特表2024-543257抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-11-20
(54)【発明の名称】抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法
(51)【国際特許分類】
C07K 16/46 20060101AFI20241113BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241113BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241113BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20241113BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20241113BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241113BHJP
C07K 16/30 20060101ALN20241113BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20241113BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20241113BHJP
【ＦＩ】
C07K16/46 ZNA
A61K39/395 N
A61P35/00
A61P35/02
A61P35/04
A61P43/00 121
C07K16/30
C07K16/28
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024531258
(86)(22)【出願日】2022-11-25
(85)【翻訳文提出日】2024-07-02
(86)【国際出願番号】 EP2022083218
(87)【国際公開番号】W WO2023094569
(87)【国際公開日】2023-06-01
(31)【優先権主張番号】21210631.4
(32)【優先日】2021-11-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＵＮＩＸ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】514099673
【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】クライン， クリスティアン
(72)【発明者】
【氏名】ニコリーニ， ヴァレリア ジー．
(72)【発明者】
【氏名】ウマーニャ， パブロ
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB31
4C085DD32
4C085DD62
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA21
(57)【要約】
本発明は、ヒトＴＹＲＰ１およびＣＤ３に結合する二重特異性抗体、ならびに第２のＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
転移の予防または処置における併用療法としての使用のための、がんの治療における併用療法としての使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体であって、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＴＹＲＰ１に特異的に結合する第１の抗原結合部分と、配列番号３の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号４の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合部分とを含み、
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、ＴＹＲＰ１に特異的に結合する抗原結合部分を含む、
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項2】
がんの治療のための医薬の製造における、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体の使用であって、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＴＹＲＰ１に特異的に結合する第１の抗原結合部分と、配列番号３の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号４の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合部分とを含み、
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、ＴＹＲＰ１に特異的に結合する抗原結合部分を含む、
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体の使用。
【請求項3】
個体におけるがんを治療する方法であって、治療有効量の、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体を前記個体に投与することを含み、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＴＹＲＰ１に特異的に結合する第１の抗原結合部分と、配列番号３の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号４の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合部分とを含み、
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、ＴＹＲＰ１に特異的に結合する抗原結合部分を含む、方法。
【請求項4】
第２の抗体が、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む、請求項１に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、請求項２に記載の使用、または請求項３に記載の方法。
【請求項5】
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４サブクラスの抗体であることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項6】
ＴＹＲＰ１特異性抗体がヒトＩｇＧ１サブクラスの抗体であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項7】
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、低減したか、または最小のエフェクター機能を有することを特徴とする、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項8】
最少のエフェクター機能が、エフェクターを有さないＦｃ変異に起因する、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項9】
エフェクターを有さないＦｃ変異が、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである、請求項８に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項10】
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、改善されたエフェクター機能、特に改善されたＡＤＣＣ機能を有するＦｃドメインを含むことを特徴とする、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項11】
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体がアフコシル化されていることを特徴とする、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項12】
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７もしくは配列番号８のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７および配列番号８のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号９および配列番号１０および配列番号１１および配列番号１２のポリペプチド配列
を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項13】
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７もしくは配列番号８のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７および配列番号８のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号９および配列番号１０および配列番号１１および配列番号１２のポリペプチド配列
を含み、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、
ｉ）配列番号１３もしくは配列番号１４のポリペプチド配列、または
ｉｉ）配列番号１３および配列番号１４のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号１５および配列番号１６のポリペプチド配列
を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項14】
ｉ）腫瘍における腫瘍増殖の阻害、ならびに／またはｉｉ）腫瘍を有する対象の生存期間の中央値および／もしくは全生存期間の向上
における使用のための、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体であって、
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、
ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７もしくは配列番号８のポリペプチド配列、
ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７および配列番号８のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号９および配列番号１０および配列番号１１および配列番号１２のポリペプチド配列
を含み、
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、
ｉ）配列番号１３もしくは配列番号１４のポリペプチド配列、または
ｉｉ）配列番号１３および配列番号１４のポリペプチド配列、または
ｉｉｉ）配列番号１５および配列番号１６のポリペプチド配列
を含む、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項15】
がんが、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、黒色腫がん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、黒色腫、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の群から選択される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項16】
患者が免疫療法で処置されているか、または免疫療法で前処置されている、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項17】
前記免疫療法が、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１６に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。
【請求項18】
養子細胞移入が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質導入細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組合せを投与することを含む、請求項１７に記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ヒトＴＹＲＰ１およびＣＤ３に結合する二重特異性抗体、ならびにＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法に関する。
【背景技術】
【0002】
がんは先進国において死因の第１位であり、発展途上国において死因の第２位である。最近の化学療法の進歩、ならびに分子レベルで癌細胞における増殖シグナルの伝達および調節を妨害することを目標とした薬剤の開発にもかかわらず、進行癌患者の予後は一般に不良なままである。その結果、許容できない毒性を引き起こさずに生存率を高めるために既存の治療法に追加できる新しい治療法を開発するという持続的かつ緊急の医療ニーズがある。
【0003】
ＣＤ３（分化抗原群３）は４つのサブユニット、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、および２つのＣＤ３ε鎖から構成されるタンパク質複合体である。ＣＤ３は、Ｔ細胞受容体およびζ鎖と会合し、Ｔリンパ球において活性化シグナルを発する。ＣＤ３は、創薬標的として広く研究されている。ＣＤ３を標的とするモノクローナル抗体は、Ｉ型糖尿病などの自己免疫疾患または移植片拒絶反応の治療における免疫抑制療法として使用されてきた。ＣＤ３抗体ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）は、１９８５年にヒトでの臨床使用が承認された最初のモノクローナル抗体であった。
【0004】
ＣＤ３抗体の最近の応用は、一方でＣＤ３に結合し、他方で腫瘍細胞抗原に結合する二重特異性抗体の形をとっている（ＣｌｙｎｅｓおよびＤｅｓｊａｒｌａｉｓ（２０１９）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．７０：４３７－５０）。そのような抗体が両方の標的に同時に結合すると、標的細胞とＴ細胞の間に一時的な相互作用が生じ、細胞傷害性Ｔ細胞が活性化され、その後標的細胞が溶解する。この目的のため、ＣＤ３および腫瘍細胞抗原ＴＹＲＰ１に結合する二重特異性抗体が開発されており、例えば国際公開第２０２０／１２７６１９号に記載されている。標的としてのＴＹＲＰ１は、黒色腫細胞およびメラニン合成に関与するメラノサイトに存在し、ヒトにおけるメラノサイトの増殖および生存にも影響を及ぼす。ＴＹＲＰ１抗体は以前に記載されており（Ｂｏｒｏｓｓら、（２０１４）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ．１６０（２）：１５１－７）、臨床試験で試験されている（Ｋｈａｌｉｌら、（２０１６）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２２（２１）：５２０４－５２１０）。マウスモデルにおける使用のために、ＴＹＲＰ１およびＴ細胞二重特異性代用抗体は、抗腫瘍有効性を媒介したが、長期応答／治癒を誘導し得なかったことが記載されている（Ｂｅｎｏｎｉｓｓｏｎら．（２０１９）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．（２）：３１２－３２２；Ｌａｂｒｉｊｎら．（２０１７）Ｓｃｉ Ｒｅｐ．７（１）：２４７６）。
【0005】
患者の治療に有意に寄与する可能性を有する新しい化合物および組み合わせが依然として必要とされている。したがって、本発明者らは、本明細書において、ＴＹＲＰ１抗体、ならびにＴＹＲＰ１およびＣＤ３に結合する二重特異性抗体との新規な併用療法を記載する。
【発明の概要】
【0006】
本発明は、がんの治療における併用療法としての使用のための、転移の予防または処置における併用療法としての使用のための、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体であって、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＴＹＲＰ１に特異的に結合する第１の抗原結合部分と、配列番号３の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号４の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合部分とを含み、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、ＴＹＲＰ１に特異的に結合する抗原結合部分を含む、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む。
【0007】
さらに、本発明は、がんを治療するための医薬の製造における、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体の使用であって、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＴＹＲＰ１に特異的に結合する第１の抗原結合部分と、配列番号３の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号４の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合部分とを含み、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、ＴＹＲＰ１に特異的に結合する抗原結合部分を含む、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体の使用を提供する。
【0008】
さらに、本発明は、個体におけるがんを治療する方法であって、個体に、治療有効量の、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体を投与することを含み、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＴＹＲＰ１に特異的に結合する第１の抗原結合部分と、配列番号３の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号４の軽鎖可変ドメインＶＬを含むＣＤ３に特異的に結合する第２の抗原結合部分とを含み、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、ＴＹＲＰ１に特異的に結合する抗原結合部分を含む、方法を提供する。
【0009】
一態様では、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体は、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む。
【0010】
さらなる態様では、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体はヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。一態様では、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体はヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。
【0011】
一態様では、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、低減したか、または最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる態様では、最少のエフェクター機能は、エフェクターを有さないＦｃ変異に起因する。一態様では、エフェクターを有さないＦｃ変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。
【0012】
第２のＴＹＲＰ１特異性抗体は、改善されたエフェクター機能、特に改善されたＡＤＣＣ機能を有するＦｃドメインを含む。一態様では、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体はアフコシル化されている。
【0013】
一態様では、本発明は、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７もしくは配列番号８のポリペプチド配列、ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７および配列番号８のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号９および配列番号１０および配列番号１１および配列番号１２のポリペプチド配列を含む、前述の態様のいずれかに記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法を提供する。
【0014】
別の態様では、本発明は、本発明は、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７もしくは配列番号８のポリペプチド配列、ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７および配列番号８のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号９および配列番号１０および配列番号１１および配列番号１２のポリペプチド配列を含み、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、ｉ）配列番号１３もしくは配列番号１４のポリペプチド配列、またはｉｉ）配列番号１３および配列番号１４のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号１５および配列番号１６のポリペプチド配列を含む、前述の態様のいずれかに記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法を提供する。
【0015】
一態様では、本発明は、ｉ）腫瘍における腫瘍増殖の阻害、ならびに／またはｉｉ）腫瘍を有する対象の生存期間の中央値および／もしくは全生存期間の向上において使用するための、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体であって、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ｉ）配列番号５もしくは配列番号６もしくは配列番号７もしくは配列番号８のポリペプチド配列、ｉｉ）配列番号５および配列番号６および配列番号７および配列番号８のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号９および配列番号１０および配列番号１１および配列番号１２のポリペプチド配列を含み、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体が、ｉ）配列番号１３もしくは配列番号１４のポリペプチド配列、またはｉｉ）配列番号１３および配列番号１４のポリペプチド配列、またはｉｉｉ）配列番号１５および配列番号１６のポリペプチド配列を含む、第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体を提供する。
【0016】
さらなる態様では、本発明は、がんが、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、黒色腫がん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、黒色腫、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫の群から選択される、前述の態様のいずれかに記載の使用のための第２のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、使用、または方法を提供する。一態様では、患者は免疫療法で処置されているか、または免疫療法で前処置されている。一態様では、免疫療法は、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、癌ワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む。一態様では、養子細胞移入は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質導入細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組合せを投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】図１は、単一薬剤としておよび組み合わせて、ｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧおよびｍｕＴＹＲＰ１－ＴＣＢを評価する有効性実験の結果を示す。Ｂ１６－ｍｕＦＡＰ－Ｆｌｕｃ二重トランスフェクタント黒色腫細胞株をＢｌａｃｋ６アルビノマウスに静脈内注射して、肺転移性同系モデルにおける生存率を調査した。マウスあたりに注射される抗体の量（ｍｇ／ｋｇ）は以下の通りである：２０ｍｇ／ｋｇ ｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧおよび１０ｍｇ／ｋｇ ｍｕＴＹＲＰ１－ＴＣＢ。抗体を４週間にわたって週に１回静脈内注射した。試験した単剤群およびビヒクル群と比較して、１０ｍｇ／ｋｇ ｍｕＴＹＲＰ１－ＴＣＢ＋２０ｍｇ／ｋｇ ｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧの組み合わせ群で有意に優れた中央値および全生存期間が観察された。
【発明を実施するための形態】
【0018】
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、国際公開第２０２０／１２７６１９号に記載されている。
【0019】
本明細書に記載の併用療法において使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＴＹＲＰ１に結合し得る第１の抗原結合部分と、ＣＤ３に結合し得る第２の抗原結合部分とを含む。本明細書に記載の併用療法において使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号１の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域配列または機能性を保持するそのバリアントと、配列番号２の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域配列または機能性を保持するそのバリアントとを含む第１の抗原結合部分、ならびに配列番号３の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域配列または機能性を保持するそのバリアントと、配列番号４と少なくとも少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域配列または機能性を保持するそのバリアントとを含む第２の抗原結合部分を含み得る。本明細書に記載の併用療法において使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第１の抗原結合部分と、配列番号３の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号４の軽鎖可変ドメインＶＬを含む第２の抗原結合部分とを含み得る。
【0020】
本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、第１の抗原結合部分と同一の第３の抗原結合部分を含み得る。一実施形態では、ＴＹＲＰ１に結合する第１の抗原結合部分および第３の抗原結合部分は従来のＦａｂ分子である。そのような実施形態では、ＣＤ３に結合する第２の抗原結合部分は、クロスオーバーＦａｂ分子、すなわちＦａｂ重鎖およびＦａｂ軽鎖の可変ドメインＶＨおよびＶＬが互いに交換／置換されたＦａｂ分子である。
【0021】
併用療法で使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、そこに含まれるＦａｂ分子にアミノ酸置換を含んでもよく、軽鎖と一致しない重鎖とのミスペアリング（ベンス・ジョーンズ型副産物）を減少させるのに特に有効であり、これは、結合アームの１つ（２つ以上の抗原結合Ｆａｂ分子を含む分子の場合は２つ以上）でＶＨ／ＶＬ交換を伴うＦａｂベースの多重特異性抗体の産生で発生する可能性がある（ＰＣＴ公開番号の国際公開第２０１５／１５０４４７号も参照されたい。特にその中の例は、その全体が本明細書に特にその中の例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。望ましくない副産物、特に、１つの結合アームにＶＨ／ＶＬドメイン交換を有する多重特異性抗体に生じるベンス・ジョーンズ型の副産物に対する望ましい（多重特異性）抗体の比率は、ＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインの特定のアミノ酸位置に反対の電荷を持つ荷電アミノ酸を導入することによって改善し得る（本明細書で「電荷修飾」と呼ぶことがある）。
【0022】
したがって、（多重特異性）抗体の第１の抗原結合部分および第２（および、存在する場合、第３）の抗原結合部分がＦａｂ分子であり、一方の抗原結合部分（特に第２の抗原結合部分）において、Ｆａｂ軽鎖およびＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬおよびＶＨが互いに置換されており、第１（および、存在する場合、第３）の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸および２１３位のアミノ酸が正に荷電したアミノ酸で置換されていてもよく（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、第１（および、存在する場合、第３）の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸および２１３位のアミノ酸が負に荷電したアミノ酸で置換されていてもよい（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）、併用療法において使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体。ＶＨ／ＶＬ交換を有する抗原結合部分の定常ドメインＣＬおよびＣＨ１は、互いに置換されていない（すなわち、交換されないままである）。定常ドメインＣＬの１２４位のアミノ酸および２１３位のアミノ酸は、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）によって独立して置換されてもよく、定常ドメインＣＨ１の１４７位のアミノ酸および２１３位のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）によって独立して置換されてもよい。併用療法において使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、第１（および、存在する場合、第３）の抗原結合部分の１２４位のアミノ酸の定常ドメインＣＬにおいてリジン（Ｋ）に置換され（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、１２３位のアミノ酸がアルギニン（Ｒ）に置換され（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、第１（および、存在する場合、第３）の抗原結合ドメインの定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）に置換され（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）に置換されてもよい（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）。
【0023】
本明細書に記載の併用療法で使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号５、６、７および８として示される配列、または機能性を保持するそのバリアントを有し得る。
【0024】
配列番号５、６、７および８として示される配列を有する抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体を、本明細書では「ＴＹＲＰ１ ＴＣＢ」または「ＴＹＲＰ１－ＴＣＢ」と呼ぶ。配列番号９、１０、１１および１２として示される配列を有する抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、本明細書では「ｍｕＴＹＲＰ１ ＴＣＢ」と呼ばれ、これはマウス代用抗体である。
【0025】
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、２つの同一でないポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を促進する修飾を含むＦｃドメインを含み得る。「ヘテロ二量体化を促進する修飾」は、ポリペプチドが同一のポリペプチドと会合してホモ二量体を形成することを低減または妨害するペプチド骨格の操作またはポリペプチドの翻訳後修飾である。本明細書で使用されるヘテロ二量体化を促進する修飾は、特に、二量体を形成することが望ましい２つのポリペプチドの各々に対してなされる別個の修飾を含み、修飾は、２つのポリペプチドの会合を促進するように互いに相補的である。例えば、ヘテロ二量体化を促進する修飾は、それらの会合をそれぞれ立体的または静電的に好ましいものにするように、二量体を形成することが望ましいポリペプチドの一方または両方の構造または電荷を変更してもよい。ヘテロ二量体化は、２つの同一でないポリペプチド間、例えばＦｃドメインの同じではない２つのサブユニット間で起こる。本発明の二重特異性抗体において、ヘテロ二量体化を促進する修飾はＦｃドメインに存在する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化を促進する修飾は、アミノ酸突然変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、ヘテロ二量体化を促進する修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々における別個のアミノ酸突然変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのポリペプチド鎖間の最も広範囲のタンパク質間相互作用の部位は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにある。したがって、一実施形態では、当該修飾は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインの中にある。具体的な実施形態では、修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの１つにおけるノブ修飾、およびＦｃドメインの２つのサブユニットのうちの他の１つにおけるホール修飾を含むノブ・イントゥ・ホール修飾である。
【0026】
ノブ・イントゥ・ホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、米国特許第７，６９５，９３６号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，６１７－６２１（１９９６）およびＣａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２４８，７－１５（２００１）に記載される。通常、この方法は、隆起がそれに対応する空洞内に位置できるように、第１のポリペプチドの接触面に隆起（「ノブ」）を、および第２のポリペプチドの接触面に対応する空洞を、それぞれ導入することにより、ヘテロ二量体形成を促進し、かつホモ二量体形成を妨害することを含む。隆起は、第１のポリペプチドの接触面からの小さなアミノ酸側鎖をそれより大きな側鎖（例えばチロシンまたはトリプトファン）で置換することにより構築される。突起と同一または同様の大きさの相補性空洞が、大きなアミノ酸側鎖を、より小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）と置き換えることによって、第２のポリペプチドの界面に作られる。突起および空洞は、ポリペプチドをコードする核酸を変えることによって、例えば、部位特異的変異導入法によって、またはペプチド合成によって作製し得る。具体的な実施形態では、ノブ改変は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうちの１つにアミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、ホール改変は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのうち他方の１つにアミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む。更に具体的な実施形態では、ノブ修飾を含むＦｃドメインのサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃを更に含み、ホール修飾を含むＦｃドメインのサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃを更に含む。これら２つのシステイン残基の導入によって、Ｆｃ領域の２つのサブユニットの間にジスルフィド架橋の形成を生じ、二量体を更に安定化する（Ｃａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８，７－１５（２００１））。Ｆｃ領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１．に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。本明細書で使用される場合、Ｆｃドメインの「サブユニット」）は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドのうちの１つ、すなわち、安定な自己会合が可能な免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含むポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２およびＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。
【0027】
別の実施形態では、２つの非同一ポリペプチド鎖のヘテロ二量体化を促進する修飾は、例えば、国際公開第２００９／０８９００４号に記載される静電的ステアリング効果を媒介する修飾を含む。一般に、この方法は、ホモ二量体の形成が静電的に好ましくないものであるが、ヘテロ二量体の形成が静電的に好ましいものになるように、２つのポリペプチド鎖の界面での１つ以上のアミノ酸残基の荷電アミノ酸残基による置換を伴う。
【0028】
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＦｃドメインは、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されているように、操作されていないＦｃドメインと比較して、Ｆｃ受容体に対する変化した結合親和性、具体的にはＦｃγ受容体に対する変化した結合親和性を有するように操作され得る。Ｆｃドメインの補体成分に対する、具体的にはＣ１ｑに対する結合は、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように変更され得る。Ｆｃドメインは、標的組織における良好な蓄積および良好な組織－血液分布比に寄与する長い血清半減期を含む好ましい薬物動態特性を抗体に付与する。しかしながら、それは同時に、好ましい抗原担持細胞ではなくＦｃ受容体を発現する細胞の望ましくない標的化につながる場合がある。
【0029】
したがって、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＦｃドメインは、Ｆｃ受容体に対する結合親和性が低下するように操作され得る。そのような一実施形態では、Ｆｃドメインは、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を低減させる１つ以上のアミノ酸突然変異を含む。典型的には、同じ１つ以上のアミノ酸突然変異が、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々に存在する。一実施形態では、アミノ酸突然変異は、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を、少なくとも２倍、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍低減させる。ＦｃドメインのＦｃ受容体への結合親和性を低減させる２つ以上のアミノ酸突然変異がある実施形態では、これらのアミノ酸突然変異の組み合わせは、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、またはさらには少なくとも５０倍低減させる。一実施形態では、操作されたＦｃドメインを含む抗体は、操作されていないＦｃドメインを含む抗体と比較して、２０％未満、特に１０％未満、より詳細には５％未満のＦｃ受容体に対する結合親和性を示す。一実施形態では、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体であり、より具体的には、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａ受容体である。好ましくは、これらの受容体の各々の結合が低減される。いくつかの実施形態では、補体成分に対する結合親和性、具体的にはＣ１ｑに対する結合親和性も低減される。一実施態様では、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性は低減しない。ＦｃＲｎに対する実質的に同様の結合、すなわち、当該受容体に対するＦｃドメインの結合親和性の保存は、Ｆｃドメイン（または当該Ｆｃドメインを含む抗体）が、ＦｃＲｎに対する操作されていない形態のＦｃドメイン（または当該操作されていない形態のＦｃドメインを含む抗体）の結合親和性の約７０％超を示す場合に達成される。Ｆｃドメイン、または当該Ｆｃドメインを含む本発明の抗体は、そのような親和性の約８０％超、さらには約９０％超を示し得る。一実施形態では、アミノ酸突然変異は、アミノ酸置換である。一実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９の位置にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、このアミノ酸置換は、Ｐ３２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである。一実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１から選択される位置にさらなるアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、さらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４およびＬ２３５の位置にアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、アミノ酸突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ Ｐ３２９Ｇ）を含む。このアミノ酸置換の組み合わせは、その全体が参照により本明細書に援用される国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載されるように、Ｆｃγ受容体のヒトＩｇＧ Ｆｃドメインへの結合をほぼ完全に排除する。国際公開第２０１２／１３０８３１号は、そのような突然変異体Ｆｃドメインを調製する方法およびＦｃ受容体結合またはエフェクター機能などのその特性を決定するための方法も記載する。Ｆｃ領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１．に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。
【0030】
突然変異体Ｆｃドメインは、当該技術分野において公知であり、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載される遺伝的または化学的方法を使用する、アミノ酸の欠失、置換、挿入または修飾によって調製し得る。遺伝的方法には、コード化ＤＮＡ配列の部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成等が含まれ得る。正しいヌクレオチド変化は、例えば、スクリーニングによって確認し得る。
【0031】
一実施形態では、Ｆｃドメインは、国際公開第２０１２／１４６６２８号に記載されるように、非操作のＦｃドメインと比較して、減少したエフェクター機能を有するように操作される。エフェクター機能の減少としては、以下の：補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の減少、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の減少、サイトカイン分泌の減少、抗原提示細胞による免疫複合体媒介性抗原取り込みの減少、ＮＫ細胞への結合の減少、マクロファージへの結合の減少、単球への結合の減少、多形核細胞への結合の減少、アポトーシスを誘導する直接的シグナル伝達の減少、標的結合抗体の架橋の減少、樹状細胞成熟の減少、またはＴ細胞プライミングの減少のうちの１つ以上を挙げられるが、これらに限定されない。
【0032】
ＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１抗体と比較して、Ｆｃ受容体への結合親和性の低減およびエフェクター機能の低減を示す。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の抗体のＦｃドメインはＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。一実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位にアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む。Ｆｃ受容体へのその結合親和性および／またはエフェクター機能を更に低下させるために、一実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｌ２３５位にアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｌ２３５Ｅを含む。別の実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｐ３２９Ｇを含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８、Ｌ２３５、およびＰ３２９にアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、およびＰ３２９Ｇを含む。そのようなＩｇＧ４ Ｆｃドメイン突然変異体およびそれらのＦｃγ受容体結合特性は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、欧州特許出願の国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載されている。
【0033】
本明細書に記載の併用療法で使用されるＴＹＲＰ１特異性抗体は、ＴＹＲＰ１に結合し得る抗原結合部分を含む。本明細書に記載の併用療法において使用されるＴＹＲＰ１特異性抗体は、配列番号１の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域配列または機能を保持するそのバリアントと、配列番号２の配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域配列または機能を保持するそのバリアントとを含む抗原結合部分を含み得る。本明細書に記載される併用療法において使用されるＴＹＲＰ１特異性抗体は、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む抗原結合部分を含み得る。
【0034】
配列番号１３および配列番号１４で示される配列を有するＴＹＲＰ１特異性抗体を、本明細書では「ＴＹＲＰ１ ＩｇＧ」または「ＴＹＲＰ１－ＩｇＧ」と呼ぶ。配列番号１５および配列番号１６として示される配列を有するＴＹＲＰ１特異性抗体は、本明細書では「ｍｕＴＹＲＰ１ ＩｇＧ」または「ｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧ」と呼ばれ、これはマウス代用物である。
【0035】
本明細書に記載の併用療法で使用されるＴＹＲＰ１特異性抗体は、サブクラスＩｇＧ１の抗体であり得る。ＴＹＲＰ１特異性抗体のＦｃドメインは、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ活性を有し得るか、またはヒト野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む他の点では同じ抗体と比較して、増加したＡＤＣＣ活性を有し得る。
【0036】
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化されている程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。
【0037】
抗体がＦｃ領域を含む場合、抗体に付着しているオリゴ糖を変更してもよい。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、通常、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって結合している分岐状の二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸などの様々な炭水化物のほか、二分岐オリゴ糖構造の「幹」でＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれる場合がある。いくつかの実施形態では、本発明の抗体中のオリゴ糖の改変は、特定の改良された特性を有する抗体変異体を作成するために行われてもよい。
【0038】
一実施形態では、非フコシル化オリゴ糖、すなわちＦｃ領域へのフコース結合（直接または間接）を欠くオリゴ糖構造を有する抗体バリアントが提供される。このような非フコシル化オリゴ糖（「アフコシル化」オリゴ糖とも呼ばれる）は特に、二分岐オリゴ糖構造の幹に第１のＧｌｃＮＡｃが結合したフコース残基を欠く、Ｎ結合オリゴ糖である。一実施形態では、内在性または親抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の比率が増加した抗体バリアントを提供する。例えば、非フコシル化オリゴ糖の割合は、少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約８０％またはさらには約１００％（すなわち、フコシル化オリゴ糖が存在しない）であってもよい。非フコシル化オリゴ糖の割合は、例えば、国際公開第２００６／０８２５１５号に記載のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法により測定した、Ａｓｎ２９７に結合した全てのオリゴ糖の合計（例えば、複合体、ハイブリッド、およびハイマンノース構造）に対する、フコース残基を欠くオリゴ糖の（平均）量である。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域のおよそ２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）。ただし、抗体のわずかな配列の変化により、Ａｓｎ２９７は、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち２９４位と３００位の間に位置することもある。Ｆｃ領域において非フコシル化オリゴ糖の割合が増加したそのような抗体は、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ受容体結合および／または改善されたエフェクター機能、特に改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１を参照されたい。
【0039】
フコシル化が低下した抗体を産生可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；および国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子のＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４－６２２（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；および国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）、またはＧＤＰ－フコース合成もしくはトランスポータータンパク質の活性が低下もしくは消滅した細胞（例えば、米国特許出願公開第２００４２５９１５０号、同第２００５０３１６１３号、同第２００４１３２１４０号、同第２００４１１０２８２号を参照）が挙げられる。
【0040】
さらなる実施形態では、抗体バリアントは、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている二分されたオリゴ糖と共に提供される。そのような抗体バリアントは、上に記載されたように、フコシル化が低下しているおよび／またはＡＤＣＣ機能が改善されていることがある。このような抗体バリアントの例は、例えばＵｍａｎａら，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７，１７６－１８０（１９９９）；Ｆｅｒｒａｒａら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ ９３，８５１－８６１（２００６）；国際公開第９９／５４３４２号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００３／０１１８７８号に記載されている。
【0041】
Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖の少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。このような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号；同第１９９８／５８９６４号；および同第１９９９／２２７６４号に記載されている。
【0042】
ＴＹＲＰ１特異性抗体のＦｃドメインは、Ｆｃ受容体、優先的にはＦｃγＲＩＩＩへの結合の増加によってＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。Ｆｃドメインは、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位および／または３３４位にアミノ酸置換を含み得る（残基のＥＵナンバリング）（Ｓｈｉｅｌｄｓら，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４（２００１））。そのようなＦｃバリアントのさらなる例は、Ｗａｎｇら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ．９（１）：６３－７３（２０１８）；およびＮｏｒｄｓｔｒｏｍら，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１３（６）：Ｒ１２３（２０１１）に記載されている。
【0043】
特定の実施形態では、本明細書に記載のＦｃ領域を含むＴＹＲＰ１特異性抗体バリアントは、ＦｃγＲＩＩＩに結合し得る。特定の実施形態では、本明細書中に記載のＦｃ領域を含む抗体バリアントは、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ活性を有するか、またはヒト野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む他の点では同じ抗体と比較してヒトエフェクター細胞の存在下で増加したＡＤＣＣ活性を有する。
【0044】
定義
「抗体」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、限定されないが、所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、および抗体断片を含む、種々の抗体構造を包含する。「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、およびシングルドメイン抗体が挙げられる。特定の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ Ｍｅｄ．９，１２９－１３４（２００３）を参照されたい。
「抗体」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、限定されないが、所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、および抗体断片を含む、種々の抗体構造を包含する。「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、およびシングルドメイン抗体が挙げられる。特定の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ Ｍｅｄ．９，１２９－１３４（２００３）を参照されたい。
【0045】
「抗原結合部分」、「抗原結合ドメイン」または「抗体の抗原結合部分」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原の一部もしくは全てに特異的に結合し、それらに相補的である領域を含む抗体の一部を指す。したがって、この用語は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。抗原結合ドメインは、例えば、１つ以上の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）によって提供されてもよい。特に、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む。抗体の抗原結合部分は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」領域は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。したがって、抗体の軽鎖および重鎖の可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端まで、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与し、抗体の特性を規定する領域である。ＣＤＲおよびＦＲ領域は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）の標準的な定義および／または「超可変ループ」由来の残基に従って決定される。「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然の抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、一般に、類似の構造を有しており、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む。例えば、Ｋｉｎｄｔら，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分であり得る。
【0046】
「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合し得る、ＴＹＲＰ１またはヒトＣＤ３などの抗原のタンパク質決定基を表す。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、通常、エピトープは、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特徴を有する。コンフォメーショナルおよび非コンフォメーショナルエピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合が失われるのに対して後者への結合が失われないという点で識別される。
【0047】
本明細書の「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界は、わずかに変動してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシ末端まで伸長するよう定義されている。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしてなくてもよい。本明細書において別段の指定がない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているような、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリングシステムに従う。抗体のＦｃドメインは、抗体の抗原への結合において直接的に関与していないが、さまざまなエフェクター機能を示す。「抗体のＦｃドメインＡ」は、当業者に周知の用語であり、抗体のパパイン切断に基づいて定義される。重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体または免疫グロブリンは、クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭに分類され、これらのいくつかはさらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ならびにＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分類し得る。重鎖定常領域によれば、異なるクラスの免疫グロブリンは、それぞれα，δ、ε，γ、およびμと呼ばれる。抗体のＦｃドメインは、補体活性化、Ｃ１ｑ結合およびＦｃ受容体結合に基づくＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）およびＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）に直接関与している。補体活性化（ＣＤＣ）は、補体因子Ｃ１ｑの大部分のＩｇＧ抗体サブクラスのＦｃドメインへの結合によって開始される。抗体の補体系に対する影響はある特定の条件に依存するが、Ｃ１ｑへの結合は、Ｆｃドメインの規定された結合部位によって引き起こされる。そのような結合部位は、技術水準において公知であり、例えば、Ｂｏａｃｋｌｅ，Ｒ．Ｊ．ら，Ｎａｔｕｒｅ ２８２（１９７９）７４２－７４３；Ｌｕｋａｓ，Ｔ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２７（１９８１）２５５５－２５６０；Ｂｒｕｎｈｏｕｓｅ，Ｒ．およびＣｅｂｒａ，Ｊ．Ｊ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６（１９７９）９０７－９１７；Ｂｕｒｔｏｎ，Ｄ．Ｒ．ら，Ｎａｔｕｒｅ ２８８（１９８０）３３８－３４４；Ｔｈｏｍｍｅｓｅｎ，Ｊ．Ｅ．ら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７（２０００）９９５－１００４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ，Ｅ．Ｅ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（２０００）４１７８－４１８４；Ｈｅｚａｒｅｈ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７５（２００１）１２１６１－１２１６８；Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．ら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８６（１９９５）３１９－３２４、および欧州特許第０３０７４３４号において記載されている。そのような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１およびＰ３２９（上記のＫａｂａｔのＥＵインデックス，Ｅ．Ａ．を参照）である。サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ３の抗体は、通常、補体活性化ならびにＣ１ｑおよびＣ３への結合を示すが、一方ＩｇＧ４は、補体系を活性化せず、Ｃ１ｑおよびＣ３に結合しない。
【0048】
一実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒト起源に由来するＦｃドメイン、好ましくは、ヒト定常領域の他の全ての部分を含む。本明細書で使用される場合、「ヒト起源由来のＦｃドメイン」という用語は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスのヒト抗体のＦｃドメイン、好ましくはヒトＩｇＧ１サブクラス由来のＦｃドメイン、ヒトＩｇＧ１サブクラス由来の変異型Ｆｃドメイン、ヒトＩｇＧ４サブクラス由来のＦｃドメインまたはヒトＩｇＧ４サブクラス由来の変異型ＦｃドメインのいずれかであるＦｃドメインを示す。一実施形態では、抗ＴＲＹＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、低下したか、または最小のエフェクター機能を有する。一実施形態では、最小限のエフェクター機能は、エフェクターレスＦｃ突然変異に起因する。一実施形態では、エフェクターを有さないＦｃ突然変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９ＧまたはＮ２９７ＡまたはＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。一実施形態では、エフェクターを有さないＦｃ突然変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７ＡおよびＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ（ＥＵナンバリング）を含む（からなる）群とは互いに独立する抗体の各々について選択される。一実施形態では、ＴＹＲＰ１特異性抗体は、ヒト野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む他の点では同じ抗体と比較して、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ活性を有するか、またはヒトエフェクター細胞の存在下で増加したＡＤＣＣ活性を有する。一実施形態では、Ｆｃ領域を含む抗体バリアントが提供され、Ｆｃ領域に結合した炭水化物構造は、還元されたフコースを有するか、またはフコースを欠く。
【0049】
「活性化Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃ領域による関与に続いて、受容体保有細胞を刺激してエフェクター機能を実行するシグナル伝達事象を誘発するＦｃ受容体である。活性化Ｆｃ受容体としては、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）およびＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）が挙げられる。「エフェクター機能」という用語は、抗体についての言及に使用される場合、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては：Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）；サイトカイン分泌；抗原提示細胞による免疫複合体媒介抗原取り込み；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；およびＢ細胞の活性化が挙げられる。
【0050】
一実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧクラス（すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブクラス）のものである。
【0051】
好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧ１サブクラスまたはヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。一実施形態では、本明細書中に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスの抗体である。一実施形態では、本明細書に記載される抗体はヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
【0052】
一実施形態では、本明細書に記載される抗体は、定常鎖がヒト起源のものであることを特徴とする。そのような定常鎖は、最新技術で周知であり、例えばＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．およびＷｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８（２０００）２１４－２１８）を参照）に記載されている。
【0053】
本明細書で使用される場合、抗体、Ｆｃドメインサブユニット、抗原結合部分などに関する「第１」、「第２」または「第３」という用語は、各タイプの２つ以上の異なる形態、すなわち多様な抗体、Ｆｃドメインサブユニット、抗原結合部分がある場合に区別する便宜のために使用される。これらの用語の使用は、そのように明示的に示されていない限り、特定の順序または向きを与えることを意図していない。
【0054】
「核酸」または「核酸分子」という用語は、本明細書で使用される場合、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むよう意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよいが、二本鎖ＤＮＡであることが好ましい。
【0055】
本出願において使用される場合、「アミノ酸」という用語は、アラニン（３文字コード：ａｌａ、１文字コード：Ａ）、アルギニン（ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（ａｓｎ，Ｎ）、アスパラギン酸（ａｓｐ、Ｄ）、システイン（シアン、Ｃ）、グルタミン（ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（ｔｒｐ，Ｗ）、チロシン（ｔｙｒ、Ｙ）およびバリン（ｖａｌ、Ｖ）を含む天然に存在するカルボキシα－アミノ酸の群を示す。
【0056】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列アライメントを行い、必要であれば、最大の配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一であり、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない、候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のための整列は、当該技術分野における技術の範囲内にある種々の方法において、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定し得る。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を用いて生成している。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が作成したものであり、ソースコードは、使用者用書類と共に、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９に提出され、ここで、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、またはそのソースコードからコンパイルし得る。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含め、ＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定されており、変わらない。ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ａ対所与のアミノ酸配列Ｂ、所与のアミノ酸配列Ａの所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ａの所与のアミノ酸配列Ｂに対してアミノ酸配列同一性％（あるいは、対所与のアミノ酸配列Ｂ、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対してある特定のアミノ酸配列同一性％を有するまたは含む所与のアミノ酸配列Ａと言い換え得る）は、以下のように計算され：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって、そのプログラムのＡおよびＢのアライメントにおいて同一のマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくないことが理解されるであろう。特に明記しない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されているようにＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して得られる。本発明の参照ヌクレオチド配列と、例えば、少なくとも９５％「同一」であるヌクレオチド配列を有する核酸またはポリヌクレオチドとは、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでの点変異を含み得ること以外は、参照配列と同一であることを意味する。言い換えると、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列内のヌクレオチドの５％までが、欠失していてもよく、もしくは別のヌクレオチドで置換されていてもよく、または参照配列内の全ヌクレオチドの５％までが、参照配列内へと挿入されていてもよい。参照配列のこれらの変更は、参照配列中の残基の間で個別に、もしくは参照配列内の１つ以上の近接する基のいずれかで散在して、参照ヌクレオチド配列の５’または３’末端位置で起こってもよく、または参照配列中の残基それらの末端位置の間のどこかで起こってもよい。実際問題として、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるかどうかは、既知のコンピュータプログラム、例えば、ポリペプチドについて上に記載したもの（例えば、ＡＬＩＧＮ－２）を用いて、従来通りに決定し得る。
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって、そのプログラムのＡおよびＢのアライメントにおいて同一のマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくないことが理解されるであろう。特に明記しない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されているようにＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して得られる。本発明の参照ヌクレオチド配列と、例えば、少なくとも９５％「同一」であるヌクレオチド配列を有する核酸またはポリヌクレオチドとは、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでの点変異を含み得ること以外は、参照配列と同一であることを意味する。言い換えると、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列内のヌクレオチドの５％までが、欠失していてもよく、もしくは別のヌクレオチドで置換されていてもよく、または参照配列内の全ヌクレオチドの５％までが、参照配列内へと挿入されていてもよい。参照配列のこれらの変更は、参照配列中の残基の間で個別に、もしくは参照配列内の１つ以上の近接する基のいずれかで散在して、参照ヌクレオチド配列の５’または３’末端位置で起こってもよく、または参照配列中の残基それらの末端位置の間のどこかで起こってもよい。実際問題として、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるかどうかは、既知のコンピュータプログラム、例えば、ポリペプチドについて上に記載したもの（例えば、ＡＬＩＧＮ－２）を用いて、従来通りに決定し得る。
【0057】
本明細書に記載の抗体を産生する方法であって、本明細書に提供されるような抗体をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養すること、および宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む方法が提供される。
【0058】
抗体は、少なくとも抗原決定基に結合し得る抗体可変領域を含む。可変領域は、天然に存在するかまたは天然に存在しない抗体およびその断片の一部を形成し得、かつそれらに由来し得る。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を生成する方法は、当技術分野で周知である（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ”，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照されたい）。天然に存在しない抗体は、固相－ペプチド合成を用いて構築し得、組換え生産し得（例えば、米国特許第４，１８６，５６７号明細書に記載されているように）、または例えば、可変重鎖および可変軽鎖を含むコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって得られる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙに対する米国特許第５，９６９，１０８号を参照されたい）。抗原結合部分およびそれを産生するための方法も、その内容全体が参照により本明細書に援用される、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１１／０２０７８３号に詳細に記載されている。
【0059】
あらゆる動物種の抗体、抗体断片、抗原結合ドメインまたは可変領域を、本明細書に記載される抗体において使用し得る。本発明において有用な非限定的抗体、抗体断片、抗原結合ドメインまたは可変領域は、マウス、霊長類またはヒト起源のものとし得る。抗体がヒトでの使用を意図する場合、抗体の定常領域がヒト由来であるキメラ形態の抗体を使用してもよい。抗体のヒト化または完全ヒト形態もまた、当該技術分野において周知の方法に従って調製し得る（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたい）。ヒト化は、限定されないが、（ａ）重要なフレームワーク残基（例えば、良好な抗原結合親和性または抗体機能を維持するために重要なもの）を保持しつつ、または保持せずに、非ヒト（例えば、ドナー抗体）のＣＤＲをヒト（例えば、レシピエント抗体）のフレームワーク領域および定常領域上に移植すること、（ｂ）非ヒト特異性決定領域（ＳＤＲまたはａ－ＣＤＲ；抗体－抗原相互作用にとって重要な残基）のみをヒトフレームワークおよび定常領域上に移植すること、または（ｃ）非ヒト可変ドメイン全体を移植するが、表面残基の置き換えによってヒト様切片でそれらを「クローキング」することを含め、種々の方法によって達成されてもよい。ヒト化抗体およびそれらの作製方法は、例えばＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ １３，１６１９－１６３３（２００８）に総説されており、例えばＲｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３３２，３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６，１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および第７，０８７，４０９号；Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３２１，５２２－５２５（１９８６）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８１，６８５１－６８５５（１９８４）；ＭｏｒｒｉｓｏｎおよびＯｉ，Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４４，６５－９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９，１５３４－１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎ ３１（３），１６９－２１７（１９９４）；Ｋａｓｈｍｉｒｉら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６，２５－３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフティングを記載）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８，４８９－４９８（１９９１）（「リサーフェシング」を記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６，４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６，６１－６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａら，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８３，２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記載）でさらに記載されている。ヒト抗体およびヒト可変領域は、当技術分野において既知の種々の技術を使用して生成し得る。ヒト抗体は一般的にｖａｎ Ｄｉｊｋおよびｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５，３６８－７４（２００１）およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０，４５０－４５９（２００８）に記載されている。ヒト可変領域は、ハイブリドーマ法によって作製されたヒトモノクローナル抗体の一部を形成し得、かつ、そのような抗体から得ることが可能である（例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照）。ヒト抗体およびヒト可変領域は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによっても調製し得る（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２３，１１１７－１１２５（２００５）を参照）。ヒト抗体およびヒト可変領域はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変領域配列を単離することにより生成され得る（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８，１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編集，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ ３４８，５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３５２，６２４－６２８（１９９１）を参照）。ファージは、典型的には、抗体断片を、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、またはＦａｂ断片としてのいずれかで抗体断片を表示する。
【0060】
特定の実施形態では、抗体は、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１１／０２０７８３号（親和性成熟に関する実施例を参照）または米国特許出願公開第２００４／０１３２０６６号に記載されており、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。特異的抗原決定基に結合する抗体の能力は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または当業者によく知られている他の技術、例えば表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ １００システムで分析）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄら、Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））および従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかによって測定し得る。競合アッセイを使用して、特定の抗原への結合について参照抗体と競合する抗体、抗体断片、抗原結合ドメインまたは可変ドメインを同定してもよい。一部の実施態様では、そのような競合抗体は、参照抗体により結合されるのと同じエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法が、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）のＭｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ”に提供されている。例示的な競合アッセイでは、固定された抗原は、抗原に結合する第１の標識抗体と、抗原への結合について第１の抗体と競合する能力について試験されている第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在していてもよい。対照として、固定化抗原が、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体は含まない溶液中でインキュベートされる。第１の抗体の抗原への結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な未結合抗体が除去され、固定化抗原に関連付けられる標識の量が測定される。固定化抗原に関連付けられる標識の量が対照サンプルと比較して試験サンプル中で実質的に減少している場合、それは、第２の抗体が、抗原への結合について第１の抗体と競合していることを示している。ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【0061】
本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、国際公開第２０２０／１２７６１９号の実施例に記載されているように調製し得る。
【0062】
本明細書に記載の抗体は、組換え手段によって産生されることが好ましい。そのような方法は、最先端技術において広く知られており、原核生物および真核生物細胞におけるタンパク質発現と、その後の抗体ポリペプチドの分離、および通常は薬学的に許容され得る純度への精製を含む。タンパク質発現については、軽鎖および重鎖またはその断片をコードする核酸が標準的方法によって発現ベクター中に挿入される。発現は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、酵母、または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞などの適切な原核生物および真核生物宿主細胞において実施され、抗体は細胞から回収される（上清から、または細胞溶解後に）。
【0063】
抗体の組換え産生は、技術水準において周知であり、例えば、Ｍａｋｒｉｄｅｓ，Ｓ．Ｃ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．１７（１９９９）１８３－２０２；Ｇｅｉｓｓｅ，Ｓ．ら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．８（１９９６）２７１－２８２；Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２０００）１５１－１６１；Ｗｅｒｎｅｒ，Ｒ．Ｇ．，Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．４８（１９９８）８７０－８８０の総説に記載されている。
【0064】
抗体は、細胞全体に、細胞溶解物で、または部分的に精製されるか、もしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当該技術分野において周知の他のものが含まれる標準的技術によって、他の細胞成分または他の夾雑物、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質を排除するために精製が実施される。Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．ら，編．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照されたい。
【0065】
ＮＳ０細胞における発現は、例えば、Ｂａｒｎｅｓ，Ｌ．Ｍ．，ら，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３２（２０００）１０９－１２３；Ｂａｒｎｅｓ，Ｌ．Ｍ．，ら，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．７３（２００１）２６１－２７０に記載されている。一過性発現は、例えば、Ｄｕｒｏｃｈｅｒ，Ｙ．ら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．３０（２００２）Ｅ９に記載されている。可変ドメインのクローニングは、Ｏｒｌａｎｄｉ，Ｒ．，ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６（１９８９）３８３３－３８３７；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９（１９９２）４２８５－４２８９；Ｎｏｒｄｅｒｈａｕｇ，Ｌ．，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０４（１９９７）７７－８７に記載されている。好ましい一過性発現系（ＨＥＫ ２９３）は、Ｓｃｈｌａｅｇｅｒ，Ｅ．－Ｊ．，およびＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｋ．、Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３０（１９９９）７１－８３により記載され、またＳｃｈｌａｅｇｅｒ，Ｅ．－Ｊ．によるＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １９４（１９９６）１９１－１９９に記載されている。
【0066】
本発明による重鎖および軽鎖可変領域は、プロモーター、翻訳開始、定常領域、３’非翻訳領域、ポリアデニル化、および転写終止の配列と組み合わされて、発現ベクター構築物を形成する。重鎖および軽鎖構築物は、単一のベクター中に組み合わされ、宿主細胞にコトランスフェクトされるか、連続的にトランスフェクトされるか、または別個にトランスフェクトされ、次いでそれらは融合されて、両方の鎖を発現する単一の宿主細胞を形成する。
【0067】
例えば、原核生物に好適である制御配列としては、プロモーター、任意選択でオペレーター配列、およびリボソーム結合部位が挙げられる。真核生物細胞は、プロモーター、エンハンサーおよびポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。
【0068】
核酸は、それが他の核酸配列と機能的な関係で配置されている場合、「作用可能に連結されている」。例えば、プレ配列または分泌リーダー用のＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチド用のＤＮＡと作用可能に連結され、プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響を与える場合、コーディング配列と作用可能に連結され、またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように位置付けられる場合、コーディング配列と作用可能に連結される。一般に、「作用可能に連結されている」は、連結されているＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合には、近接してリーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、近接している必要はない。連結は、便利な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来の実例に従って使用される。
【0069】
モノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティクロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地から好適に分離される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡおよびＲＮＡは、容易に単離され、従来の手順を使用して配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡおよびＲＮＡの供給源として機能し得る。一旦単離されると、ＤＮＡは発現ベクター中に挿入し得、次いで、発現ベクターが、免疫グロブリンタンパク質を別途産生しないＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、宿主細胞中の組換えモノクローナル抗体の合成を得る。
【0070】
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、および「細胞培養物」という表現は、互換的に使用され、全てのそのような表記は子孫を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」という語は、初代対象細胞および細胞の移入回数に関係なくそれらに由来する培養物を含む。また、全ての子孫は、意図的な、または想定外の変異に起因して、ＤＮＡ含量において厳密に同一でない場合があることが理解される。元々の形質転換された細胞についてスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有するバリアント子孫が含まれる。
【0071】
治療方法および組成物
本発明は、治療有効量の、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法を患者に投与することを特徴とする、治療を必要とする患者を治療する方法を含む。
本発明は、治療有効量の、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法を患者に投与することを特徴とする、治療を必要とする患者を治療する方法を含む。
【0072】
本発明は、記載される併用療法のための本発明による抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の使用を含む。
【0073】
本発明の好ましい一実施形態は、がんまたは腫瘍の処置において使用するための本発明の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体とＴＹＲＰ１特異性抗体との併用療法である。したがって、本発明の一実施形態は、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせてがんまたは腫瘍の処置に使用するための、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体である。本発明の別の実施形態は、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせてがんまたは腫瘍の処置に使用するための、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体である。
【0074】
本明細書で使用される「がん」という用語は、例えば、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬ）、細気管支肺胞上皮細胞肺がん、骨のがん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚または眼内メラノーマ、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、乳がん、子宮がん、ファローピウス管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、上皮小体がん、副腎がん、軟組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓または尿管のがん、腎細胞がん、腎盂がん、中皮腫、肝細胞がん、胆管がん、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、神経鞘腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮がん、下垂体腺腫、リンパ腫、リンパ性白血病であり得、上記がんのいずれかの難治性型、または上記がんのうちの１つ以上の組み合わせが含まれる。好ましい一実施形態では、そのようながんは、乳がん、結腸直腸がん、メラノーマ、頭頸部がん、肺がん、または前立腺がんである。好ましい一実施形態では、そのようながんは、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、肺がん、または前立腺がんである。別の好ましい実施形態では、そのようながんは、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、メラノーマがん、膀胱がん、腎がん、腎臓がん、肝臓がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、食道がん、中皮腫、前立腺がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫である。好ましい一実施形態では、そのようながんは、ＴＹＲＰ１発現癌である。
【0075】
本発明の一実施形態は、上記のがんまたは腫瘍のいずれかの処置に使用するための、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体である。本発明の別の実施形態は、上記のがんまたは腫瘍のいずれかの処置に使用するための、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体である。本発明は、がんの治療のための、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体および本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法を含む。本発明は、転移の予防または処置のための、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体および本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法を含む。
【0076】
本発明は、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療するための方法であって、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体および本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を患者に投与することを特徴とする方法を含む。本発明は、転移の予防または処置を必要とする患者における転移の予防または処置のための方法であって、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体および本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を患者に投与することを特徴とする方法を含む。
【0077】
本発明は、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせてがんの治療に使用するための、または本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせてがんを治療するための医薬を製造するための、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む。
【0078】
本発明は、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせて転移の予防または処置に使用するための、あるいは本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせて転移を予防または処置するための医薬を製造するための、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む。
【0079】
本発明は、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせてがんの治療に使用するための、または本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせてがんを治療するための医薬を製造するための、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を含む。
【0080】
本発明は、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせて転移の予防または処置に使用するための、あるいは本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体と組み合わせて転移を予防または処置するための医薬を製造するための、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を含む。
【0081】
本発明の好ましい実施形態では、上記の異なる疾患の併用処置および医学的使用において使用される抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、配列番号５、配列番号６、配列番号７および配列番号８のポリペプチド配列を含むことを特徴とする抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体であり、そのような併用処置において使用されるＴＹＲＰ１特異性抗体が、配列番号１３および配列番号１４のポリペプチド配列を含むことを特徴とする。
【0082】
別の態様では、本発明は、薬学的に許容され得る担体と共に製剤化された、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体および本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を含有する組成物、例えば医薬組成物を提供する。
【0083】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容され得る担体」としては、生理学的に適合するありとあらゆる抗体、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収／再吸収遅延剤などが挙げられる。好ましくは、担体は、注射または注入に好適である。
【0084】
本発明の組成物は、当該技術分野において既知のさまざまな方法によって投与され得る。当業者に理解されるように、投与の経路および様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。
【0085】
薬学的に許容され得る担体としては、滅菌水溶液または分散液および滅菌注射用溶液または分散液の調製のための滅菌粉末が挙げられる。そのような媒体および薬剤の薬学的に活性な物質のための使用は、当該技術分野において既知である。水に加えて、担体は、例えば、等張性緩衝生理食塩水であり得る。
【0086】
選択される投与の経路とは関係なく、好適な水和形態で使用され得る本発明の化合物、および／または本発明の薬学的組成物は、当業者に既知の従来の方法によって、薬学的に許容され得る剤形に製剤化される。
【0087】
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に対して毒性を示すことなく、特定の患者、組成物、および投与様式に対して所望の治療応答を達成するのに有功な有効成分の量（有効量）を得るために変化し得る。選択される投与量レベルは、使用される本発明の特定の組成物、またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与様式、投与の時間、使用される特定の化合物の排出速度、使用される特定の組成物と組み合わせて用いられる他の薬物、化合物および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康および既往歴、ならびに医学分野において周知の同様な因子を含むさまざまな薬物動態因子に依存するであろう。
【0088】
一態様では、本発明は、疾患の処置を意図したキットであって、（ａ）本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体、および（ｂ）本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を同じまたは別個の容器内に含み、（ｃ）疾患を処置するための方法としての併用処置の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を場合によりさらに含むキットを提供する。さらに、キットは、（ａ）本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む組成物が収容された第１の容器；（ｂ）本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を含む組成物が収容された第２の容器を含み得；場合により（ｃ）その中に含有される組成物を含む第３の容器であって、組成物がさらなる細胞毒性薬または他の治療薬を含む、第３の容器を含み得る。この実施形態におけるキットは、組成物を使用して特定の状態を処置し得ることを示す添付文書をさらに含んでもよい。あるいは、またはさらに、キットは、薬学的に許容され得る緩衝液（例えば静菌された注射用蒸留水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液またはデキストロース溶液を含む第３の（または、第４の）容器をさらに含んでもよい。本製造品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料を更に備えてもよい。
【0089】
別の態様では、本発明は、（ａ）本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／ＣＤ３抗体を含む容器、および（ｂ）疾患を処置するための方法として本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体との併用療法における抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体の使用を指示する添付文書を含む、疾患の処置を意図したキットを提供する。
【0090】
別の態様では、本発明は、（ａ）本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を含む容器、および（ｂ）疾患を処置する方法として本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体との併用療法におけるＴＹＲＰ１特異性抗体の使用を指示する説明書を含む添付文書を含む、疾患の処置を意図したキットを提供する。
【0091】
さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体を含む、疾患の処置を意図した医薬を提供し、この医薬は、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体との併用療法において使用するためのものであり、場合により、疾患を処置するための方法としての併用処置の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を含む。
【0092】
なおさらなる態様では、本発明は、本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体を含む、疾患の処置を意図した医薬を提供し、この医薬は、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体との併用処置において使用するためのものであり、場合により、疾患を処置するための方法としての併用処置の使用を指示する印刷された説明書を含む添付文書を含む。
【0093】
「処置する方法」という用語またはその同等物は、例えば、がんに適用される場合、患者において癌細胞の数を低減もしくは排除するように設計された、またはがんの症状を緩和するように設計された処置また一連の措置を指す。がんまたは別の増殖性疾患を「処置する方法」は、癌細胞もしくは他の障害が実際に排除されること、細胞もしくは障害の数が実際に低減されること、またはがんもしくは他の障害の症状が実際に緩和されることを必ずしも意味するものではない。多くの場合、がんを治療する方法は、成功の可能性が低い場合でも実行されるが、患者の病歴および推定生存能力を考えれば、それでも全体的に有益な一連の措置を誘導すると見なされる。
【0094】
「～と組み合わせて投与される」または「同時投与」、「同時投与」、「併用療法」または「併用処置」という用語は、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の、例えば別々の製剤／用途（または単一の製剤／用途）としての投与を指す。共投与は、同時にまたはいずれかの順序で連続的であってもよく、両方の活性剤（または全ての）活性剤が同時に生物活性を発揮する期間があることが望ましい。活性剤は、連続的注入を通して同時にまたは連続的のいずれかで共投与（例えば、静脈内（ｉ，ｖ．））される。両方の治療剤が連続的に共投与される場合、用量は、２つの別々の投与で同日に投与されるか、または薬剤の一方が１日目に投与され、２番目の薬剤が２日目から７日目まで、好ましくは２日目から４日目まで共投与される。したがって、一実施形態では、「連続的に」という用語は、第１の成分の投与後７日以内、好ましくは第１の成分の投与後４日以内を意味し、「同時に」という用語は、同じ時間の投与を意味する。抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体および／またはＴＹＲＰ１特異性抗体の維持用量に関する「同時投与」という用語は、処置サイクルが両方の薬物に適切である場合、例えば毎週、維持用量を同時に同時投与し得ることを意味する。または維持用量を連続的に同時投与し、例えば、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の用量を交互の週に投与する。
【0095】
抗体が「治療有効量」（または簡単に「有効量」）で患者に投与されることは明白であり、これは、研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって探求されている組織、系、動物、またはヒトの生物学的または医学的奏功を誘発するそれぞれの化合物または組み合わせの量である。
【0096】
共投与の量および共投与のタイミングは、タイプ（種、性別、年齢、体重など）および治療される患者の状態ならびに治療される疾患または状態の重症度に依存するであろう。当該抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体および／またはＴＹＲＰ１特異性抗体は、一度に、または一連の処置にわたって、例えば同日に、またはその後の日に、または毎週間隔で患者に適切に同時投与される。
【0097】
ＴＹＲＰ１特異性抗体と組み合わせた抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体に加えて、化学療法剤も投与し得る。
【0098】
一実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体および本明細書に記載のＴＹＲＰ１特異性抗体とともに投与され得るそのような追加の化学療法剤としては、限定されないが、以下を含むアルキル化剤を含む抗腫瘍薬が挙げられる：メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランおよびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（メチル－ＣＣＮＵ）などのニトロソウレア；Ｔｅｍｏｄａｌ（商標）（テモゾールアミド）、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、トリエチレン、チオホスホラミド（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン）などのエチレンイミン／メチルメラミン；ブスルファンなどのアルキルスルホネート；ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などのトリアジン；メトトレキサートおよびトリメトレキサートなどの葉酸類似体、５－フルオロウラシル（５ＦＵ）、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５－アザシチジン、２，２’－ジフルオロデオキシシチジンなどのピリミジン類似体、６－メルカプトプリン、６－チオグアン、アザチオプリン、Ｔ－デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ＥＨＮＡ）、リン酸フルダラビンおよび２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２－ＣｄＡ）などのプリン類似体を含む代謝拮抗剤；パクリタキセルなどの抗有糸分裂薬、ビンブラスチン（ＶＬＢ）、ビンクリスチン、およびビノレルビンを含むビンカアルカロイド、タキソテール、エストラムスチン、およびリン酸エストラムスチンを含む天然産物；エトポシドおよびテニポシドなどのピポドフィロトキシン；アクチノマイシンＤ、ダウノマイシン（ルビドマイシン）、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンＣ、およびアクチノマイシンなどの抗生物質；Ｌ－アスパラギナーゼなどの酵素；インターフェロン－アルファ、ＩＬ－２、Ｇ－ＣＳＦおよびＧＭ－ＣＳＦなどの生物学的応答修飾物質；オキサリプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金配位錯体、ミトキサントロンなどのアントラセンジオン、ヒドロキシ尿素などの置換尿素、Ｎ－メチルヒドラジン（ＭＩＨ）およびプロカルバジンを含むメチルヒドラジン誘導体、ミトタン（ｏ，ｐ－ＤＤＤ）およびアミノグルテチミドなどの副腎皮質抑制剤を含む種々の薬剤；プレドニゾンおよび同等物、デキサメタゾンおよびアミノグルテチミドなどの副腎皮質ステロイド拮抗薬を含むホルモンおよび拮抗薬；Ｇｅｍｚａｒ（商標）（ゲムシタビン）、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲストロールなどのプロゲスチン；ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール同等物などのエストロゲン；タモキシフェンなどの抗エストロゲン；プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン／同等物を含むアンドロゲン；フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体およびロイプロリドなどの抗アンドロゲン；ならびにフルタミドなどの非ステロイド性抗アンドロゲン。後成的機構を標的とする療法としては、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、脱メチル化剤（例えば、Ｖｉｄａｚａ）が挙げられるが、これらに限定されず、転写抑制の解除（ＡＴＲＡ）療法も、抗原結合タンパク質と組み合わせ得る。一実施形態では、化学療法剤は、タキサン（例えば、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾パクリタキセル（例えば、アブラキサンおよびオパキシオ）のような）、ドキソルビシン、スニチニブ（スーテント）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ）、ならびに他のマルチキナーゼ阻害剤、オキサリプラチン、シスプラチンおよびカルボプラチン、エトポシド、ゲムシタビン、およびビンブラスチンからなる群から選択される。一実施形態では、化学療法剤は、タキサン（例えば、タキソール（パクリタキセル）、ドセタキセル（タキソテール）、修飾パクリタキセル（例えば、アブラキサンおよびオパキシオ）のような）からなる群から選択される。一実施形態では、追加の化学療法剤は、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ロイコボリン、イリノテカン、またはオキサリプラチンから選択される。一実施形態では、化学療法剤は、５－フルオロウラシル、ロイコボリンおよびイリノテカン（ＦＯＬＦＩＲＩ）である。一実施形態では、化学療法剤は、５－フルオロウラシルおよびオキサリプラチン（ＦＯＬＦＯＸ）である。
【0099】
追加の化学療法剤との併用療法の具体的な例としては、例えば、乳がんの治療のための、タキサン（例えば、ドセタキセルまたはパクリタキセル）または修飾パクリタキセル（例えば、アブラキサンもしくはオパキシオ）、ドキソルビシン）、カペシタビンおよび／もしくはベバシズマブ（アバスチン）を用いた療法；卵巣がんの治療のためのカルボプラチン、オキサリプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ドキソルビシン（もしくは修飾ドキソルビシン（Ｃａｅｌｙｘもしくはドキシル））、またはトポテカン（ハイカムチン）を用いた療法；腎臓がんの治療のためのマルチキナーゼ阻害剤、ＭＫＩ、（スーテント、Ｎｅｘａｖａｒ、もしくは７０６）および／またはドキソルビシンを用いた療法；扁平上皮細胞がんの治療のためのオキサリプラチン、シスプラチンおよび／または放射線を用いた療法；肺がんの治療のためのタキソールおよび／またはカルボプラチンを用いた療法が挙げられる。
【0100】
したがって、一実施形態では、追加の化学療法剤は、乳がんの治療のための、タキサン（ドセタキセルもしくはパクリタキセルもしくは修飾パクリタキセル（アブラキサンもしくはオパキシオ）、ドキソルビシン、カペシタビンおよび／またはベバシズマブの群から選択される。
【0101】
一実施形態では、抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の併用療法は、化学療法剤が投与されないものである。
【0102】
本発明はまた、本明細書に記載されるそのような疾患を患う患者を治療するための方法も含む。
【0103】
本発明はさらに、有効量の本明細書に記載の本発明の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体および本明細書に記載の本発明のＴＹＲＰ１特異性抗体を薬学的に許容され得る担体と共に含む医薬組成物の製造方法、ならびにそのような方法のための本明細書に記載の本発明の抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体およびＴＹＲＰ１特異性抗体の使用を提供する。
【0104】
本発明はさらに、がんに罹患している患者を治療するための、好ましくは薬学的に許容され得る担体とともに。医薬の製造のための有効量での、本明細書に記載される本発明による抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３抗体および本明細書に記載される本発明によるＴＹＲＰ１特異性抗体の使用を提供する。
【0105】
細胞療法
いくつかの実施形態では、免疫療法は、活性化免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、がんの治療として提供される。いくつかの実施形態では、免疫療法は、養子細胞移植を含む。
いくつかの実施形態では、免疫療法は、活性化免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、がんの治療として提供される。いくつかの実施形態では、免疫療法は、養子細胞移植を含む。
【0106】
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）の投与を含む。当業者は、ＣＡＲが細胞外腫瘍結合部分と融合した細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインから構成される抗原標的化受容体の一種であり、最も一般的には、モノクローナル抗体からの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であることを理解するであろう。
【0107】
ＣＡＲは、ＭＨＣ媒介提示とは独立して細胞表面抗原を直接認識し、全ての患者における任意の所与の抗原に特異的な単一の受容体構築物の使用を可能にする。初期のＣＡＲは、抗原認識ドメインをＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３活性化鎖に融合させた。これらの第１世代のＣＡＲは、インビトロでＴ細胞エフェクター機能を誘発させたが、それらは、主にインビボでの不十分な抗腫瘍有効性によって制限された。その後のＣＡＲの繰り返しには、ＣＤ３と並行して二次共刺激シグナルが含まれており、これらにはＣＤ２８に由来する細胞内ドメイン、または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＯＸ４０（ＣＤ１３４）などのさまざまなＴＮＦ受容体ファミリー分子が含まれた。さらに、第３世代受容体は、ＣＤ３に加えて２つの共刺激シグナル、最も一般的には、ＣＤ２８および４－１ＢＢに由来するものを含む。第２世代および第３世代のＣＡＲは、抗腫瘍有効性を劇的に改善し、いくつかの場合では、進行癌を有する患者における完全寛解を引き起こす。一実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現するように改変された免疫応答性細胞であり、これはＣＡＲがその抗原に結合すると活性化される。
【0108】
一実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、抗原受容体を含む免疫応答性細胞であり、これはその受容体がその抗原に結合すると活性化される。一実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第１世代ＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第２世代ＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第３世代ＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第４世代ＣＡＲ Ｔ細胞である。
【0109】
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞を投与することを含む。当業者は、ＴＣＲ改変Ｔ細胞が、腫瘍組織からＴ細胞を単離し、それらのＴＣＲａおよびＴＣＲβ鎖を単離することによって製造されることを理解するであろう。これらのＴＣＲａおよびＴＣＲβは、その後クローニングされ、末梢血から単離されたＴ細胞にトランスフェクトされ、次いで、腫瘍を認識するＴ細胞からＴＣＲａおよびＴＣＲβを発現する。
【0110】
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変ＮＫ細胞を投与することを含む。当業者は、ＣＡＲ改変ＮＫ細胞が、患者から単離されたＮＫ細胞または腫瘍特異的タンパク質を認識するＣＡＲを発現するように操作された市販のＮＫ細胞を含むことを理解されるであろう。
【0111】
いくつかの実施形態では、養子細胞移植は、樹状細胞を投与することを含む。
【0112】
いくつかの実施形態では、免疫療法は、癌ワクチンを投与することを含む。当業者は、癌ワクチンが免疫系を癌特異的抗原およびアジュバントに曝露することを理解されるであろう。いくつかの実施形態では、癌ワクチンは、シプリューセル－Ｔ（ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ）、ＧＶＡＸ、ＡＤＸＳ１１－００１、ＡＤＸＳ３１－００１、ＡＤＸＳ３１－１６４、ＡＬＶＡＣ－ＣＥＡワクチン、ＡＣワクチン、タリモジーン・ラハーパレプベック（ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）、ＢｉｏｖａｘＩＤ、Ｐｒｏｓｔｖａｃ、ＣＤＸ１１０、ＣＤＸ１３０７、ＣＤＸ１４０１、ＣｉｍａＶａｘ－ＥＧＦ、ＣＶ９１０４、ＤＮＤＮ、ＮｅｕＶａｘ、Ａｅ－３７、ＧＲＮＶＡＣ、ｔａｒｍｏｇｅｎｓ、ＧＩ－４０００、ＧＩ－６２０７、ＧＩ－６３０１、ＩｍＰＡＣＴ Ｔｈｅｒａｐｙ、ＩＭＡ９０１、ｈｅｐｃｏｒｔｅｓｐｅｎｌｉｓｉｍｕｔ－Ｌ、Ｓｔｉｍｕｖａｘ、ＤＣＶａｘ－Ｌ、ＤＣＶａｘ－Ｄｉｒｅｃｔ、ＤＣＶａｘ Ｐｒｏｓｔａｔｅ、ＣＢＬＩ、Ｃｖａｃ、ＲＧＳＨ４Ｋ、ＳＣＩＢ１、ＮＣＴ０１７５８３２８、およびＰＶＸ－４１０からなる群から選択される。
【0113】
以下の実施例、配列表および図面は、本発明の理解を助けるために提供され、その真の範囲は、添付の特許請求の範囲において示される。本発明の思想から逸脱することなく、定められた手順に変更を加え得ると理解される。
【0114】
更なる実施形態：
本発明のさらなる実施形態は、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む新規ＴＹＲＰ１特異性抗体である。
本発明のさらなる実施形態は、配列番号１の重鎖可変ドメインＶＨおよび配列番号２の軽鎖可変ドメインＶＬを含む新規ＴＹＲＰ１特異性抗体である。
【0115】
一実施形態では、当該ＴＹＲＰ１特異性抗体はヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。
【0116】
別の実施形態では、ＴＹＲＰ１特異性抗体は、配列番号１３および配列番号１４のポリペプチド配列、または配列番号１５および配列番号１６のポリペプチド配列を含む。
【実施例】
【0117】
ｍｕＴＹＲＰ１ ＩｇＧの作製および精製
ヒトＩｇＧ１分子はマウスにおいて免疫原性応答を引き起こすので、糖鎖改変されたｍｕＩｇＧ２ａを動物実験のための代用分子として使用した。
ヒトＩｇＧ１分子はマウスにおいて免疫原性応答を引き起こすので、糖鎖改変されたｍｕＩｇＧ２ａを動物実験のための代用分子として使用した。
【0118】
抗体の重鎖および軽鎖を、ヒトＣＭＶプロモーター－イントロンＡ－５’ＵＴＲカセットの制御下で、一方のプラスミド上にクローニングした。遺伝子の下流には、ＢＧＨポリアデニル化シグナルが位置する。ラットＧｎＴＩＩＩ遺伝子を、ラット腎臓ｃＤＮＡライブラリー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）からポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅した。ＭａｎＩＩをコードする遺伝子を、遺伝子特異的プライマーを使用してヒトＤＮＡから増幅した。両方の遺伝子をキメラＭＰＳＶプロモーターと組み合わせ、発現ベクターにサブクローニングした。ベクターは、ｐＵＣ１８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）から、ピューロマイシン耐性遺伝子またはハイグロマイシン耐性遺伝子および発現増強のための足場付着領域（ＳＡＲ）のいずれかを挿入することによって誘導した。
【0119】
ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ細胞を、抗ＴＹＲＰ１ ｍｕＩｇＧ２ａの重鎖および軽鎖ならびにＮ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ－ＩＩＩ（ＧｎｔＩＩＩ）およびマンノシダーゼ－ＩＩ（ＭａｎＩＩ）酵素をコードするプラスミドでトランスフェクトした。安定なクローンを選択し、無血清培地中で最大１４日間流加培養に供して、修飾されたグリコシル化構造を有する抗体を作製した。遠心分離およびその後の濾過（０．２μｍフィルタ）により細胞上清を回収し、以下に示す標準的な方法により、回収した上清から抗体を精製した。
【0120】
タンパク質は、標準プロトコルに言及される、フィルタにかけた細胞培養物上清から精製した。簡単に説明すると、Ｆｃ含有タンパク質を、プロテインＡ－アフィニティクロマトグラフィー（平衡化緩衝液：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５；溶出緩衝液：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、１００ｍＭ塩化ナトリウム、１００ｍＭグリシン、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ３．０）によって細胞培養上清から精製した。溶出はｐＨ３．０で達成され、その直後にサンプルをｐＨ中和した。タンパク質を遠心分離（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）ＵＬＴＲＡ－１５（Ａｒｔ．Ｎｒ：ＵＦＣ９０３０９６）によって濃縮し、凝集したタンパク質を、２０ｍＭヒスチジン、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ６．０中のサイズ排除クロマトグラフィーによって単量体タンパク質から分離した。
【0121】
Ｐａｃｅら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，４，２４１１－１４２３に従ったアミノ酸配列に基づき計算した質量減衰係数を用いて、２８０ｎｍにおける吸収を測定することにより、精製したタンパク質の濃度を測定した。タンパク質の純度および分子量を、ＬａｂＣｈｉｐＧＸＩＩまたはＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ Ｔｏｕｃｈ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、還元剤の存在下および非存在下でＣＥ－ＳＤＳによって分析した。凝集物含有量の測定は、ランニング緩衝液（２００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、２５０ｍＭ ＫＣｌ ｐＨ６．２、０．０２％ ＮａＮ３）で平衡化した分析用サイズ排除カラム（ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ ＳＷ ＸＬまたはＵＰ－ＳＷ ３０００）を使用して、２５℃でＨＰＬＣクロマトグラフィーによって行った。アフコシル化レベルの決定のために、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．０中の０．００５ＵのＰＮＧａｓｅ Ｆ（ＱＡｂｉｏ、米国）およびＥｎｄｏＨ（ＱＡｂｉｏ、米国）と共に３７℃で１６時間インキュベートすることによって、Ｎ結合型オリゴ糖を精製ＩｇＧから切断した。これにより遊離オリゴ糖が得られ、これをＰａｐａｃら（１９９６）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６８：３２１５－３２２３に従って陽イオンモードでＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析（Ａｕｔｏｆｌｅｘ、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ ＧｍｂＨ）によって分析した。
【0122】
【表1】
【0123】
【表2】
【0124】
【表3】
【0125】
糖鎖改変されたＴＹＲＰ１マウスＩｇＧ２ａをプロテインＡおよびサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。精製された物質の品質分析により、分析サイズ排除クロマトグラフィー分析（表１）によって９９％のモノマー含有量、非還元キャピラリー電気泳動（表２）によって９５％の主要生成物ピーク、およびＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ分析（表３）によって５２％のアフコシル化レベルが明らかになった。したがって、糖鎖改変されたＴＹＲＰ１マウスＩｇＧ２ａは、ＡＤＣＣの増加を確実にするのに十分なアフコシル化レベルで良質に産生され得る。
【0126】
単独およびＴＹＲＰ１－ＩｇＧ抗体と組み合わせた、マウス腫瘍細胞株の同系モデルにおける抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体のインビボ有効性。
【0127】
抗ＴＹＲＰ１／抗ＣＤ３二重特異性抗体（ＴＹＲＰ１－ＴＣＢ）を、Ｂ１６－ｍｕＦＡＰ－Ｆｌｕｃ転移性メラノーマ同系モデルにおいて、その抗腫瘍有効性について、ＴＹＲＰ１－ＩｇＧ抗体と組み合わせて試験した。マウス代用物のｍｕＴＹＲＰ１－ＴＣＢ（配列番号９、１０、１１および１２）およびｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧ（配列番号１５および１６）を、マウスメラノーマＢ１６－ｍｕＦＡＰ－Ｆｌｕｃダブルトランスフェクタント細胞株を静脈内注射したＢｌａｃｋ ６アルビノマウスにおいて試験した。
【0128】
Ｂ１６細胞（マウスメラノーマ細胞）を最初にＡＴＣＣ（米国バージニア州マナッサス）から得て、増加後にＲｏｃｈｅ－Ｇｌｙｃａｒｔ内部細胞バンクに寄託した。Ｂ１６－ｍｕＦＡＰ－Ｆｌｕｃ細胞株を、カルシウムトランスフェクションおよびサブクローニング技術によって自社で作製した。Ｂ１６－ｍｕＦＡＰ－Ｆｌｕｃを、１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ）、２００μｇ／ｍｌ Ｚｅｏｃｉｎ、０．７５μｇ／ｍｌピューロマイシンおよび１％Ｇｌｕｔａｍａｘを含有するＲＰＭＩ培地中で培養した。細胞を３７°Ｃ、水飽和雰囲気、５％ＣＯ２で培養した。継代１３を移植に使用した。細胞生存度は、９４．３％であった。動物ごとに、０．３ｍｌのツベルクリンシリンジ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ドイツ）を用いて２×１０５個の細胞を静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。２００マイクロリットルの細胞懸濁液（ＲＰＭＩ培地中、２×１０５個のＢ１６－ｍｕＦＡＰ－Ｆｌｕｃ細胞）を尾静脈に注射した。
【0129】
実験開始時の８週齢～１０週齢の雌性Ｂｌａｃｋ６アルビノマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ、フランス、リヨン）を、拘束ガイドライン（ＧＶ－Ｓｏｌａｓ；フェラサ；ティアーシュ）に従って１２時間明期／１２時間暗期の毎日のサイクルで特定病原体を含まない条件下で維持した。実験研究プロトコルは、地方自治体によって検討および承認された（ＺＨ２２５／２０１７）。到着後、動物は、新しい環境に慣れさせ、観察するために、１週間維持された。継続的な健康モニタリングが定期的に行われた。
【0130】
マウスに、試験０日目に、２×１０５個のＢ１６－ｍｕＦＡＰ－Ｆｌｕｃ細胞を静脈内注射し、ランダム化し、秤量した。腫瘍細胞注射の１８日後、マウスに、ｍｕＴＹＲＰ１－ＴＣＢまたはｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧ単剤を週１回、４週間ｉ．ｖ．注射し、ｍｕＴＹＲＰ１－ＴＣＢ＋ｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧの組み合わせと比較した。
【0131】
全てのマウスに、２００μｌの適切な溶液を静脈内に注入した。ビヒクル群のマウスにヒスチジン緩衝液を注射し、処置群には１０ｍｇ／ｋｇのｍｕＴＹＲＰ１－ＴＣＢおよび２０ｍｇ／ｋｇのｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧを注射した。２００μｌあたり適切な量の免疫複合体を得るために、原液を必要に応じてヒスチジン緩衝液で希釈した。
【0132】
【表4】
【0133】
図１は、ｍｕＴＹＲＰ１－ＴＣＢおよびｍｕＴＹＲＰ１－ＩｇＧの組み合わせが、他の全ての処置群およびビヒクル群と比較して、中央値および全生存の向上に関して有意に優れた有効性を媒介することを示す。
【0134】
【図1】
【配列表】
【国際調査報告】