（例えば、前記第１のサブユニット）を含む、第１のポリペプチド、
（ｂ）（ｂ１）４－１ＢＢＬの前記第３の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端において前記ＣＨ１ドメインのＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの前記第３の外部ドメインまたはその断片と（ｂ２）前記ＣＨ１ドメインとを含む、第２のポリペプチド、
（ｃ）（ｃ１）前記Ｆａｂ分子の重鎖であって、そのＣ末端において前記Ｆｃドメインのもう一方のサブユニット（例えば、前記第２のサブユニット）のＮ末端に融合した前記Ｆａｂ分子の重鎖と（ｃ２）前記Ｆｃドメインのもう一方のサブユニット（例えば、前記第２のサブユニット）とを含む、第３のポリペプチド、ならびに
（ｄ）前記Ｆａｂ分子の軽鎖を含む第４のポリペプチド
から構成される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項21】
前記第１のポリペプチドのＣＬドメインにおいて、１２４位のアミノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）が、独立してリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって置換されており、１２３位のアミノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）が、独立してリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって置換されており、前記第２のポリペプチドのＣＨ１ドメインにおいて、１４７位のアミノ酸（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されており、２１３位のアミノ酸（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている、請求項２０に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項22】
前記第１のポリペプチドが、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドが、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチドが、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチドが、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２０または２１に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項23】
前記４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが、抗４－１ＢＢ抗体、特に抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ二重特異性抗体である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項24】
前記がんがＷＴ１陽性がんである、請求項１～２３のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項25】
前記がんが急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法またはキット。
【請求項26】
前述の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、がんの治療、特にＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを用いたがんの治療に関する。
【背景技術】
【0002】
Ｔ細胞活性化二重特異性抗体は、腫瘍細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞に関与するように設計された、有望なクラスのがん治療薬である。このような抗体が、Ｔ細胞上のＣＤ３と腫瘍細胞に発現する抗原に同時に結合すると、腫瘍細胞とＴ細胞との間に一時的な相互作用が生じ、Ｔ細胞の活性化とそれに続く腫瘍細胞の溶解が引き起こされる。
【0003】
ＷＴ１（ウィルムス腫瘍１、ウィルムス腫瘍タンパク質）は、細胞増殖、分化、アポトーシス、臓器発達に関与する発癌性転写因子であり、正常な成人組織での発現はまれである（ＨｉｎｒｉｃｈｓおよびＲｅｓｔｉｆｏ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（２０１３）３１，９９９－１００８）。しかし、ＷＴ１は、いくつかのタイプの血液学的悪性腫瘍および広範囲の固形腫瘍で過剰発現していると報告されている（Ｖａｎ Ｄｒｉｅｓｓｃｈｅら，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ（２０１２）１７，２５０－２５９）。ＷＴ１は核タンパク質であり、細胞内に局在している。細胞内タンパク質は、プロテアソーム内で分解され、処理され、Ｔ細胞エピトープとしての主要組織適合複合体（ＭＨＣ）Ｉにより細胞表面に提示され、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）により認識され得る。したがって、ＷＴ１誘導ペプチドは、ＨＬＡ－Ａ２の関連で細胞表面に提示され、Ｔ細胞認識をトリガーし得る。
【0004】
ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１を標的とするＴ細胞活性化二重特異性抗体は、国際公開第２０１９／１２２０５２号に記載されている。そのようなＴ細胞活性化二重特異性抗体は、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療において、有用であり得る。ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体（「ＷＴ１－ＴＣＢ」）は、現在、再発性／難治性（ｒ／ｒ）ＡＭＬ患者における第Ｉ相臨床試験において調査中である（Ａｕｇｓｂｅｒｇｅｒら，Ｂｌｏｏｄ（２０２１）ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ．２０２００１０４７７；ＮＣＴ０４５８０１２１）。
【0005】
Ｔ細胞ベースの免疫療法に対する可能な免疫回避機構は、白血病細胞を免疫エフェクター細胞から遮蔽し、Ｔ細胞活性化を減少させるＴ細胞または間質細胞の共阻害によって骨髄の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）によってもたらされる。
したがって、例えばＡＭＬにおいて、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１標的化Ｔ細胞活性化抗体の治療上の利益を最大化するために、ＴＭＥの免疫抑制作用を克服することが望ましいであろう。
したがって、例えばＡＭＬにおいて、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１標的化Ｔ細胞活性化抗体の治療上の利益を最大化するために、ＴＭＥの免疫抑制作用を克服することが望ましいであろう。
【発明の概要】
【0006】
本発明は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１標的Ｔ細胞活性化二重特異性抗体と、Ｔ細胞に正の共刺激シグナル（４－１ＢＢＬ）を提供する４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、特に線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）などの間質抗原を標的とする４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとの併用治療によって、ＴＭＥの上記の免疫抑制効果を克服し、Ｔ細胞応答を増強する。ＦＡＰは、白血病細胞による骨髄ニッチの再調節後にがん関連線維芽細胞において発現上昇し、その結果、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストのＦＡＰ特異性は、腫瘍ニッチに強く制限されたＴ細胞共刺激を提供する。
【0007】
本発明者らは、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１標的化Ｔ細胞活性化二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの組合せが、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１標的化Ｔ細胞活性化二重特異性抗体単独と比較して、ＡＭＬにおいて活性が増強されることを見出した。
【0008】
初代ＡＭＬ細胞を使用して、本発明者らは驚くべきことに、ＦＡＰ発現線維芽細胞の存在下でＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体によって誘導される腫瘍細胞の溶解が、４－１ＢＢアゴニストＦＡＰ－４－１ＢＢＬの添加によって回復するだけでなく、増強されることを見出した。
【0009】
したがって、第１の態様では、本発明は、個体におけるがんの治療において使用するためのＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体であって、治療が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと組み合わせたＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の投与を含む、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体を提供する。
【0010】
さらなる態様では、本発明は、個体におけるがんの治療において使用するための４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストであって、治療が、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを提供する。
【0011】
一態様では、本発明は、個体におけるがんの治療において使用するための医薬の製造におけるＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の使用であって、治療が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと組み合わせたＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の投与を含む、使用を提供する。
【0012】
さらなる態様では、本発明は、個体におけるがんの治療のための医薬の製造における４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの使用であって、治療が、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせた４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む、使用を提供する。
【0013】
なおさらなる態様では、本発明は、個体におけるがんを治療するための方法であって、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを個体に投与することを含む方法を提供する。
【0014】
一態様では、本発明は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体を含む第１の医薬と、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含む第２の医薬とを含み、場合により、個体においてがんを治療するための第２の医薬と組み合わせて第１の医薬を投与するための説明書を含む添付文書をさらに含むキットも提供する。
【0015】
上記および本明細書に記載されるＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用またはキットは、下記に記載される特徴のいずれかを単独でまたは組み合わせて組み込み得る（文脈上別段の指示がない限り）。
【0016】
本明細書に記載のＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３と、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１、特にＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１ＲＭＦとに特異的に結合する二重特異性抗体である。本発明において使用するための特に有用なＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１９／１２２０５２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【0017】
「二重特異性」という用語は、抗体が、少なくとも２つの別個の抗原決定基に特異的に結合し得ることを意味する。典型的には、二重特異性抗体は２つの抗原結合部位を含み、これらの各々は異なる抗原決定基に対して特異的である。特定の態様では、二重特異性抗体は、２つの抗原決定基、特に２つの異なる細胞上で発現される２つの抗原決定基を同時に結合し得る。
【0018】
本明細書で使用される場合、「抗原決定基」という用語は、「抗原」および「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分－抗原複合体を形成する、抗原結合部分が結合するポリペプチド高分子上の部位（例えば、アミノ酸の連続伸長部または異なる領域の非連続アミノ酸から構成される配座構成）を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面上に、ウイルス感染した細胞の表面上に、他の疾患細胞の表面上に、免疫細胞の表面上に、血清中で遊離して、および／または細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に認め得る。
【0019】
本明細書で使用される用語「抗原結合部分」は、抗原決定基に特異的に結合するポリペプチド分子を指す。一態様では、抗原結合部分は、標的部位に、例えば、抗原決定基を有する特定の種類の腫瘍細胞に結合する部分（例えば、第２の抗原結合部分）に指向し得る。別の態様では、抗原結合部分は、その標的抗原、例えばＴ細胞受容体複合抗原を通してシグナル伝達を活性化し得る。抗原結合部分には、本明細書でさらに定義する抗体およびその断片が含まれる。特定の抗原結合部分は、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とを含む、抗体の抗原結合ドメインを含む。特定の態様では、抗原結合部分は、本明細書でさらに定義され、当技術分野で知られている抗体定常領域を含み得る。有用な重鎖定常領域は、α、δ、ε、γまたはμの５つのアイソタイプのいずれかを含む。有用な軽鎖定常領域は、２つのアイソタイプ：κおよびλのいずれかを含む。
【0020】
「特異的結合」とは、結合が抗原に対して選択的であり、望ましくない相互作用または非特異的相互作用と区別できることを意味する。抗原結合部分が特定の抗原決定基に結合する能力は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）または当業者には知られている他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ機器で分析される）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））、および従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかによって測定し得る。一実施形態では、無関係なタンパク質に対する抗原結合部分の結合度は、例えばＳＰＲによって測定される抗原に対する抗原結合部分の結合の約１０％未満である。特定の態様では、抗原に結合する抗原結合部分、またはその抗原結合部分を含む抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍから１０－１３Ｍまで、例えば１０－９Ｍから１０－１３Ｍまで）の解離定数（ＫＤ）を有する。
【0021】
「親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、受容体）と、その結合パートナー（例えば、リガンド）との間の非共有結合的相互作用の合計強度を指す。別途指示がない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合対（例えば、抗原結合部分と抗原、または受容体とそのリガンド）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、通常、解離定数（Ｋｄ）によって表され、この解離定数（ＫＤ）は、解離速度定数と会合速度定数（それぞれ、ｋｏｆｆおよびｋｏｎ）の比である。したがって、速度定数の比が同じである限り、同等の親和性が異なる速度定数を含み得る。親和性は、本明細書に記載するものを含め、当該技術分野で公知の十分に確立された方法によって測定し得る。親和性を測定する特定の方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。
【0022】
「ＣＤ３」は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト）、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＤ３を指す。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＣＤ３、ならびに細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＣＤ３を包含する。この用語はまた、ＣＤ３の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントを包含する。一態様では、ＣＤ３は、ヒトＣＤ３、特にヒトＣＤ３のイプシロンサブユニット（ＣＤ３ε）である。ヒトＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）アクセッション番号Ｐ０７７６６（バージョン１４４）またはＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿０００７２４．１に示されている。配列番号２７も参照されたい。カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］ＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＢ７１８４９．１に示されている。配列番号２８も参照されたい。
【0023】
「ウィルムス腫瘍１」または「ウィルムス腫瘍タンパク質」としても知られる「ＷＴ１」は、特に明記しない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）等の哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意のネイティブＷＴ１を指す。この用語は、「完全長」の未処理ＷＴ１、ならびに細胞内での処理から生じるＷＴ１の任意の形態を包含する。この用語はまた、ＷＴ１の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。一態様では、ＷＴ１はヒトＷＴ１、特に配列番号２３のタンパク質である。ヒトＷＴ１はＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）受け入れ番号Ｐ１９５４４（エントリーバージョン２１５）に記載されており、ヒトＷＴ１のアミノ酸配列は配列番号２３にも示されている。
【0024】
「ＶＬＤ」、「ＶＬＤペプチド」、または「ＷＴ１ＶＬＤ」が意味するのは、アミノ酸配列ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号２４；配列番号２３のＷＴ１タンパク質の位置３７－４５）を有するＷＴ１由来のペプチドである。
「ＲＭＦ」、「ＲＭＦペプチド」、または「ＷＴ１ＲＭＦ」が意味するのは、アミノ酸配列ＲＭＦＲＮＡＰＹＬ（配列番号２５；配列番号２３のＷＴ１タンパク質の位置１２６－１３４）を有するＷＴ１由来のペプチドである。
「ＲＭＦ」、「ＲＭＦペプチド」、または「ＷＴ１ＲＭＦ」が意味するのは、アミノ酸配列ＲＭＦＲＮＡＰＹＬ（配列番号２５；配列番号２３のＷＴ１タンパク質の位置１２６－１３４）を有するＷＴ１由来のペプチドである。
【0025】
「ＨＬＡ－Ａ２」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２」、「ＨＬＡ－Ａ０２」、または「ＨＬＡ－Ａ＊２」（交換可能に使用される）は、ＨＬＡ－Ａ血清型群におけるヒト白血球抗原血清型を指す。ＨＬＡ－Ａ２タンパク質（それぞれのＨＬＡ遺伝子によってコードされる）は、β２ミクログロブリンサブユニットをさらに含む、それぞれのクラスＩ ＭＨＣ（主要組織適合複合体）タンパク質のα鎖を構成する。特定のＨＬＡ－Ａ２タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２０１（ＨＬＡ－Ａ０２０１、ＨＬＡ－Ａ０２．０１、またはＨＬＡ－Ａ＊０２：０１とも呼ばれる）である。特定の態様では、本明細書に記載のＨＬＡ－Ａ２タンパク質はＨＬＡ－Ａ２０１である。ヒトＨＬＡ－Ａ２の例示的な配列は、配列番号２６で与えられる。
【0026】
「ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１」は、ＨＬＡ－Ａ２分子と、ＷＴ１由来のペプチド（本明細書では「ＷＴ１ペプチド」とも呼ぶ）、具体的には、ＲＭＦまたはＶＬＤペプチド（それぞれ「ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１ＲＭＦ」および「ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１ＶＬＤ」）の複合体を指す。本発明で使用される二重特異性抗体は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１ＲＭＦ複合体またはＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１ＶＬＤ複合体のいずれかに特異的に結合し得る。
【0027】
本明細書で使用される場合、Ｆａｂ分子等に関する「第１」、「第２」または「第３」という用語は、各タイプの部分が２つ以上存在する場合の区別の便宜のために使用される。これら用語の使用は、特に断らない限り、二重特異性抗体の特定の順序または配向を付与することを意図していない。
【0028】
本明細書で使用される場合、「価」という用語は、抗体中の指定された数の抗原結合部位の存在を意味する。したがって、「抗原への一価結合」という用語は、抗体中の抗原に特異的な１つ（および１つ以下）の抗原結合部位の存在を意味する。
【0029】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、および所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
【0030】
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、天然抗体構造と実質的に類似した構造を有する抗体を指す。
【0031】
「抗体断片」とは、インタクト抗体が結合する抗原に結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子である。抗体フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、および単一ドメイン抗体が挙げられる。特定の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ Ｍｅｄ．９，１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。また、国際公開第９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５５７１８９４号および第５５８７４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期が長くなったＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディおよびテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）に説明されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照）。抗体断片は、限定されないが、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質分解による消化、および組換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含め、種々の技術によって作製され得る。
【0032】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然の抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、概して、類似の構造を有しており、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む。例えば、Ｋｉｎｄｔら，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第６版、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，９１ページ（２００７）を参照されたい。
単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分であり得る。可変領域配列に関連して本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔ番号付け」は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）によって記載される番号付けシステムを指す。
単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分であり得る。可変領域配列に関連して本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔ番号付け」は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）によって記載される番号付けシステムを指す。
【0033】
本明細書で使用される場合、重鎖および軽鎖の全ての定常領域およびドメインのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載されるＫａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされ、本明細書では「Ｋａｂａｔによる番号付け」または「Ｋａｂａｔ番号付け」と呼ばれる。特定的には、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ ｅｄ．、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）の６４７～６６０頁を参照されたい）を、κおよびλアイソタイプの軽鎖定常ドメインＣＬに使用し、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付けシステム（６６１～７２３頁を参照されたい）を、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３）に使用し、この場合には、「Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け」と言及することによって本明細書でさらに明確にしている。
【0034】
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変であり、抗原結合特異性を決定する抗体可変ドメインの各領域、例えば「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）を指す。通常、抗体は、６つのＣＤＲ；ＶＨに３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、およびＶＬに３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む。本明細書の例示的なＣＤＲには、以下が含まれる。
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）および９６－１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）および９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、および
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）、および９３～１０１（Ｈ３）に存在する抗原接触部位（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））。
特に指示がない限り、ＣＤＲは、上記Ｋａｂａｔらに従い決定される。当業者は、ＣＤＲの表記は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ、上記ＭｃＣａｌｌｕｍ、または、任意の他の、科学的に認可された命名システムに従い決定し得ることを理解するであろう。
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）および９６－１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）および９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、および
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）、および９３～１０１（Ｈ３）に存在する抗原接触部位（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））。
特に指示がない限り、ＣＤＲは、上記Ｋａｂａｔらに従い決定される。当業者は、ＣＤＲの表記は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ、上記ＭｃＣａｌｌｕｍ、または、任意の他の、科学的に認可された命名システムに従い決定し得ることを理解するであろう。
【0035】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４の４つのＦＲドメインからなる。したがって、ＨＶＲ配列およびＦＲ配列は、概して、ＶＨ（またはＶＬ）中で以下の順序で現れる。ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。
【0036】
抗体または免疫グロブリンの「クラス」は、抗体または免疫グロブリンの重鎖が保有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体の５つの主要なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分け得る。免疫グロブリンの異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
【0037】
「Ｆａｂ分子」は、免疫グロブリンの重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメイン（「Ｆａｂ重鎖」）と、軽鎖のＶＬおよびＣＬドメイン（「Ｆａｂ軽鎖」）とからなるタンパク質を指す。
【0038】
「クロスオーバー」Ｆａｂ分子（「Ｃｒｏｓｓｆａｂ」とも称される）とは、Ｆａｂ重鎖と軽鎖の可変ドメインまたは定常ドメインが交換されている（すなわち互いによって置き換えられている）Ｆａｂ分子を意味し、すなわちクロスオーバーＦａｂ分子は、軽鎖可変ドメインＶＬおよび重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１（ＶＬ－ＣＨ１、Ｎ末端からＣ末端方向）から構成されるペプチド鎖と、重鎖可変ドメインＶＨおよび軽鎖定常ドメインＣＬ（ＶＨ－ＣＬ、Ｎ末端からＣ末端方向）から構成されるペプチド鎖とを含む。明確にするために、Ｆａｂ軽鎖の可変ドメインとＦａｂ重鎖の可変ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子において、重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１を含むペプチド鎖を、本明細書では、（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ぶ。逆に、Ｆａｂ軽鎖の定常ドメインとＦａｂ重鎖の定常ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子において、重鎖可変ドメインＶＨを含むペプチド鎖を、本明細書では、（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ぶ。
【0039】
これに対して、「従来の」Ｆａｂ分子とは、その天然フォーマットのＦａｂ分子、すなわち重鎖の可変ドメインおよび定常ドメイン（ＶＨ－ＣＨ１、Ｎ末端からＣ末端方向）からなる重鎖と、軽鎖の可変ドメインおよび定常領域（ＶＬ－ＣＬ、Ｎ末端からＣ末端方向）からなる軽鎖とを含むＦａｂ分子を意味する。
【0040】
「免疫グロブリン分子」という用語は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質であり、ジスルフィド結合した２つの軽鎖と２つの重鎖から構成される。Ｎ末端からＣ末端まで、それぞれの重鎖は、可変ドメイン（ＶＨ）（可変重鎖ドメインまたは重鎖可変領域とも呼ばれる）と、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）（重鎖定常領域とも呼ばれる）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、それぞれの軽鎖は、可変ドメイン（ＶＬ（可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変領域とも呼ばれる）と、その後に定常軽鎖（ＣＬ）ドメイン（軽鎖定常領域とも呼ばれる）を有する。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）またはμ（ＩｇＭ）と呼ばれる５種類の１つに割り当てられてもよく、このいくつかは、例えば、γ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）、γ３（ＩｇＧ３）、γ４（ＩｇＧ４）、α１（ＩｇＡ１）およびα２（ＩｇＡ２）などのさらなるサブタイプに分けられてもよい。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２種類のうちの１つに割り当てられてもよい。免疫グロブリンは、免疫グロブリンヒンジ領域を介して接続する、２つのＦａｂ分子とＦｃドメインとからなる。
【0041】
本明細書における「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語には、天然配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域が含まれる。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界は、わずかに変動してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシ末端まで伸長するよう定義されている。しかし、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ以上、特に１つまたは２つのアミノ酸の翻訳後切断を受けることがある。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現により宿主細胞によって産生された抗体は、完全長重鎖を含んでいても、完全長重鎖の切断されたバリアントを含んでいてもよい。これは、重鎖の最後の２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）およびリジン（Ｋ４４７、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）である場合に当てはまる。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リシン（Ｌｙｓ４４７）、またはＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）およびリシン（Ｋ４４７）が存在してもよく、または存在していなくてもよい。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１（上も参照されたい）に記載されるような、ＥＵ番号付けシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。本明細書で使用される場合、Ｆｃドメインの「サブユニット」）は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドのうちの１つ、すなわち、安定な自己会合が可能な免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含むポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２およびＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。
【0042】
「Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾」は、ホモ二量体を形成するためのＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドの同一のポリペプチドとの会合を減少または防止する、ペプチド骨格の操作またはＦｃドメインサブユニットの翻訳後修飾である。会合を促進する修飾は、本明細書で使用される場合、特に、会合することが望ましい２つのＦｃドメインサブユニット（すなわち、Ｆｃドメインの第１のサブユニットおよび第２のサブユニット）のそれぞれに対し、別個の修飾を含み、修飾は、２つのＦｃドメインサブユニットの会合を促進するように、互いに相補的である。例えば、会合を促進する修飾は、それぞれ立体的または静電的に望ましい会合を行うように、Ｆｃドメインサブユニットの片方または両方の構造または電荷を変えてもよい。したがって、（ヘテロ）二量化は、第１のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと、第２のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドとの間で起こり、それぞれのサブユニットに融合するさらなる構成要素（例えば、抗原結合部分）が同じではないという意味で、同一ではない場合がある。いくつかの態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメイン内のアミノ酸変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。特定の態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのそれぞれに、別個のアミノ酸変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。
【0043】
「エフェクター機能」という用語は、抗体のアイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、サイトカイン分泌、抗原提示細胞による免疫複合体媒介抗原取り込み、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、およびＢ細胞の活性化が挙げられる。
【0044】
基準ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを達成するために、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、基準ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当技術分野の技術の範囲内にある種々の方法で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアまたはＦＡＳＴＡプログラムパッケージを使用して達成し得る。当業者は、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定し得る。しかしながら、ここでの目的のために、％アミノ酸配列同一性の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを用いてまたはその後ＢＬＯＳＵＭ５０比較行列を用いて生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．ＰｅａｒｓｏｎおよびＤ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ”，ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）“Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ”Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏｎら（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６によって執筆され、ｈｔｔｐ：／／ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌから公的に入手可能である。あるいは、ｈｔｔｐ：／／ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公開サーバを使用して、ｇｇｓｅａｒｃｈ（グローバルタンパク質：タンパク質）プログラムおよびデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して配列を比較し、ローカルではなくグローバルなアライメントを確実に実行し得る。アミノ酸同一性パーセントは、出力アラインメントヘッダ中に与えられる。
【0045】
「活性化Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃドメインの結合に続いて、受容体保有細胞を刺激してエフェクター機能を実行するシグナル伝達事象を誘発するＦｃ受容体である。ヒト活性化Ｆｃ受容体には、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）およびＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）が含まれる。
【0046】
「結合の低減」、例えばＦｃ受容体への結合の減少は、例えばＳＰＲによって測定される、それぞれの相互作用に対する親和性の減少を指す。明確にするために、この用語には、親和性をゼロ（または分析方法の検出限界未満）に減少させること、すなわち相互作用の完全な消失も含まれる。逆に、「結合の増加」とは、それぞれの相互作用に対する結合親和性の増加を指す。
【0047】
「融合した」とは、構成成分（例えばＦａｂ分子およびＦｃドメインサブユニット）がペプチド結合によって、直接または１つ以上のペプチドリンカーを介して連結されることを意味する。
【0048】
ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分と、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１、特にＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１ＲＭＦに特異的に結合する第２の抗原結合部分とを含む。
【0049】
一態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、および配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。
【0050】
一態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、および配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、および配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。
【0051】
特定の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２および配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分、ならびに
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２および配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２および配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分を含む。
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２および配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分、ならびに
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２および配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２および配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分を含む。
【0052】
一態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0053】
一態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む。
【0054】
一態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0055】
一態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号１５の重鎖可変領域配列と、配列番号１６の軽鎖可変領域配列とを含む。
【0056】
いくつかの態様では、第１および／または第２の抗原結合部分はＦａｂ分子である。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変領域または定常領域のいずれかが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である。そのような態様では、第２の抗原結合部分は、好ましくは従来のＦａｂ分子である。
【0057】
二重特異性抗体の第１および第２の抗原結合部分が両方ともＦａｂ分子であり、抗原結合部分の１つ（特に、第１の抗原結合部分）において、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬおよびＶＨが互いに置き換わっているいくつかの態様では、
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が正に帯電したアミノ酸によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸または２１３位のアミノ酸が、負に帯電したアミノ酸によって置換されているか（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、あるいは
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が正に帯電したアミノ酸によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸または２１３位のアミノ酸が、負に帯電したアミノ酸によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が正に帯電したアミノ酸によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸または２１３位のアミノ酸が、負に帯電したアミノ酸によって置換されているか（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、あるいは
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が正に帯電したアミノ酸によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸または２１３位のアミノ酸が、負に帯電したアミノ酸によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0058】
二重特異性抗体は、ｉ）およびｉｉ）に記述されている修飾を両方とも含むことはない。ＶＨ／ＶＬ交換を有する抗原結合部分の定常ドメインＣＬおよびＣＨ１は、互いに置換されていない（すなわち、交換されないままである）。
【0059】
さらに具体的な態様では、
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸または２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されているか（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、あるいは
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸または２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸または２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されているか（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、あるいは
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸または２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0060】
１つのこのような態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸または位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0061】
さらなる態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0062】
好ましい態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0063】
一態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、位置１２３のアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、位置２１３のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0064】
一態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、リシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、位置１２３のアミノ酸は、アルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、位置２１３のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0065】
特定の態様では、上記の態様によるアミノ酸置換が、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬおよび定常ドメインＣＨ１において行われる場合、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬはカッパアイソタイプのものである。
【0066】
いくつかの態様では、第１の抗原結合部分と第２の抗原結合部分が、任意にペプチドリンカーを介して、互いに融合される。
【0067】
いくつかの態様では、第１および第２の抗原結合部分はそれぞれＦａｂ分子であり、（ｉ）第２の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しているか、または（ｉｉ）第１の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。
【0068】
いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に対する一価の結合を提供する。
【0069】
特定の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する単一の抗原結合部分と、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合する２つの抗原結合部分とを含む。したがって、いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合する、第３の抗原結合部分、特にＦａｂ分子、より具体的には従来のＦａｂ分子を含む。第３の抗原結合分子は、第２の抗原結合部分に関して上に記載される特徴の全て（例えば、ＣＤＲ配列、および／または可変領域配列）を、単独でまたは組み合わせて組み込み得る。いくつかの態様では、第３の抗原部分は第１の抗原結合部分と同一である（例えば、従来のＦａｂ分子でもあり、同じアミノ酸配列を含む）。
【0070】
特定の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１のサブユニットおよび第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインをさらに含む。一態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の態様では、ＦｃドメインはＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。別の態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より具体的な態様では、Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付け）にアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。このアミノ酸置換は、インビボでのＩｇＧ４抗体のＦａｂアーム交換を低減する（Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈら，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３８，８４－９１（２０１０）を参照されたい）。さらに特定の態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。特定の好ましい態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号２９に与えられる。
【0071】
第１の抗原結合部分、第２の抗原結合部分、および存在する場合には、第３の抗原結合部分がそれぞれＦａｂ分子であるいくつかの態様では、（ａ）（ｉ）第２の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、かつ第１の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているか、または（ｉｉ）第１の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、かつ第２の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているかのいずれかであり、（ｂ）存在する場合、第３の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
【0072】
特定の態様では、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニットおよび第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間のタンパク質間相互作用が最も広範囲に及ぶ部位は、ＣＨ３ドメインにある。したがって、一態様では、改変は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインの中にある。
【0073】
具体的な態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットの会合を促進する修飾は、いわゆる「ノブ・イントゥ・ホール」修飾であり、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方に「ノブ（ｋｎｏｂ）」修飾およびＦｃドメインの２つのサブユニットの他方に「ホール（ｈｏｌｅ）」修飾を含む。ノブ・イントゥ・ホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、米国特許第７，６９５，９３６号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，６１７－６２１（１９９６）およびＣａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２４８，７－１５（２００１）に記載されている。一般に、この方法は、第１のポリペプチドの界面に突起（「ノブ」）を導入し、第２のポリペプチドの界面に対応する空洞（「ホール」）を導入することを含み、その結果、突起が空洞内に配置され、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げる。突起は、最初のポリペプチドの界面にある小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）と置換することによって構築される。突起に対して同一または同様のサイズの代償空洞は、大きなアミノ酸側鎖を小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）に置き換えることによって、第２のポリペプチドの界面に作り出される。
【0074】
したがって、いくつかの態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸残基が、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それにより、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部に、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部の空洞内に配置可能な隆起が生成され、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸残基が、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それにより、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部に、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部の隆起を配置可能な空洞が生成される。好ましくは、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、より小さな側鎖体積を有する当該アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）およびバリン（Ｖ）からなる群から選択される。突起および空洞は、ポリペプチドをコードする核酸を改変することによって、例えば、部位特異的突然変異誘発によって、またはペプチド合成によって作製し得る。
【0075】
具体的なそのような態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、３６６位のトレオニン残基がトリプトファン残基と置換されており（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、４０７位のチロシン残基がバリン残基と置換されており（Ｙ４０７Ｖ）、場合により、３６６位のトレオニン残基がセリン残基と置換されており（Ｔ３６６Ｓ）、３６８位のロイシン残基がアラニン残基と置換されている（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。さらなる態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、追加的に３５４位のセリン残基がシステイン残基と置換されており（Ｓ３５４Ｃ）または３５６位のグルタミン酸残基がシステイン残基と置換されており（Ｅ３５６Ｃ）（特に、位置３５４のセリン残基がシステイン残基と置換されており）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、追加的に３４９位のチロシン残基がシステイン残基と置換されている（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。好ましい態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0076】
いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合および／またはエフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。
【0077】
特定の態様では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。一態様では、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一態様では、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な態様では、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であり、さらに具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａ、最も具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一態様では、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介細胞障害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびサイトカイン分泌の群から選択される１つ以上である。特定の態様では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。
【0078】
典型的には、同じ１つ以上のアミノ酸置換が、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのそれぞれに存在する。一態様では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性を低減する。一態様では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体に対するＦｃドメインの結合親和性を少なくとも２倍、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍低下させる。
【0079】
一態様では、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な態様では、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５およびＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。いくつかの態様では、Ｆｃドメインはアミノ酸置換Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0080】
そのような一態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な態様では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。一態様では、Ｆｃドメインは、位置Ｐ３２９にアミノ酸置換を含み、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１から選択される位置にさらなるアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な態様では、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４およびＬ２３５位にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。さらに特定の態様では、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」または「ＬＡＬＡＰＧ」）を含む。具体的には、好ましい態様では、Ｆｃドメインの各サブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを含み（ＫａｂａｔＥＵインデックス番号付け）、すなわち、Ｆｃドメインの第１のサブユニットおよび第２のサブユニットの各々において、２３４位のロイシン残基がアラニン残基で置き換えられており（Ｌ２３４Ａ）、２３５位のロイシン残基がアラニン残基で置き換えられており（Ｌ２３５Ａ）、３２９位のプロリン残基がグリシン残基で置き換えられている（Ｐ３２９Ｇ）（ＫａｂａｔＥＵインデックスによる番号付け）。そのような一態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
【0081】
好ましい態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、および配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変領域または定常領域のいずれか、特に可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分、
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、および配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、および配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分であって、第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分が、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分、
（ｉｉｉ）第１のサブユニットおよび第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、
第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、Ｆｃドメインを含む。
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、および配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、および配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変領域または定常領域のいずれか、特に可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分、
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に特異的に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、および配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、および配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分であって、第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分が、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分および第３の抗原結合部分、
（ｉｉｉ）第１のサブユニットおよび第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、
第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、Ｆｃドメインを含む。
【0082】
一態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0083】
一態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む。
【0084】
一態様では、第２および第３の抗原結合部分は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0085】
一態様では、第２および第３の抗原結合部分は、配列番号１５の重鎖可変領域配列と、配列番号１６の軽鎖可変領域配列とを含む。
【0086】
上記の態様によるＦｃドメインは、Ｆｃドメインに関連して上記で説明した特徴の全てを、単独でまたは組み合わせて組み込み得る。
【0087】
一態様では、抗原結合部分およびＦｃ領域は、ペプチドリンカー、特に、配列番号１８および配列番号２０にあるようなペプチドリンカーによって、互いに融合している。
【0088】
一態様では、（ｉｉ）の第２および第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸はリシン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、位置１２３のアミノ酸はリシン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）で、特にアルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、（ｉｉ）の第２および第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）、位置２１３のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
【0089】
一態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番１７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号１８の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号１９の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号２０の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一の配列を含むポリペプチドと、を含む。
【0090】
一態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号１７の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号１８の配列を含むポリペプチドと、配列番号１９の配列を含むポリペプチドと、配列番号２０の配列を含むポリペプチドとを含む。
【0091】
本明細書におけるＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと組み合わせて使用される。
【0092】
本明細書で使用される場合、「４－１ＢＢ」または「ＣＤ１３７」という用語は、特に明記しない限り、霊長類（例えばヒト）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物が起源の任意の天然の４－１ＢＢを指す。この用語は、「完全長」の、未処理４－１ＢＢ、および、細胞内での処理によりもたらされる任意の形態の４－１ＢＢを包含する。この用語は、４－１ＢＢの天然に存在する多様体、例えば、スプライス多様体または対立遺伝子多様体も包含する。ヒト４－１ＢＢのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ受け入れ番号Ｑ０７０１１（エントリーバージョン１８５）に示されている。
【0093】
「４－１ＢＢＬ」または「４－１ＢＢリガンド」または「ＣＤ１３７Ｌ」は、Ｔ細胞の増殖およびサイトカイン産生を共刺激し得る共刺激ＴＮＦリガンドファミリーメンバーである。共刺激ＴＮＦファミリーリガンドは、それらの対応するＴＮＦ受容体との相互作用時にＴＣＲシグナルを共刺激し得、それらの受容体との相互作用は、Ｔ細胞活性化をもたらすシグナル伝達カスケードを開始するＴＮＦＲ関連因子（ＴＲＡＦ）の動員をもたらす。４－１ＢＢＬは、ＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＵｎｉＰｒｏｔ受け入れ番号Ｐ４１２７３（エントリーバージョン１５３）に示されるアミノ酸配列を有する完全長または完全長の４－１ＢＢＬは、細胞表面に三量体を形成することが記載されている。三量体の形成は、４－１ＢＢＬの外部ドメインの特異的なモチーフによって可能となる。モチーフは、本明細書では「三量体化領域」と表示される。ヒト４－１ＢＢＬ配列のアミノ酸５０～２５４（配列番号３０）は４－１ＢＢＬの外部ドメインを形成するが、その断片でさえ三量体を形成し得る。
【0094】
「外部ドメイン」は、細胞外空間（すなわち、細胞の外側の空間）に広がる膜タンパク質のドメインであり、「細胞外ドメイン」とも呼ばれる。本明細書で定義される４－１ＢＢＬの外部ドメインは、細胞外空間（細胞外ドメイン）内に伸長する４－１ＢＢＬタンパク質、特にヒト４－１ＢＢＬタンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ４１２７３（エントリーバージョン１５３））の部分を指すが、三量体化および対応する受容体４－１ＢＢへの結合に関与するより短い部分またはその断片も含む。
【0095】
したがって、「４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片」という用語は、４－１ＢＢＬの細胞外ドメイン、または４－１ＢＢに結合し、三量体化が可能なその部分を指す。本発明の特定の態様では、「４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片」という用語は、配列番号３４（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸５２～２５４）、配列番号３１（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸７１～２５４）、配列番号３３（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８０～２５４）、配列番号３２（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８５～２５４）、配列番号３５（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸７１～２４８）、配列番号３６（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８５～２４８）、配列番号３７（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８０～２４８）および配列番号３８（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸５２～２４８）から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。
【0096】
本明細書で使用される場合、「抗原結合分子」という用語は、その最も広い意味で、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の例は、抗体、抗体断片および足場抗原結合タンパク質である。
【0097】
プロリルエンドペプチダーゼＦＡＰまたはセプラーゼ（ＥＣ３．４．２１）としても知られる「線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）」は、特に明記しない限り、霊長類（ヒトなど）、非ヒト霊長類（カニクイザルなど）、げっ歯類（マウスおよびラットなど）などの哺乳類を含む、脊椎動物由来のネイティブＦＡＰを指す。この用語は、「全長」、未加工のＦＡＰも、細胞内でのプロセシングから得られるいかなる形態のＦＡＰも包含する。この用語は、ＦＡＰの天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体または対立遺伝子変異体も包含する。ヒトＦＡＰのアミノ酸配列をＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）受け入れ番号Ｑ１２８８４（エントリーバージョン１９７）に示す。
【0098】
ヒトＦＡＰの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は、アミノ酸２６位から７６０位まで伸びている。本明細書で使用される場合、ＦＡＰに結合する抗原結合部分は、好ましくはＦＡＰの細胞外ドメインに結合する。例示的な抗ＦＡＰ結合分子は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１２／０２０００６に記載されている。
本発明で使用するための特に有用な４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／０７５２７８またはＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／１５６２９１（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
本発明で使用するための特に有用な４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／０７５２７８またはＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／１５６２９１（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【0099】
一態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬ（特にヒト４－１ＢＢＬ）またはその断片、特に４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片を含む。一態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメインまたはその断片（すなわち、４－１ＢＢＬの第１、第２および第３の外部ドメイン、またはそれらの断片）を含む。一態様では、４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片は、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７および配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一態様では、その断片の４－１ＢＢＬの外部ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一態様では、４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片は、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。一態様では、４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片は、配列番号３５のアミノ酸配列からなる。
【0100】
特定の態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメインまたはその断片を含む分子であり、４－１ＢＢＬの外部ドメインまたはその断片は、配列番号３５のアミノ酸配列を含む（またはそれからなる）。
【0101】
一態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメインまたはその断片（すなわち、４－１ＢＢＬの第１、第２および第３の外部ドメインまたはその断片）を含み、４－１ＢＢＬの第１および第２の外部ドメインまたはその断片は、場合によりペプチドリンカーを介して互いに融合しており（すなわち、４－１ＢＢＬの第１および第２の外部ドメインまたはその断片は同じポリペプチド上にある）、４－１ＢＢＬの第３の外部ドメインまたはその断片は、４－１ＢＢＬの第１または第２の外部ドメインまたはその断片に融合していない（すなわち、４－１ＢＢＬの第３の外部ドメインまたはその断片は、４－１ＢＢＬの第１および第２の外部ドメインまたはその断片とは別個のポリペプチド上にある）。
【0102】
一態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの第１および第２の外部ドメインまたはその断片を含む第１のポリペプチドと、４－１ＢＢＬの第３の外部ドメインまたはその断片を含む第２のポリペプチドとを含む分子である。一態様では、４－１ＢＢＬの第１および第２の外部ドメインまたはその断片は、ペプチドリンカー、特に（Ｇ４Ｓ）２ペプチドリンカーを介して融合している。一態様では、第１および第２のポリペプチドは、ジスルフィド結合によって連結している。一態様では、第１のポリペプチドは、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を含む。一態様では、第１のポリペプチドは、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。一態様では、第２のポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一態様では、第２のポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。
【0103】
さらなる態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、腫瘍関連抗原、特に腫瘍間質抗原（すなわち、腫瘍間質に関連する抗原）、より具体的には腫瘍線維芽細胞抗原（すなわち、がん関連線維芽細胞上に発現される抗原）に特異的に結合する抗原結合部分を含む。
【0104】
好ましい態様では、抗原結合部分は線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、特にヒトＦＡＰに特異的に結合する。
【0105】
一態様では、抗原結合部分はＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である。
【0106】
したがって、特定の態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメインまたはその断片と、腫瘍関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部分、特にＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分とを含む抗原結合分子である。
【0107】
一態様では、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分は、配列番号３９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号４０のＨＣＤＲ２および配列番号４１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４３のＬＣＤＲ２および配列番号４４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0108】
一態様では、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0109】
一態様では、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分は、配列番号４５の重鎖可変領域配列および配列番号４６の軽鎖可変領域配列を含む。
【0110】
さらなる態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、第１および第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインを含む。
【0111】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストに含まれるＦｃドメインは、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体に含まれるＦｃドメインに関して上記した特徴の全てを、単独でまたは組み合わせて組み込み得る。
【0112】
特に、一態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストに含まれるＦｃドメインはＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の態様では、ＦｃドメインはＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。さらに特定の態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。特定の好ましい態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
【0113】
特定の態様では、Ｆｃドメインは、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体に関して上述したように、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する修飾（「ノブ・イントゥ・ホール」修飾など）を含む。
【0114】
さらなる特定の態様では、Ｆｃドメインは、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体に関して上述したように、Ｆｃ受容体および／またはエフェクター機能（例えば、「Ｐ３２９ＧＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」または「ＬＡＬＡＰＧ」アミノ酸置換）への結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。
【0115】
特に好ましい態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストに含まれるＦｃドメインはヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインであり、Ｆｃドメインの各サブユニットはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（ＫａｂａｔＥＵインデックス番号付け）を含む。
【0116】
一態様では、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニストは、
（ｉ）４－１ＢＢＬの３つの外部ドメインまたはその断片、
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分、特に、Ｆａｂ分子である抗原結合部分、および
（ｉｉｉ）第１および第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、特に、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変、ならびに／またはＦｃ受容体への結合および／もしくはエフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む、Ｆｃドメインを含む抗原結合分子である。
（ｉ）４－１ＢＢＬの３つの外部ドメインまたはその断片、
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分、特に、Ｆａｂ分子である抗原結合部分、および
（ｉｉｉ）第１および第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、特に、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変、ならびに／またはＦｃ受容体への結合および／もしくはエフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む、Ｆｃドメインを含む抗原結合分子である。
【0117】
特定の態様では、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニストは、
（ｉ）４－１ＢＢＬの第１、第２および第３の外部ドメイン、またはそれらの断片、
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分であって、Ｆａｂ分子である抗原結合部分、
（ｉｉｉ）第１および第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、特に、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変、ならびに／またはＦｃ受容体への結合および／もしくはエフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む、Ｆｃドメイン、
（ｉｖ）ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメイン
を含む抗原結合分子であり、
抗原結合分子が、
（ａ）（ａ１）４－１ＢＢＬの第１の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端において４－１ＢＢＬの第２の外部ドメインまたはその断片のＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの第１の外部ドメインまたはその断片、（ａ２）４－１ＢＢＬの第２の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端においてＣＬドメインのＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの第２の外部ドメインまたはその断片、（ａ３）ＣＬドメインであって、そのＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの１つ（例えば、第１のサブユニット）のＮ末端に融合したＣＬドメイン、および（ａ４）Ｆｃドメインのサブユニットのうちの１つ（例えば、第１のサブユニット）を含む、第１のポリペプチド、
（ｂ）（ｂ１）４－１ＢＢＬの第３の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端においてＣＨ１ドメインのＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの第３の外部ドメインまたはその断片と、（ｂ２）ＣＨ１ドメインとを含む、第２のポリペプチド、
（ｃ）（ｃ１）Ｆａｂ分子の重鎖であって、そのＣ末端においてＦｃドメインのもう一方のサブユニット（例えば、第２のサブユニット）のＮ末端に融合したＦａｂ分子の重鎖と、（ｃ２）Ｆｃドメインのもう一方のサブユニット（例えば、第２のサブユニット）とを含む、第３のポリペプチド、ならびに
（ｄ）Ｆａｂ分子の軽鎖を含む第４のポリペプチドから構成される。
（ｉ）４－１ＢＢＬの第１、第２および第３の外部ドメイン、またはそれらの断片、
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分であって、Ｆａｂ分子である抗原結合部分、
（ｉｉｉ）第１および第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、特に、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進する改変、ならびに／またはＦｃ受容体への結合および／もしくはエフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む、Ｆｃドメイン、
（ｉｖ）ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメイン
を含む抗原結合分子であり、
抗原結合分子が、
（ａ）（ａ１）４－１ＢＢＬの第１の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端において４－１ＢＢＬの第２の外部ドメインまたはその断片のＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの第１の外部ドメインまたはその断片、（ａ２）４－１ＢＢＬの第２の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端においてＣＬドメインのＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの第２の外部ドメインまたはその断片、（ａ３）ＣＬドメインであって、そのＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの１つ（例えば、第１のサブユニット）のＮ末端に融合したＣＬドメイン、および（ａ４）Ｆｃドメインのサブユニットのうちの１つ（例えば、第１のサブユニット）を含む、第１のポリペプチド、
（ｂ）（ｂ１）４－１ＢＢＬの第３の外部ドメインまたはその断片であって、そのＣ末端においてＣＨ１ドメインのＮ末端に融合した４－１ＢＢＬの第３の外部ドメインまたはその断片と、（ｂ２）ＣＨ１ドメインとを含む、第２のポリペプチド、
（ｃ）（ｃ１）Ｆａｂ分子の重鎖であって、そのＣ末端においてＦｃドメインのもう一方のサブユニット（例えば、第２のサブユニット）のＮ末端に融合したＦａｂ分子の重鎖と、（ｃ２）Ｆｃドメインのもう一方のサブユニット（例えば、第２のサブユニット）とを含む、第３のポリペプチド、ならびに
（ｄ）Ｆａｂ分子の軽鎖を含む第４のポリペプチドから構成される。
【0118】
抗原結合分子の様々なドメイン間の融合は、好ましくはペプチドリンカーを介したものであり、ペプチドリンカーはまた、免疫グロブリンヒンジ領域を含むか、または免疫グロブリンヒンジ領域（の一部）からなり得る。特に、４－１ＢＢＬの第１および第２の外部ドメインまたはその断片の融合は、ペプチドリンカー、特に（Ｇ４Ｓ）２リンカーを介する。
【0119】
一態様では、第１および第２のポリペプチドは、ジスルフィド結合、特にＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合によって互いに連結されている。
【0120】
一態様では、第１のポリペプチドのＣＬドメインにおいて、１２４位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔに従う）はリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって独立して置換されており、１２３位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔに従う）はリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）によって独立して置換されており、第２のポリペプチドのＣＨ１ドメインにおいて、１４７位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔに従う）はグルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって独立して置換されており、２１３位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔに従う）はグルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）によって独立して置換されている。
【0121】
一態様では、第１のポリペプチドのＣＬドメインにおいて、１２４位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔに従う）はリジン（Ｋ）で置換されており、１２３位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔに従う）はリジン（Ｋ）で置換されており、第２のポリペプチドのＣＨ１ドメインにおいて、１４７位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔＥＵインデックスに従う）はグルタミン酸（Ｅ）で置換されており、２１３位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔＥＵインデックスに従う）はグルタミン酸（Ｅ）で置換されている。
【0122】
特定の態様では、第１のポリペプチドのＣＬドメインにおいて、１２４位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔに従う）はリジン（Ｋ）で置換されており、１２３位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔに従う）はアルギニン（Ｒ）で置換されており、第２のポリペプチドのＣＨ１ドメインにおいて、１４７位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔＥＵインデックスに従う）はグルタミン酸（Ｅ）で置換されており、２１３位のアミノ酸（番号付けはＫａｂａｔＥＵインデックスに従う）はグルタミン酸（Ｅ）で置換されている。
【0123】
特定の態様では、上記の態様によるアミノ酸置換が第１および第２のポリペプチドのＣＬおよびＣＨ１ドメインで行われる場合、第１のポリペプチドのＣＬドメインはカッパアイソタイプである。
【0124】
一態様では、ＣＬドメインはヒトＣＬドメイン、特にカッパアイソタイプのヒトＣＬドメインである。さらなる態様では、ＣＨ１ドメインは、ヒトＣＨ１ドメインであり、具体的にはγアイソタイプのヒトＣＨ１ドメインであり、最も具体的にはγ１アイソタイプのヒトＣＨ１ドメインである。
【0125】
一態様では、第１のポリペプチドは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を含む。
【0126】
一態様では、第２のポリペプチドは、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0127】
一態様では、第３のポリペプチドは、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0128】
一態様では、第４のポリペプチドは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0129】
一態様では、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニストは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドと、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第３のポリペプチドと、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む第４のポリペプチドとを含む抗原結合分子である。
【0130】
他の態様では、４－１ＢＢアゴニストは、抗４－１ＢＢ抗体、特に抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ二重特異性抗体であり得る。
【0131】
「がん」という用語は、制御されていない細胞増殖を典型的に特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す。
【0132】
がんの例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。がんの非限定的な例としては、白血病などの血液がん、膀胱がん、脳がん、頭頸部がん、膵臓がん、胆管がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、胃がん、前立腺がん、皮膚がん、扁平上皮がん、肉腫、骨がん、および腎臓がんが挙げられる。他の細胞増殖障害としては、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、睾丸、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、（中枢および末梢）神経系、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、および泌尿生殖器系に位置する腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。前がん状態または病変および癌転移も含まれる。
【0133】
本発明のＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用およびキットのいくつかの態様では、がんは血液がんである。血液がんの非限定的な例としては、白血病（例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ））、リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ））、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、および骨髄増殖性疾患が挙げられる。
【0134】
特定の態様では、がんは、血液がん（白血病など）、腎臓がん、膀胱がん、皮膚がん、肺がん、結腸直腸がん、乳がん、脳がん、頭頸部がん、および前立腺がんからなる群から選択される。
【0135】
特定の態様では、がんは血液がん、特に白血病、最も具体的には急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【0136】
好ましい態様では、がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【0137】
さらなる特定の態様では、がんは骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。
【0138】
いくつかの態様では、がんはＷＴ１陽性がんである。「ＷＴ１陽性がん」または「ＷＴ１発現がん」とは、がん細胞でのＷＴ１の発現または過剰発現により特徴づけられるがんを意味する。ＷＴ１の発現は、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ＷＴ１ ｍＲＮＡレベルの測定）、免疫組織化学（ＩＨＣ）またはウエスタンブロットアッセイによって決定され得る。一態様では、がんはＷＴ１を発現する。一態様では、がんは、ＷＴ１に特異的な抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定されるように、腫瘍細胞の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、または少なくとも８０％でＷＴ１を発現する。
【0139】
いくつかの態様では、がんは、ＦＡＰを発現する細胞（例えば、線維芽細胞）を含む。いくつかの態様では、がんは、ＦＡＰを、特に腫瘍間質において発現する。
【0140】
本明細書中の「患者」、「対象」、または「個体」は、がんの１つ以上の徴候、症状、または他の指標を経験している、または経験した、治療に適格な任意の単一のヒト対象である。いくつかの態様では、患者は、がんを有するか、またはがんを有すると診断されている。患者は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体または別の薬物で以前に治療されていても、治療されていなくてもよい。特定の態様では、患者は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体で以前に治療されていない。患者は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体療法が開始される前に、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体以外の１つ以上の薬物を含む療法で治療されていてもよい。特定の態様では、患者は、ＨＬＡ－Ａ２対立遺伝子、特にＨＬＡ－Ａ＊０２：０１対立遺伝子を保有する。
【0141】
本明細書で使用される場合、「治療」（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）（およびその文法上の変化形、「治療する」（ｔｒｅａｔ）または「治療すること」（ｔｒｅａｔｉｎｇ））は、治療される対象における疾患の自然経過を変えるための臨床的介入を指し、予防のためにまたは臨床病理の経過中に実施し得る。治療の所望の効果としては、限定されないが、疾患の発症または再発を予防すること、症候の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減弱、転移を予防すること、疾患進行速度を低下させること、病状の寛解または緩和、および回復または予後の改善が挙げられる。
【0142】
ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、有効量で投与される。
【0143】
薬剤、例えば、医薬組成物の「有効量」は、所望の治療結果または予防結果を達成するために必要な投薬量および所要期間で有効な量を指す。
【0144】
一態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の投与は、特にがんの部位で、Ｔ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞の活性化をもたらす。活性化は、Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞の分化、Ｔ細胞によるサイトカイン分泌、Ｔ細胞からの細胞傷害性エフェクター分子の放出、Ｔ細胞の細胞傷害活性、およびＴ細胞による活性化マーカーの発現を含み得る。一態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の投与は、がんの部位で、Ｔ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加をもたらす。
【0145】
上記および本明細書に記載される、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用またはキットのいくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療または投与は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体単独による治療またはＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体単独の投与と比較して、特にがんの部位におけるＴ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞の活性化の増大をもたらす。特定の態様では、活性化は、Ｔ細胞の細胞傷害性活性（特に、がん細胞の溶解）、および／またはＴ細胞によるサイトカイン（特に、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、および／またはインターフェロン－γ）分泌を含む。
【0146】
上記および本明細書に記載される、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用またはキットのいくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療または投与は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体単独による治療またはＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体単独の投与と比較して、ナイーブＴ細胞のメモリーＴ細胞への分化の増大を特にがん部位においてもたらす。一態様では、分化は、例えばフローサイトメトリーを使用して、ＣＤ４５ＲＡ発現の測定によって検出される。
【0147】
上記および本明細書に記載される、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用またはキットのいくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療または投与は、個体において応答をもたらし得る。いくつかの態様では、応答は完全な応答であり得る。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後に持続する応答であり得る。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後に持続する完全な応答であり得る。いくつかの態様では、応答は部分応答であり得る。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後に持続する部分応答であり得る。いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療または投与は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体単独（すなわち、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストなし）による治療または投与と比較して、応答を改善し得る。
【0148】
いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの治療または投与は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体単独（すなわち、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストなし）により治療される対応患者集団と比較して、患者集団における応答速度を増大させ得る。
【0149】
本発明の併用療法は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む。
【0150】
本明細書で使用される場合、「組合せ」（および「組み合わせる」または「組み合わせた」などのその文法的変形）は、本発明によるＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－ａ１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの組み合わせを包含し、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、同じかまたは異なる容器内、同じかまたは異なる医薬製剤内にあり、一緒にまたは別々に投与され、任意の順序で同時にまたは順次投与され、同じかまたは異なる経路によって投与されるが、ただし、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、体内でそれらの生物学的効果を同時に発揮し得るものとする。例えば、本発明によるＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを「組み合わせる」ことは、最初に特定の医薬製剤中でＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体を投与し、続いて別の医薬製剤中で４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを投与すること、またはその逆を意味し得る。
【0151】
ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、当技術分野で公知の任意の適切な様式で投与され得る。一態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを連続的に（異なる時間に）投与される。別の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは同時に（一緒に）投与される。理論に拘束されることを望むものではないが、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストをＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の前におよび／またはＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体と同時に投与することが有利なことがある。いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとは別個の組成物中に存在する。いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと同じ組成物中に存在する。
【0152】
ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、任意の適切な経路によって投与し得、同じ投与経路または異なる投与経路によって投与し得る。いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植により、吸入により、髄腔内、脳室内、または鼻腔内で投与される。特定の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体は静脈内投与される。いくつかの態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、局所投与、経口投与、経皮投与、腹腔内投与、眼窩内投与、埋め込み投与、吸入投与、髄腔内投与、心室内投与または鼻腔内投与される。特定の態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは静脈内投与される。疾患の予防または治療のために、有効量のＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを投与してもよい。ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および／または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの適切な投与経路および投与量は、治療される疾患の種類、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体の種類、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの種類、疾患の重症度および経過、個体の臨床状態、個体の病歴および治療に対する応答、ならびに主治医の裁量に基づいて決定され得る。投薬は、その投与が短期かまたは長期かに部分的に依存して、任意の適切な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射により行い得る。本明細書では、単回投与または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投薬スケジュールが企図される。ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、一度にまたは一連の治療にわたって患者に適切に投与される。
【0153】
本発明の組合せは、単独で、または他の薬剤と組み合わせて治療に用い得る。例えば、本発明の組合せは、少なくとも１つの追加の治療薬と共投与され得る。特定の態様では、追加の治療薬は、抗がん剤、例えば、化学療法剤、腫瘍細胞増殖の阻害剤、または腫瘍細胞アポトーシスのアクチベーターである。本発明の組合せは、放射線療法とも組み合わせ得る。
【0154】
本明細書で提供されるキットは、典型的には、１つ以上の容器と、容器上もしくは容器に関連するラベルまたは添付文書とを含む。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、それだけで、または状態を治療、予防および／または診断するために有効な別の組成物との組合せで組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿通可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも一つの活性剤は、本発明の組合せに使用されるＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体である。別の活性薬剤は、本発明の組合せに使用される４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストであり、これは二重特異性抗体のように同じ組成物および容器中にあってもよく、または異なる組成物および容器中に提供されてもよい。ラベルまたは添付文書は、本組成物ががん等の選択された症状を治療するために使用されることを示す。
【0155】
一態様では、本発明は、（ａ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体および（ｂ）４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを同じ容器または別々の容器に含む、がんの治療を意図したキットであって、場合により（ｃ）がんを治療するための方法としての併用治療の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書をさらに含むキットを提供する。さらに、キットは、（ａ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１×ＣＤ３二重特異性抗体を含む組成物を含有する第１の容器（ｂ）４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含む組成物を含有する第２の容器を含み得、場合により（ｃ）その中に含有される組成物を含む第３の容器であって、組成物がさらなる細胞毒性薬または他の治療薬を含む、第３の容器を含み得る。本発明のこれらの態様におけるキットは、組成物ががんを治療するために使用し得ることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、またはさらに、キットは、薬学的に許容されるバッファー（例えば静菌された注射用蒸留水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液またはデキストロース溶液を含む第３の（または、第４の）容器をさらに含んでもよい。本製造品は、他のバッファー、希釈剤、フィルタ、針およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに備えてもよい。
【0156】
【表1】
【図面の簡単な説明】
【0157】
【図1】（Ａ）実施例で使用されるＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１標的Ｔ細胞二重特異性（ＴＣＢ）抗体分子（「ＷＴ１ＴＣＢ」）の概略図分子は、ＣＤ３に対する単一の抗原結合部分、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に対する２つの抗原結合部分、およびＦｃドメインを含む。（Ｂ）実施例において使用されるＦＡＰ標的化４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト（「ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ」）の概略図。分子は、４－１ＢＢＬ外部ドメイン三量体、ＦＡＰに対する抗原結合部分およびＦｃドメインを含む。黒丸：ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメインの修飾。＊：ＣＨおよびＣＬドメインにおいて導入される反対の電荷のアミノ酸。
【図2】ＷＴ１－ＴＣＢを介した、ＨＬＡ－Ａ＊０２＋ＡＭＬ細胞の特異的溶解は、種々のレベルのヒトＦＡＰを発現するＮＩＨ－３Ｔ３細胞株の存在下でＦＡＰ－４－１ＢＢＬによって増強される（ｎ＝６）。バーは平均±ＳＥＭを表す。
【図3】ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬの組合せにおけるＴ細胞増殖の改善（ｎ＝６）。バーは平均±ＳＥＭを表す。（Ａ）ＣＤ３＋Ｔ細胞増殖対０日目、（Ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖対０日目、（Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖対０日目。
【図4】（Ａ－Ｂ）ＦＡＰ発現ＮＩＨ－３Ｔ３細胞株の存在下でのＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬの組合せにおけるＣＤ３＋Ｔ細胞上のＴ細胞活性化マーカーＣＤ２５（Ａ）および４－１ＢＢ（Ｂ）の発現増加。（Ｃ）ＷＴ１－ＴＣＢによるＰＤ－１の発現増加は、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬによって改変されなかった（ｎ＝６）。（Ｄ－Ｆ）ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬの組合せにおけるグランザイムＢ（Ｄ）、ＩＦＮγ（Ｅ）およびＴＮＦα（Ｆ）の分泌を増大させた（ｎ＝４）。バーは平均±ＳＥＭを表す。
【図5】（Ａ）ＷＴ１－ＴＣＢと、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬの存在下および非存在下での長期培養系におけるＴ細胞機能性のモニタリングの概略図。（Ｂ－Ｃ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞傷害性および増殖の増加によって観察されるように、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬとの共刺激により、Ｔ細胞機能性が延長される（ｎ＝２～５）。バーは平均±ＳＥＭを表す。統計学的検定：Ｔｕｋｅｙの多重比較検定による二元配置分散分析。＊ｐ＜０．０５．
【0158】
実施例
以下は、本発明の方法および組成物の実施例である。上に提供された一般的な説明が与えられると、様々な他の態様が実施され得ることが理解される。
以下は、本発明の方法および組成物の実施例である。上に提供された一般的な説明が与えられると、様々な他の態様が実施され得ることが理解される。
【0159】
ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬの組合せ
実験セットアップ
患者サンプルを用いた細胞傷害性アッセイ
初回診断からの初代ＨＬＡ－Ａ＊０２＋ＡＭＬ患者サンプルを、１２ウェルプレート中で、ウェルあたり１．２ｘ１０５個のマウスＭＳ５細胞（６０Ｇｙで照射）のフィーダー層上で１．５ｘ１０６細胞／ｍＬの濃度で２日間予備培養した。細胞傷害性評価のために、４．０ｘ１０４個のＡＭＬ細胞を、その後、種々のレベルでヒトＦＡＰを安定に発現するＮＩＨ－３Ｔ３線維芽細胞株（３Ｔ３ｈｕＦＡＰｈｉｇｈまたは３Ｔ３ｈｕＦＡＰｌｏｗ）とともに９６ウェルプレートにおいて８．０ｘ１０４個の健康なドナーＴ細胞（ＰａｎＴ細胞単離キットを使用して負に単離した、ヒト；ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ，ベルギッシュグラートバハ、ドイツ）と共培養した。ＦＡＰ発現を欠く野生型ＮＩＨ－３Ｔ３細胞を対照として含めた。ＮＩＨ－３Ｔ３細胞株に５０Ｇｙを照射し、ウェルあたり１．０×１０４個の細胞を添加した。共培養物を１μｇ／ｍＬのＷＴ１－ＴＣＢおよび２ｎＭのＦＡＰ－４－１ＢＢＬとともにインキュベートした。非標的化対照抗体構築物（ＤＰ４７－ＴＣＢおよびＤＰ４７－４１ＢＢＬ）との組合せを対照として含めた。細胞傷害性アッセイを、（１）ＡＭＬ細胞の特異的溶解、（２）Ｔ細胞増殖、（３）Ｔ細胞活性化、および（４）Ｔ細胞のサイトカイン分泌について９６時間後に分析した。
実験セットアップ
患者サンプルを用いた細胞傷害性アッセイ
初回診断からの初代ＨＬＡ－Ａ＊０２＋ＡＭＬ患者サンプルを、１２ウェルプレート中で、ウェルあたり１．２ｘ１０５個のマウスＭＳ５細胞（６０Ｇｙで照射）のフィーダー層上で１．５ｘ１０６細胞／ｍＬの濃度で２日間予備培養した。細胞傷害性評価のために、４．０ｘ１０４個のＡＭＬ細胞を、その後、種々のレベルでヒトＦＡＰを安定に発現するＮＩＨ－３Ｔ３線維芽細胞株（３Ｔ３ｈｕＦＡＰｈｉｇｈまたは３Ｔ３ｈｕＦＡＰｌｏｗ）とともに９６ウェルプレートにおいて８．０ｘ１０４個の健康なドナーＴ細胞（ＰａｎＴ細胞単離キットを使用して負に単離した、ヒト；ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ，ベルギッシュグラートバハ、ドイツ）と共培養した。ＦＡＰ発現を欠く野生型ＮＩＨ－３Ｔ３細胞を対照として含めた。ＮＩＨ－３Ｔ３細胞株に５０Ｇｙを照射し、ウェルあたり１．０×１０４個の細胞を添加した。共培養物を１μｇ／ｍＬのＷＴ１－ＴＣＢおよび２ｎＭのＦＡＰ－４－１ＢＢＬとともにインキュベートした。非標的化対照抗体構築物（ＤＰ４７－ＴＣＢおよびＤＰ４７－４１ＢＢＬ）との組合せを対照として含めた。細胞傷害性アッセイを、（１）ＡＭＬ細胞の特異的溶解、（２）Ｔ細胞増殖、（３）Ｔ細胞活性化、および（４）Ｔ細胞のサイトカイン分泌について９６時間後に分析した。
【0160】
ＷＴ１－ＴＣＢによるＡＭＬ細胞の特異的溶解を、フローサイトメトリーによって決定される生存ＡＭＬ細胞数に基づいて、ＤＰ４７－ＴＣＢを含有するそれぞれの対照と比較して計算した。９６時間後のＴ細胞の増殖を、生存Ｔ細胞数に基づいて０日目と比較して計算した。Ｔ細胞活性化を、ＣＤ２５、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＰＤ－１（ＣＤ２７９）の発現の分析によってモニタリングした。中央蛍光強度（ＭＦＩ）比を、アイソタイプ染色対照に対して計算した。細胞傷害性アッセイの細胞培養上清を、ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘヒトＣＤ８／ＮＫパネル（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）を製造者の説明書に従って使用して分泌サイトカインについて分析した。
【0161】
長期培養実験におけるＦＡＰ－４－１ＢＢＬ
１４日間の長期培養系については、３Ｔ３ｈｕＦＡＰｈｉｇｈ細胞に５０Ｇｙを照射し、３．０ｘ１０５細胞を、実験開始の１日前にフィーダー層として６ウェルプレートに播種した。その後、１．８×１０６個の健康なドナーＴ細胞（ＰａｎＴ細胞単離キット．ｈｕｍａｎ，；ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して負に単離した）を、ＡＭＬ細胞株ＳＫＭ１（３．６ｘ１０６個の細胞）および０．１μｇ／ｍＬのＷＴ１－ＴＣＢ±２ｎＭＦＡＰ－４－１ＢＢＬと一緒に添加した。培養３日後、ＳＫＭ１細胞、ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬを補充した。７日目に、ＣＤ３３ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ，ｈｕｍａｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で標的細胞を枯渇させることによって培養物からＴ細胞を単離し、以下に記載されるように機能的に試験した。残りのＴ細胞を、上記のようにＳＫＭ１、ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬを用いてさらに７日間、３Ｔ３ｈｕＦＡＰｈｉｇｈ細胞上で再培養した。
１４日間の長期培養系については、３Ｔ３ｈｕＦＡＰｈｉｇｈ細胞に５０Ｇｙを照射し、３．０ｘ１０５細胞を、実験開始の１日前にフィーダー層として６ウェルプレートに播種した。その後、１．８×１０６個の健康なドナーＴ細胞（ＰａｎＴ細胞単離キット．ｈｕｍａｎ，；ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して負に単離した）を、ＡＭＬ細胞株ＳＫＭ１（３．６ｘ１０６個の細胞）および０．１μｇ／ｍＬのＷＴ１－ＴＣＢ±２ｎＭＦＡＰ－４－１ＢＢＬと一緒に添加した。培養３日後、ＳＫＭ１細胞、ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬを補充した。７日目に、ＣＤ３３ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ，ｈｕｍａｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で標的細胞を枯渇させることによって培養物からＴ細胞を単離し、以下に記載されるように機能的に試験した。残りのＴ細胞を、上記のようにＳＫＭ１、ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬを用いてさらに７日間、３Ｔ３ｈｕＦＡＰｈｉｇｈ細胞上で再培養した。
【0162】
機能試験のために、０日目、７日目および１４日目に単離されたＴ細胞を、０．０１μｇ／ｍＬのＷＴ１－ＴＣＢまたは対照抗体（ＤＰ４７－ＴＣＢ）の存在下、エフェクター：標的比１：２でＳＫＭ１細胞と共培養した。ＳＫＭ１細胞の特異的溶解およびＴ細胞増殖について、７２時間後に機能アッセイを分析した。ＷＴ１－ＴＣＢによるＳＫＭ１細胞の特異的溶解を、フローサイトメトリーによって決定した生存ＳＫＭ１細胞数に基づいて、ＤＰ４７－ＴＣＢを含有するそれぞれの対照と比較して計算した。７２時間後のＴ細胞の増殖を、生存Ｔ細胞数に基づいて０日目と比較して計算した。（実験設定の概略図については図５Ａも参照されたい）。
【0163】
結果
４日間の共培養の後、本発明者らは、健常ドナーＴ細胞およびＷＴ１－ＴＣＢによって媒介される初代ＡＭＬ細胞の平均特異的溶解が５３．６±８．３％であることを観察した。特に、これは、ＮＩＨ－３Ｔ３細胞の存在下で２１．８±４．５％に減少した。しかしながら、ＡＭＬ細胞溶解は回復しただけでなく、３Ｔ３－ｈｕＦＡＰｈｉｇｈ細胞（６７．４±６．５％）の存在下でのＦＡＰ－４－１ＢＢＬの添加によって増強された（図１および表１）。重要なことに、ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬの組合せにより、改善されたＴ細胞、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の改善がもたらされた（４日目対０日目の変化倍数：６．６±１．５対３．０±０．８）（図２）。同時に、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬにより、ＣＤ３＋Ｔ細胞上の活性化分子ＣＤ２５（ＭＦＩ比：１８．４±５．６対１１．９±２．８）（図３Ａ）および４－１ＢＢ（ＭＦＩ比：８．６±５．０対３．０±１．２）（図３Ｂ）の発現増加がもたらされた。ＦＡＰ－４－１ＢＢＬは、ＷＴ１－ＴＣＢと組み合わせて、共阻害受容体ＰＤ－１の発現を調節しなかった（図３Ｃ）。溶解はさらに、グランザイムＢ（１．４ｘ１０３±１．０ｘ１０３ｐｇ／ｍＬ対６．１ｘ１０１±２．２ｘ１０１ｐｇ／ｍＬ）、ＩＦＮγ（６．０ｘ１０３±３．３ｘ１０３ｐｇ／ｍＬ対３．１ｘ１０２±２．０ｘ１０２ｐｇ／ｍＬ）およびＴＮＦα（１．７ｘ１０２±１．１ｘ１０２ｐｇ／ｍＬ対３．７ｘ１０１±２．５ｘ１０１ｐｇ／ｍＬ）の分泌増加を伴っていた（図３Ｄ～３Ｆ）。３Ｔ３－ｈｕＦＡＰｌｏｗ細胞の存在下で全体的に同様の観察が行われ、ＡＭＬにおけるＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬの併用療法が裏付けられた。
４日間の共培養の後、本発明者らは、健常ドナーＴ細胞およびＷＴ１－ＴＣＢによって媒介される初代ＡＭＬ細胞の平均特異的溶解が５３．６±８．３％であることを観察した。特に、これは、ＮＩＨ－３Ｔ３細胞の存在下で２１．８±４．５％に減少した。しかしながら、ＡＭＬ細胞溶解は回復しただけでなく、３Ｔ３－ｈｕＦＡＰｈｉｇｈ細胞（６７．４±６．５％）の存在下でのＦＡＰ－４－１ＢＢＬの添加によって増強された（図１および表１）。重要なことに、ＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬの組合せにより、改善されたＴ細胞、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖の改善がもたらされた（４日目対０日目の変化倍数：６．６±１．５対３．０±０．８）（図２）。同時に、ＦＡＰ－４－１ＢＢＬにより、ＣＤ３＋Ｔ細胞上の活性化分子ＣＤ２５（ＭＦＩ比：１８．４±５．６対１１．９±２．８）（図３Ａ）および４－１ＢＢ（ＭＦＩ比：８．６±５．０対３．０±１．２）（図３Ｂ）の発現増加がもたらされた。ＦＡＰ－４－１ＢＢＬは、ＷＴ１－ＴＣＢと組み合わせて、共阻害受容体ＰＤ－１の発現を調節しなかった（図３Ｃ）。溶解はさらに、グランザイムＢ（１．４ｘ１０３±１．０ｘ１０３ｐｇ／ｍＬ対６．１ｘ１０１±２．２ｘ１０１ｐｇ／ｍＬ）、ＩＦＮγ（６．０ｘ１０３±３．３ｘ１０３ｐｇ／ｍＬ対３．１ｘ１０２±２．０ｘ１０２ｐｇ／ｍＬ）およびＴＮＦα（１．７ｘ１０２±１．１ｘ１０２ｐｇ／ｍＬ対３．７ｘ１０１±２．５ｘ１０１ｐｇ／ｍＬ）の分泌増加を伴っていた（図３Ｄ～３Ｆ）。３Ｔ３－ｈｕＦＡＰｌｏｗ細胞の存在下で全体的に同様の観察が行われ、ＡＭＬにおけるＷＴ１－ＴＣＢおよびＦＡＰ－４－１ＢＢＬの併用療法が裏付けられた。
【0164】
【表2】
【0165】
上述の発明は、理解を明確にする目的のために説明および実施例によってある程度詳細に記載されているが、これらの記載および実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての特許および科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】
【国際調査報告】