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特表2024-546589ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを使用したがんの治療
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-12-26
(54)【発明の名称】ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを使用したがんの治療
(51)【国際特許分類】
C07K 16/46 20060101AFI20241219BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241219BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241219BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241219BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20241219BHJP
【ＦＩ】
C07K16/46 ZNA
A61P35/00
A61P43/00 121
A61K39/395 E
A61K39/395 T
A61K45/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024529706
(86)(22)【出願日】2022-12-13
(85)【翻訳文提出日】2024-05-27
(86)【国際出願番号】 EP2022085479
(87)【国際公開番号】W WO2023110788
(87)【国際公開日】2023-06-22
(31)【優先権主張番号】21214258.2
(32)【優先日】2021-12-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】514099673
【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】カイザー， サイモン パトリック
(72)【発明者】
【氏名】ヴァインツィアル， ティナ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC41
4C084ZC751
4C085AA13
4C085BB31
4C085CC22
4C085DD61
4C085EE03
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、がんの治療に関し、特にＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを使用したがんの治療に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
個体のがんの治療における使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体であって、治療が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとの組み合わせでのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の投与を含む、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体。
【請求項2】
個体のがんの治療における使用のための４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストであって、治療が、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体との組み合わせでの４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む、使用のための４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト。
【請求項3】
個体のがんの治療のための医薬の製造におけるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の使用であって、治療が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとの組み合わせでのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の投与を含む、使用。
【請求項4】
個体のがんの治療のための医薬の製造における４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの使用であって、治療が、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体との組み合わせでの４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む、使用。
【請求項5】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを個体に投与することを含む、個体のがんを治療するための方法。
【請求項6】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体を含む第１の医薬と、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含む第２の医薬とを含み、任意選択的に、個体のがんを治療するための第２の医薬との組み合わせでの第１の医薬の投与のための説明を含む添付文書をさらに含むキット。
【請求項7】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体が、（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分であって、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む第１の抗原結合部分と；
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する第２の抗原結合部分であって、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む第２の抗原結合部分と
を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、方法又はキット。
【請求項8】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体が、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する第３の抗原結合部分並びに／又は第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、方法又はキット。
【請求項9】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体が、（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分であって、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である第１の抗原結合部分と；
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する第２及び第３の抗原結合部分であって、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、第２及び第３の抗原結合部分の各々がＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２及び第３の抗原結合部分と；
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、
第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、Ｆｃドメインと
を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項10】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合部分が、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含み、並びに／又はＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分が、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、方法又はキット。
【請求項11】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子であり、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分が、定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）従来のＦａｂ分子である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項12】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体のＦｃドメインが、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾を含み、並びに／又はＦｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合を低減する及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項13】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが、４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片、特に４－１ＢＢＬの３つの外部ドメイン又はそれらの断片を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項14】
４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片が、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５からなる群から選択されるアミノ酸配列、特に配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項15】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが、腫瘍関連抗原、特に線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的に結合する抗原結合部分を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項16】
ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分が、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３７のＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と；配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４０のＬＣＤＲ２、及び配列番号４１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１５に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項17】
ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分が、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、請求項１５又は１６に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項18】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが、第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインを含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項19】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストのＦｃドメインが、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾を含み、並びに／又はＦｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合を低減する及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む、請求項１８に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項20】
４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニストが、（ｉ）４－１ＢＢＬの第１、第２及び第３の外部ドメイン又はそれらの断片；
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分であって、Ｆａｂ分子である抗原結合部分；
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメイン；
（ｉｖ）ＣＬドメイン及びＣＨ１ドメイン
を含む抗原結合分子であり、
抗原結合分子が、
（ａ）（ａ１）そのＣ末端において４－１ＢＢＬの第２の外部ドメイン又はその断片のＮ末端に融合している４－１ＢＢＬの第１の外部ドメイン又はその断片、（ａ２）そのＣ末端においてＣＬドメインのＮ末端に融合している４－１ＢＢＬの第２の外部ドメイン又はその断片、（ａ３）そのＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの一方（例えば第１のサブユニット）のＮ末端に融合しているＣＬドメイン、及び（ａ４）Ｆｃドメインのサブユニットのうちの一方（例えば第１のサブユニット）を含む第１のポリペプチドと；
（ｂ）（ｂ１）そのＣ末端においてＣＨ１ドメインのＮ末端に融合している４－１ＢＢＬの第３の外部ドメイン又はその断片、及び（ｂ２）ＣＨ１ドメインを含む第２のポリペプチドと；
（ｃ）（ｃ１）そのＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの他方（例えば第２のサブユニット）のＮ末端に融合しているＦａｂ分子の重鎖、及び（ｃ２）Ｆｃドメインのサブユニットのうちの他方（例えば第２のサブユニット）を含む第３のポリペプチドと；
（ｄ）Ｆａｂ分子の軽鎖を含む第４のポリペプチドと
から構成される、請求項１から１９のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項21】
第１のポリペプチドのＣＬドメインにおいて、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第２のポリペプチドのＣＨ１ドメインにおいて、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、請求項２０に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項22】
第１のポリペプチドが、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチドが、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチドが、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２０又は２１に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項23】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが、抗４－１ＢＢ抗体、特に抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ二重特異性抗体である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項24】
がんが、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性がんである、請求項１から２３のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項25】
がんが、肺がん、頭頸部がん、膀胱がん、食道がん、皮膚がん、軟組織がん、胃がん、子宮頸がん及び卵巣がんからなる群から選択されるがんである、請求項１から２４のいずれか一項に記載の、使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、使用のための４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニスト、使用、使用、方法又はキット。
【請求項26】
先に記載されるとおりの発明。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、がんの治療に関し、特にＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを使用したがんの治療に関する。
【背景技術】
【0002】
Ｔ細胞活性化二重特異性抗体は、腫瘍細胞に対して細胞傷害性Ｔ細胞を用いるように設計された有望ながん治療法である。このような抗体がＴ細胞上のＣＤ３と腫瘍細胞上に発現される抗原とに同時結合すると、腫瘍細胞とＴ細胞とを一時的に強制的に相互作用させ、Ｔ細胞の活性化と、その後の腫瘍細胞の溶解とを引き起こす。
【0003】
ＭＡＧＥ－Ａ４（黒色腫関連抗原４）は、がん精巣抗原（ＣＴＡ）のＭＡＧＥファミリーのメンバーである。タンパク質のＭＡＧＥ－Ａファミリーは、Ｘｑ２６－２８でクラスター化された、保存ドメイン（ＭＡＧＥ相同性ドメイン、ＭＨＤ）の存在を特徴とする１２の高度に相同性の遺伝子を包含する。２０年以上前に発見されたにも関わらず、ＭＡＧＥタンパク質の生物的機能は依然としてよく分かっていない。その発現パターンに基づいて、ＭＡＧＥファミリーは２つのサブファミリー、即ちタイプ－Ｉとタイプ－ＩＩに分けることができ、ＭＡＧＥ－Ａグループは、発現が生殖系列及びがん細胞に制限されるタイプ－Ｉのサブファミリーに属する。タイプ－ＩのＭＡＧＥの過剰発現とがんの悪性度、腫瘍増殖、及び患者の予後不良の間の相関が、多くの報告によって示唆された。ＭＡＧＥ－Ａ４などの細胞内タンパク質は、プロテアソーム内で分解され、処理され、Ｔ細胞エピトープとしての主要組織適合複合体（ＭＨＣ）Ｉにより細胞表面に提示されうる。したがって、ＭＡＧＥ－Ａ４ｐ２３０－２３９（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）などのＭＡＧＥ－Ａ４誘導ペプチドは、ＨＬＡ－Ａ２の関連で細胞表面に提示され、Ｔ細胞認識をトリガーすることができる。その発現パターンを考慮すると、ＭＡＧＥ－Ａ４はがん治療法の有望な標的でありうる。
【0004】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４を標的とするＴ細胞活性化二重特異性抗体は、国際公開第２０２１／１２２８７５号に記載されている。このようなＴ細胞活性化二重特異性抗体は、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４発現がんの治療において、有用でありうる。ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体（「ＭＡＧＥ－Ａ４－ＴＣＢ」）は現在、ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１対立遺伝子を担持する、ＭＡＧＥ－Ａ４発現固形腫瘍を有する患者の第Ｉ相臨床治験において研究中である（ＮＣＴ０５１２９２８０）。
【0005】
残念なことに、Ｔ細胞に基づく免疫療法による固形腫瘍の治療は、依然として多くの課題に直面しており、そのうち最も顕著なものは、好ましくない腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を克服することである。線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）は、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）により高度に発現され、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を再モデル化することにより腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を調節する能力を有する。ＣＡＦ上でのＦＡＰ過剰発現は、種々のがんにおける予後不良に関連付けられる。
【0006】
したがって、特に固形腫瘍がんにおける、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４標的化Ｔ細胞活性化抗体の治療効果を最大化するために、それら抗体の効果を、ＴＭＥの存在にも関わらず、ＴＭＥ中で強化することが望ましいであろう。
【発明の概要】
【0007】
本発明は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４標的化Ｔ細胞活性化二重特異性抗体と、Ｔ細胞に正の共刺激性シグナルを提供する４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト（４－１ＢＢＬ）、特に線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）等の間質抗原を標的とする４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとの併用治療により、Ｔ細胞の応答を、ＴＭＥ（例えば固形腫瘍がん）の存在にも関わらず、ＴＭＥ中で強化する。上述のように、ＦＡＰは、腫瘍中のがん関連線維芽細胞上で上方制御され、したがって４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストのＦＡＰ特異性は、腫瘍に厳密に限定されたＴ細胞共刺激を提供する。
【0008】
本発明者らは、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４標的化Ｔ細胞活性化二重特異性抗体と４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとの組み合わせが、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４標的化Ｔ細胞によって活性化された二重特異性抗体のみと比較して、ＭＡＧＥ－Ａ４発現がんにおける活性の強化を導くことを発見した。
【0009】
ヒトがん細胞株を使用して、本発明者らは、驚くべきことに、ＦＡＰ発現線維芽細胞の存在下でＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体により誘導された腫瘍細胞溶解が、４－１ＢＢアゴニストＦＡＰ－４－１ＢＢＬの付加により、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体のみでは活性を示さなかった細胞株中で及び／又は用量においてさえ、強化されることを発見した。
【0010】
したがって、第１の態様では、本発明は、個体のがんの治療における使用のためのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体を提供し、この治療は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとの組み合わせでのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の投与を含む。
【0011】
さらなる態様では、本発明は、個体のがんの治療における使用のための４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを提供し、この治療は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体との組み合わせでの４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む。
【0012】
一態様において、本発明は、個体のがんの治療のための医薬の製造におけるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の使用を提供し、この治療は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとの組み合わせでのＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の投与を含む。
【0013】
さらなる態様では、本発明は、個体のがんの治療のための医薬の製造における４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの使用を提供し、この治療は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体との組み合わせでの４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む。
【0014】
またさらなる態様では、本発明は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを個体に投与することを含む、個体のがんを治療するための方法を提供する。
【0015】
一態様において、本発明はまた、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体を含む第１の医薬及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含む第２の医薬を含み、任意選択的に、個体のがんを治療するための第２の医薬との組み合わせでの第１の医薬の投与のための説明を含む添付文書をさらに含むキットを提供する。
【0016】
上述の及び本明細書におけるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用又はキットには、以下に記載される特徴のいずれかを、単独で又は組み合わせて組み込むことができる（文脈が別段の指示をしない限り）。
【0017】
本明細書のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３及びＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４、特にＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４ｐ２３０－２３９に特異的に結合する二重特異性抗体である。本発明における使用のために特に有用なＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、例えば国際公開第２０２１／１２２８７５号に記載されている（参照によりその全体を本明細書に援用する）。
【発明を実施するための形態】
【0018】
「二重特異性」という用語は、抗体が、少なくとも２つの別個の抗原決定基に特異的に結合することができることを意味する。典型的には、二重特異性抗体は２つの抗原結合部位を含み、それらの各々は異なる抗原決定基に特異性である。一部の態様では、二重特異性抗体は、２つの抗原決定基、
【0019】
特に２つの別個の細胞に発現される２つの抗原決定基に一緒に結合することができる。
【0020】
本明細書で使用される用語「抗原決定基」は、「抗原」及び「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分が結合して抗原結合部分－抗原複合体を形成する、ポリペプチド巨大分子上の部位（例えば、アミノ酸の近接ストレッチ又は非近接アミノ酸の異なる領域から構成される立体構造）を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面上に、ウイルス－感染細胞の表面上に、その他の病気の細胞の表面上に、免疫細胞の表面上に、血清中に遊離して、及び／又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に、見出すことができる。
【0021】
本明細書で使用される用語「抗原結合部分」は、抗原決定基に特異的に結合するポリペプチド分子を指す。一態様において、抗原結合部分は、それが結合する部分（例えば第２の抗原結合部分）を、標的部位、例えば抗原決定基を持つ特定の種類の腫瘍細胞に向けることができる。別の態様では、抗原結合部分は、その標的抗原、例えばＴ細胞受容体複合抗原を通してシグナル伝達を活性化することができる。抗原結合部分は、本明細書にさらに定義される抗体及びその断片を含む。特定の抗原結合部分は、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とを含む、抗体の抗原結合ドメインを含む。一部の態様では、抗原結合部分は、後述でさらに定義される、当技術分野で既知の抗体定常領域を含みうる。有用な重鎖定常領域には、５つのアイソタイプ：α、δ、ε、γ又はμのいずれかが含まれる。有用な軽鎖定常領域には、２つのアイソタイプ：κ及びλのいずれかが含まれる。
【0022】
「特異的に結合する」とは、その結合が抗原選択性であり、望ましくない相互作用又は非特異的な相互作用から区別することができることを意味する。特定の抗原決定基に対する抗原結合部分の結合能は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者によく知られた他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）技術（ＢＩＡｃｏｒｅ機器で分析）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００）），ａｎｄ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｓｓａｙｓ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））により測定することができる。一態様において、無関係なタンパク質に対する抗原結合部分の結合の程度は、例えば、ＳＰＲによって測定した場合に、抗原に対する抗原結合部分の結合の約１０％未満である。一部の態様では、抗原に結合する抗原結合部分、又は抗原結合部分を含む抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍから１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍから１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。
【0023】
「親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、受容体）とその結合パートナー（例えば、リガンド）との間の非共有的相互作用の合計の強度を指す。別途指示がない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合対（例えば、抗原結合部分と抗原、又は受容体とそのリガンド）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、概して、解離定数（ＫＤ）によって表すことができ、この定数は解離速度定数と会合速度定数（それぞれｋｏｆｆ及びｋｏｎ）の比である。したがって、速度定数の比が同じである限り、同等の親和性は異なる速度定数を含みうる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当技術分野で既知の十分に確立された方法によって測定することができる。親和性を測定するための特定の方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。
【0024】
「ＣＤ３」は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＤ３を指す。この用語は、「完全長」の、未処理のＣＤ３、並びに細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＣＤ３を包含する。この用語は、ＣＤ３の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。一態様において、ＣＤ３は、ヒトＣＤ３、特にヒトＣＤ３のエプシロンサブユニット（ＣＤ３ε）である。ヒトＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）のアクセッション番号Ｐ０７７６６（登録バージョン２１７）、又はＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿０００７２４．１に示されている。配列番号２４も参照されたい。カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］ＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＢ７１８４９．１に示されている。配列番号２５も参照されたい。
【0025】
「ＭＡＧＥ－Ａ４」は、がん精巣抗原（ＣＴＡ）のＭＡＧＥファミリーのメンバーである「黒色腫関連抗原４」を表す。タンパク質のＭＡＧＥ－Ａファミリーは、Ｘｑ２６－２８にクラスター化され、保存されたドメイン（ＭＡＧＥホモロジードメイン、ＭＨＤ）の存在によって特徴づけられる１２の高度に相同な遺伝子を包含する。ヒトＭＡＧＥ－Ａ４は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）アクセッション番号 Ｐ４３３５８（登録バージョン１７４）に記載されており、ヒトＭＡＧＥ－Ａ４のアミノ酸配列はまた、本明細書の配列番号２１に示されている。本明細書で使用される「ＭＡＧＥ－Ａ４」は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＭＡＧＥ－Ａ４を指す。この用語は、「完全長」、未処理のＭＡＧＥ－Ａ４だけでなく、細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＭＡＧＥ－Ａ４を包含する。この用語は、ＭＡＧＥ－Ａ４の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。一態様において、ＭＡＧＥ－Ａ４は、ヒトＭＡＧＥ－Ａ４、特に配列番号２１のタンパク質である。
【0026】
「ＭＡＧＥ－Ａ４ｐ２３０－２３９」又は「ｐ２３０－２３９ペプチド」が意味するのは、アミノ酸配列ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ（配列番号２２；配列番号２１のＭＡＧＥ－Ａ４タンパク質の位置２３０－２３９）を有するペプチド由来のＭＡＧＥ－Ａ４である。
【0027】
「ＨＬＡ－Ａ２」、「ＨＬＡ－Ａ＊０２」、「ＨＬＡ－Ａ０２」、又は「ＨＬＡ－Ａ＊２」（交換可能に使用される）は、ＨＬＡ－Ａ血清型群におけるヒト白血球抗原血清型を指す。ＨＬＡ－Ａ２タンパク質（それぞれのＨＬＡ遺伝子によりコードされた）は、それぞれのクラスＩ ＭＨＣ（主要組織適合複合体）タンパク質のα鎖を構成し、これはβ２ミクログロブリンサブユニットをさらに含む。特定のＨＬＡ－Ａ２タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２０１（ＨＬＡ－Ａ０２０１、ＨＬＡ－Ａ０２．０１、又はＨＬＡ－Ａ＊０２：０１とも呼ばれる）である。特定の態様では、本明細書に記載されるＨＬＡ－Ａ２タンパク質はＨＬＡ－Ａ２０１である。ヒトＨＬＡ－Ａ２の例示的な配列は、配列番号２３で与えられる。
【0028】
「ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４」は、ＨＬＡ－Ａ２分子と、ＭＡＧＥ－Ａ４から得られるペプチド（本明細書では「ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド」とも呼ぶ）、具体的にはｐ２３０－２３９ペプチド（「ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４ｐ２３０－２３９」）との複合体を指す。
【0029】
本明細書で使用される場合、Ｆａｂ分子等に関する「第１」、「第２」又は「第３」という用語は、各タイプの部分が２つ以上存在するとき、区別を簡便にするために使用されている。これら用語の使用は、特に断らない限り、二重特異性抗体の特定の順序又は配向を付与することを意図していない。
【0030】
本明細書で使用される「価」という用語は、抗体中の特定数の抗原結合部位の存在を意味する。したがって、「抗原への一価結合」という用語は、抗体中の抗原に特異的な１つ（及び１つ以下）の抗原結合部位の存在を意味する。
【0031】
本明細書の用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、種々の抗体構造を包含し、限定しないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び所望の抗原結合活性を呈する限りにおいて抗体断片を含む。
【0032】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」は、本明細書中で交換可能に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有する抗体を指す。
【0033】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合し、インタクトな抗体の一部分を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ‘、Ｆａｂ’－ＳＨは、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び単一ドメイン抗体が含まれる。一部の抗体断片の総説として、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説としては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。また、国際公開第９３／１６１８５号及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が長くなったＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。ダイアボディは、二価又は二重特異性でありうる２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。一部の態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照のこと）。抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質消化、及び組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による生成を含むがこれらに限定されない種々の技術により作製することができる。
【0034】
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然の抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般に、類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む。例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分でありうる。可変領域配列に関して本明細書で使用される「カバット番号付け」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）によって規定された番号付けシステムを指す。
【0035】
本明細書で使用される場合、重鎖及び軽鎖のすべての定常領域及びドメインのアミノ酸位置は、本明細書では、「カバットによる番号付け」又は「カバット番号付け」と呼ばれる、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載されるカバット番号付けシステムに従って番号付けされる。具体的には、カバット番号付けシステム（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）の６４７－６６０頁参照）がカッパ及びラムダアイソタイプの軽鎖定常ドメインＣＬに使用され、カバットＥＵインデックス番号付けシステム（６６１－７２３頁参照）が、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３）に使用され、これは「カバットＥＵインデックスによる番号付け」と呼ぶことによってさらに明示される。
【0036】
本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列内で超可変であり、抗原結合特異性を決定する抗体可変ドメインの領域、例えば「相補性決定領域」（ＣＤＲ）の各々を指す。通常、抗体は、６つのＣＤＲ；ＶＨに３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、及びＶＬに３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む。本明細書の例示的なＣＤＲには、以下が含まれる：
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）、及び９６－１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）、及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；並びに
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）、及び９３－１０１（Ｈ３）に生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））。
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）、及び９６－１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）、及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；並びに
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）、及び９３－１０１（Ｈ３）に生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））。
【0037】
別途指示がない限り、ＣＤＲは、上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従って決定される。当業者であれば、ＣＤＲの表記は、上掲のＣｈｏｔｈｉａ、上掲のＭｃＣａｌｌｕｍ、又は他の任意の科学的に認められた命名システムに従って決定することもできることを理解するであろう。
【0038】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、通常、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は、通常ＶＨ（又はＶＬ）中で以下の順序で現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。
【0039】
抗体又は免疫グロブリンの「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域の種類を指す。抗体には５つの主要なクラス、即ち：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けられる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【0040】
「Ｆａｂ分子」は、免疫グロブリンの重鎖（「Ｆａｂ重鎖」）のＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインと、免疫グロブリンの軽鎖（「Ｆａｂ軽鎖」）のＶＬドメイン及びＣＬドメインとからなるタンパク質を指す。
【0041】
「クロスオーバー」Ｆａｂ分子（「Ｃｒｏｓｓｆａｂ」とも呼ばれる）は、Ｆａｂ重鎖と軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換された（即ち、互いにより置き換えられた）Ｆａｂ分子を意味し、即ち、クロスオーバーＦａｂ分子は、軽鎖可変ドメインＶＬ及び重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１（ＶＬ－ＣＨ１、Ｎ末端からＣ末端方向に）で構成されるペプチド鎖と、重鎖可変ドメインＶＨ及び軽鎖定常ドメインＣＬ（ＶＨ－ＣＬ、Ｎ末端からＣ末端方向に）で構成されるペプチド鎖とを含む。明確性のために、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子では、重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１を含むペプチド鎖は、本明細書では（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ばれる。逆に、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の定常ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子では、重鎖可変ドメインＶＨを含むペプチド鎖は、本明細書では（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ばれる。
【0042】
それと対照的に、「一般的な」Ｆａｂ分子は、その天然形式の、即ち重鎖可変ドメイン及び定常ドメイン（ＶＨ－ＣＨ１、Ｎ末端からＣ末端の方向に）から構成される重鎖と、軽鎖可変ドメイン及び定常ドメイン（ＶＬ－ＣＬ、Ｎ末端からＣ末端の方向に）を含む軽鎖とを含むＦａｂ分子である。
【0043】
「免疫グロブリン分子」という用語は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、ジスルフィド結合している２つの軽鎖及び２つの重鎖から構成される約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は可変重鎖ドメイン又は重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）又はμ（ＩｇＭ）と呼ばれる５種類のうちの１つに割り当てられ、このうちのいくつかは、例えばγ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）、γ３（ＩｇＧ３）、γ４（ＩｇＧ４）、α１（ＩｇＡ１）及びα２（ＩｇＡ２）などのサブタイプにさらに分けられる。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類のうちの１つに割り当てることができる。免疫グロブリンは、本質的に、免疫グロブリンヒンジ領域を介して連結される２つのＦａｂ分子と１つのＦｃドメインからなる。
【0044】
「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書では、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異Ｆｃ領域とを含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界は、わずかに変動してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシ末端まで延びると定義される。しかしながら、宿主細胞によって生成された抗体は、重鎖のＣ末端から１つ又は複数、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後切断を受けることがある。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現により宿主細胞によって生成された抗体は、完全長重鎖を含んでいても、完全長重鎖の切断されたバリアントを含んでいてもよい。これは、重鎖の最後の２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）とリジン（Ｋ４４７、カバットＥＵインデックスによる番号付け）である場合に当てはまりうる。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びリジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書に別途明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ、１９９１に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う（上記も参照のこと）。本明細書において使用されるＦｃドメインの「サブユニット」は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドの一方、即ち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含み、安定な自己会合能を有するポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。
【0045】
「Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾」は、Ｆｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと同一のポリペプチドとの会合によるホモダイマーの形成を低減又は防止する、ペプチド骨格の操作又はＦｃドメインサブユニットの翻訳後修飾である。本明細書で使用される会合を促進する修飾は、会合することが望ましい２つのＦｃドメインサブユニットの各々（即ちＦｃドメインの第１及び第２のサブユニット）に対して行われる別々の修飾を特に含み、この修飾は２つのＦｃドメインサブユニットの会合を促進するために互いに対して相補的である。例えば、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメインサブユニットの一方又は両方の構造又は電荷を変化させて、それらの会合をそれぞれ立体的又は静電的に有利にすることができる。したがって、（ヘテロ）二量体化は、第１のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと第２のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドとの間に起こり、これらは、サブユニットの各々に融合しているさらなる成分（例えば抗原結合部分）が同じでないという意味で同一ではない場合がある。いくつかの態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメイン内のアミノ酸変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。特定の態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々に、別々のアミノ酸変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。
【0046】
「エフェクター機能」という用語は、抗体のアイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例には：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）；サイトカイン分泌；抗原提示細胞による免疫複合体媒介性抗原取り込み；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞の活性化が含まれる。
【0047】
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部と考慮しない場合の、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当分野の技術範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージ等の公的に入受可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、ここでの目的のために、％アミノ酸配列同一性の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用して又はその後ＢＬＯＳＵＭ５０比較行列を用いて生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ”，ＰＮＡＳ ８５：２４４４２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）“Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ” Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４３６により作製されたものであり、ｈｔｔｐ：／／ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌ．から公的に入手可能である。代替的に、ｈｔｔｐ：／／ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉからアクセスできるパブリックサーバーを使用し、ｇｇｓｅａｒｃｈ（ｇｌｏｂａｌｐｒｏｔｅｉｎ：ｐｒｏｔｅｉｎ）プログラム及びデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して、ローカルではなくグローバルアライメントを実行することで、これら配列を比較することができる。パーセントアミノ酸同一性は、出力アラインメントヘッダ中に与えられる。
【0048】
「活性化Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃドメインによる係合に続いて、受容体が担持する細胞を刺激してエフェクター機能を実行するシグナル伝達事象を誘発するＦｃ受容体である。ヒト活性化Ｆｃ受容体には、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）及びＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）が含まれる。
【0049】
「結合の低減」、例えばＦｃ受容体への結合の減少は、例えばＳＰＲによって測定される、それぞれの相互作用に対する親和性の減少を指す。明確性のために、この用語は、親和性がゼロ（又は分析方法の検出限界を下回る）まで低減すること、即ち、相互作用の完全な消失も含む。逆に、「結合の増加」は、それぞれの相互作用に対する結合親和性の増加を指す。
【0050】
「融合している」とは、成分（例えばＦａｂ分子及びＦｃドメインサブユニット）がペプチド結合によって、直接又は１つ若しくは複数のペプチドリンカーを介して連結されることを意味する。
【0051】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分と、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４、特にＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４ｐ２３０－２３９に特異的に結合する第２の抗原結合部分とを含む。
【0052】
一態様において、第１の抗原結合部分は、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0053】
一態様において、第２の抗原結合部分は、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0054】
特定の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分であって、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む第１の抗原結合部分と；
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する第２の抗原結合部分であって、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む第２の抗原結合部分と
を含む。
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分であって、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む第１の抗原結合部分と；
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する第２の抗原結合部分であって、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む第２の抗原結合部分と
を含む。
【0055】
一態様において、第１の抗原結合部分は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0056】
一態様において、第１の抗原結合部分は、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む。
【0057】
一態様において、第２の抗原結合部分は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0058】
一態様において、第２の抗原結合部分は、配列番号１５の重鎖可変領域配列と、配列番号１６の軽鎖可変領域配列とを含む。
【0059】
いくつかの態様では、第１及び／又は第２の抗原結合部分はＦａｂ分子である。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である。そのような態様では、第２の抗原結合部分は、好ましくは従来のＦａｂ分子である。
【0060】
二重特異性抗体の第１及び第２の抗原結合部分が両方ともＦａｂ分子であり、抗原結合部分の１つ（特に、第１の抗原結合部分）において、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いにより置き換えられているいくつかの態様では、
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸が正に帯電したアミノ酸により置換されており（カバットによる番号付け）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸が負に帯電したアミノ酸により置換されているか（カバットＥＵインデックスによる番号付け）；或いは
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸が正に帯電したアミノ酸により置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸が負に帯電したアミノ酸により置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸が正に帯電したアミノ酸により置換されており（カバットによる番号付け）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸が負に帯電したアミノ酸により置換されているか（カバットＥＵインデックスによる番号付け）；或いは
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸が正に帯電したアミノ酸により置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸が負に帯電したアミノ酸により置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0061】
二重特異性抗体は、ｉ）及びｉｉ）に記述されている修飾を両方とも含むことはない。ＶＨ／ＶＬ交換を有する抗原結合部分の定常ドメインＣＬとＣＨ１とは、互いによって置き換えられない（即ち交換されないままである）。
【0062】
さらに具体的な態様では、
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されているか（カバットＥＵインデックスによる番号付け）；或いは
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されているか（カバットＥＵインデックスによる番号付け）；或いは
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0063】
そのような一態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸又は２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0064】
さらなる態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0065】
好ましい態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0066】
一態様において、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0067】
一態様において、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がアルギニン（Ｒ）により置換されており（カバットによる番号付け）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0068】
特定の態様では、上記態様によるアミノ酸置換が第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１において行われる場合、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬはカッパアイソタイプである。
【0069】
いくつかの態様では、第１の抗原結合部分と第２の抗原結合部分が、任意選択的にペプチドリンカーを介して、互いに融合している。
【0070】
いくつかの態様では、第１及び第２の抗原結合部分の各々はＦａｂ分子であり、（ｉ）第２の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しているか、又は（ｉｉ）第１の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。
【0071】
いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３への一価の結合を提供する。
【0072】
特定の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する単一の抗原結合部分と、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する２つの抗原結合部分とを含む。よって、いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する第３の抗原結合部分、特にＦａｂ分子、具体的には従来のＦａｂ分子を含む。第３の抗原結合部分には、第２の抗原結合部分に関して上に記載される特徴のすべて（例えば、ＣＤＲ配列、可変領域配列、及び／又は定常領域内のアミノ酸置換）を、単独で又は組み合わせて組み込むことができる。いくつかの態様では、第３の抗原部分は第１の抗原結合部分と同一である（例えば、従来のＦａｂ分子でもあり、同じアミノ酸配列を含む）。
【0073】
特定の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインをさらに含む。一態様において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１のＦｃドメインである。別の形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４のＦｃドメインである。より具体的な態様では、Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８にアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ４ Ｆｃドメインである（カバットＥＵインデックス番号付け）。このアミノ酸置換は、ＩｇＧ４抗体のｉｎ ｖｉｖｏでのＦａｂアーム交換を低減する（Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３８，８４－９１（２０１０）を参照）。さらに詳細な態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。特定の好ましい態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の例示的配列は、配列番号２６に提示されている。
【0074】
第１、第２、及び存在する場合は第３の抗原結合部分の各々がＦａｂ分子であるいくつかの態様では、（ａ）（ｉ）第２の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合ししており、かつ第１の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているか、又は（ｉｉ）第１の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端において第２の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、かつ第２の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており；（ｂ）存在する場合は、第３の抗原結合部分がＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。
【0075】
特定の態様では、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間のタンパク質間相互作用が最も広範囲に及ぶ部位は、ＣＨ３ドメインにある。したがって、一態様において、前記修飾は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにある。
【0076】
具体的な態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットの会合を促進する修飾は、いわゆる「ノブ・イントゥ・ホール」修飾であり、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方に「ノブ」修飾を、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの他方に「ホール」修飾を含む。ノブ・イントゥ・ホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、米国特許第７，６９５，９３６号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，６１７－６２１（１９９６）ａｎｄ Ｃａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２４８，７－１５（２００１）に記載されている。一般に、この方法は、隆起が空洞内に位置することによりヘテロ二量体形成を促進してホモ二量体形成を妨害することができるように、第１のポリペプチドの接触面にある隆起（「ノブ」）と、第２のポリペプチドの接触面にある対応する空洞（「ホール」）とを導入することを含む。隆起は、第１のポリペプチドの接触面からの小さなアミノ酸側鎖をそれよりも大きな側鎖（例えばチロシン又はトリプトファン）で置き換えることによって構築される。隆起と同じ又は類似のサイズの相補的空洞は、大きなアミノ酸側鎖をそれよりも小さなアミノ酸側鎖（例えばアラニン又はスレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの接触面に作り出される。
【0077】
したがって、いくつかの態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸残基が、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それにより、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部に、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部の空洞内に配置可能な隆起が生成されており、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸残基が、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それにより、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部に、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部の隆起を配置可能な空洞が生成されている。好ましくは、より大きな側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、より小さな側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）からなる群から選択される。隆起及び空洞は、ポリペプチドをコードする核酸を、例えば部位特異的突然変異誘発により、又はペプチド合成により変化させることにより、作製することができる。
【0078】
このような特定の態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、３６６位のスレオニン残基がトリプトファン残基で置き換えられており（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、４０７位のチロシン残基がバリン残基で置き換えられており（Ｙ４０７Ｖ）、任意選択的に３６６位のスレオニン残基がセリン残基で置き換えられており（Ｔ３６６Ｓ）、３６８位のロイシン残基がアラニン残基で置き換えられている（Ｌ３６８Ａ）（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。さらなる態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、追加的に３５４位のセリン残基がシステイン残基で置き換えられている（Ｓ３５４Ｃ）か又は３５６位のグルタミン酸残基がシステイン残基で置き換えられており（Ｅ３５６Ｃ）（特に、３５４位のセリン残基がシステイン残基で置き換えられており）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、追加的に３４９位のチロシン残基がシステイン残基により置き換えられている（Ｙ３４９Ｃ）（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。好ましい態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0079】
いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合を低減する及び／又はエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。
【0080】
特定の態様では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。一態様において、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一態様において、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な態様では、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であり、さらに具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａ、最も具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一態様において、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及びサイトカイン分泌の群から選択される１つ又は複数である。特定の態様では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。
【0081】
典型的には、同じ１つ又は複数のアミノ酸置換が、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々に存在する。一態様において、１つ又は複数のアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性を低減する。一態様において、１つ又は複数のアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性を、少なくとも２分の１、少なくとも５分の１又は少なくとも１０分の１に低減する。
【0082】
一態様において、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１及びＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な態様では、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５及びＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。いくつかの態様において、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを含む（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。１つのこのような態様において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一態様において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な態様において、アミノ酸置換は、Ｐ３２９Ａ又はＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。一態様において、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含み、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７及びＰ３３１から選択される位置にさらなるアミノ酸置換を含む（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な態様では、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ又はＰ３３１Ｓである。特定の態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位、Ｌ２３４位及びＬ２３５位にアミノ酸置換を含む（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。より具体的な態様では、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」又は「ＬＡＬＡＰＧ」）を含む。具体的には、好ましい態様では、Ｆｃドメインの各サブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを含み（カバットＥＵインデックス番号付け）、即ち、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットの各々において、２３４位のロイシン残基がアラニン残基で置き換えられており（Ｌ２３４Ａ）、２３５位のロイシン残基がアラニン残基で置き換えられており（Ｌ２３５Ａ）、３２９位のプロリン残基がグリシン残基で置き換えられている（Ｐ３２９Ｇ）（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。１つのこのような態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
【0083】
好ましい態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分であって、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域、特に可変領域が交換されている第１の抗原結合部分と；
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する第２及び第３の抗原結合部分であって、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、第２及び第３の抗原結合部分の各々がＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２及び第３の抗原結合部分と；
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、
第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、Ｆｃドメインと
を含む。
（ｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部分であって、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域、特に可変領域が交換されている第１の抗原結合部分と；
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的に結合する第２及び第３の抗原結合部分であって、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、第２及び第３の抗原結合部分の各々がＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２及び第３の抗原結合部分と；
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、
第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している、Ｆｃドメインと
を含む。
【0084】
一態様において、第１の抗原結合部分は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0085】
一態様において、第１の抗原結合部分は、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む。
【0086】
一態様において、第２及び第３の抗原結合部分は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0087】
一態様において、第２及び第３の抗原結合部分は、配列番号１５の重鎖可変領域と、配列番号１６の軽鎖可変領域とを含む。
【0088】
上記態様によるＦｃドメインは、単独で又は組み合わせで、Ｆｃドメインに関連して上述した特徴のすべてを含みうる。
【0089】
一態様において、抗原結合部分及びＦｃ領域は、ペプチドリンカー、特に、配列番号１８及び配列番号２０にあるペプチドリンカーによって互いに融合している。
【0090】
一態様において、（ｉｉ）の第２及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬでは、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により、特にアルギニン（Ｒ）により置換されており（カバットによる番号付け）、（ｉｉ）の第２及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１では、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0091】
一態様において、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番１７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号１８の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である配列を含むポリペプチドと、配列番号１９の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である配列を含むポリペプチドと、配列番号２０の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である配列を含むポリペプチドとを含む。
【0092】
一態様において、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号１７の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号１８の配列を含むポリペプチドと、配列番号１９の配列を含むポリペプチドと、配列番号２０の配列を含むポリペプチドとを含む。
【0093】
本明細書のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと組み合わせて使用される。
【0094】
別途指示がない限り、本明細書で使用される用語「４－１ＢＢ」又は「ＣＤ１３７」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含むあらゆる脊椎動物源由来のいずれかの天然型４－１ＢＢを指す。この用語は、「完全長」の、未処理の４－１ＢＢだけでなく、細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態の４－１ＢＢを包含する。この用語は、４－１ＢＢの天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。ヒト４－１ＢＢのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ０７０１１（登録バージョン１８５）に示されている。
【0095】
「４－１ＢＢＬ」又は「４－１ＢＢリガンド」又は「ＣＤ１３７Ｌ」は、Ｔ細胞の増殖とサイトカイン生成とを同時刺激することのできる同時刺激性ＴＮＦリガンドのファミリーメンバーである。同時刺激性ＴＮＦファミリーリガンドは、対応するＴＮＦ受容体と相互作用すると、ＴＣＲシグナルを同時刺激することができ、その受容体との相互作用はＴＮＦＲ関連因子（ＴＲＡＦ）の動員をもたらし、それによりシグナル伝達カスケードが開始されてＴ細胞活性化を招く。４－１ＢＢＬは、ＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ４１２７３（登録バージョン１５３）に示されるアミノ酸配列を有する完全又は完全長４－１ＢＢＬは、細胞の表面上に三量体を形成することが記載されている。三量体の形成は、４－１ＢＢＬの外部ドメインの特定のモチーフにより可能になる。前記モチーフは、本明細書では「三量体化領域」と命名される。ヒト４－１ＢＢＬ配列（配列番号２７）のアミノ酸５０～２５４は、４－１ＢＢＬの外部ドメインを形成するが、その断片でさえも三量体を形成することができる。
【0096】
「外部ドメイン」は、細胞外空間（即ち細胞の外側の空間）中に延びる膜タンパク質のドメインであり、「細胞外ドメイン」とも呼ばれる。本明細書に定義される４－１ＢＢＬの外部ドメインは、細胞外空間（細胞外ドメイン）中に延びる４－１ＢＢＬタンパク質、特にヒト４－１ＢＢＬタンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ４１２７３（登録バージョン１５３））の一部を指すだけでなく、三量体化及び対応する受容体４－１ＢＢへの結合を担うそれよりも短い部分又は断片も含む。
【0097】
したがって、用語「４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片」は、４－１ＢＢＬの細胞外ドメイン、又は４－１ＢＢに結合することができ、かつ三量体化能を有するその一部を指す。本発明の特定の態様では、用語「４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片」は、配列番号３１（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸５２－２５４）、配列番号２８（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸７１－２５４）、配列番号３０（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８０－２５４）、配列番号２９（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８５－２５４）、配列番号３２（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸７１－２４８）、配列番号３３（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８５－２４８）、配列番号３４（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸８０－２４８）及び配列番号３５（ヒト４－１ＢＢＬのアミノ酸５２－２４８）から選択されるアミノ酸を有するポリペプチドを指す。
【0098】
本明細書で使用される「抗原結合分子」という用語は、その最も広い意味において、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の例は、抗体、抗体断片及び骨格抗原結合タンパク質である。
【0099】
プロリルエンドペプチダーゼＦＡＰ又はセプラーゼ（ＥＣ３．４．２１）としても知られる「線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）」は、別途指示がない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）などの哺乳動物を含むあらゆる脊椎動物源由来のあらゆるネイティブＦＡＰを指す。この用語は、「完全長」の、未処理のＦＡＰだけでなく、細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＦＡＰを包含する。この用語は、ＦＡＰの天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。ヒトＦＡＰのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）アクセッション番号Ｑ１２８８４（登録バージョン１９７）に示されている。ヒトＦＡＰの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は、アミノ酸の位置２６から７６０まで延びる。本明細書で使用されるＦＡＰに結合する抗原結合部分は、好ましくはＦＡＰの細胞外ドメインに結合する。例示的抗ＦＡＰ結合分子は、例えば国際公開第２０１２／０２０００６号に記載されている。
【0100】
本発明における使用のために特に有用な４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、例えば国際公開第２０１６／０７５２７８号又は同第２０１６／１５６２９１号（参照によりこれらの全体を本明細書に援用する）に記載されている。
【0101】
一態様において、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬ（特にヒト４－１ＢＢＬ）又はその断片、特に４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片を含む。一態様において、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメイン又はそれらの断片（即ち４－１ＢＢＬの第１、第２及び第３の外部ドメイン又はそれらの断片）を含む。一態様において、４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその片断は、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一態様において、４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片は、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一態様において、４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。一態様において、４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片は、配列番号３２のアミノ酸配列からなる。
【0102】
特定の態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメイン又はそれらの断片を含む分子であり、４－１ＢＢＬの外部ドメイン又はその断片は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む（又は同配列からなる）。
【0103】
一態様において、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメイン又はそれらの断片（即ち４－１ＢＢＬの第１、第２及び第３の外部ドメイン又はそれらの断片）を含み、４－１ＢＢＬの第１の外部ドメイン又はその断片と４－１ＢＢＬの第２の外部ドメイン又はその断片とは、任意選択的にペプチドリンカーを介して、互いに融合しており（即ち４－１ＢＢＬの第１及び第２の外部ドメイン又はそれらの断片は同じポリペプチド上にある）、４－１ＢＢＬの第３の外部ドメイン又はその断片は、４－１ＢＢＬの第１又は第２の外部ドメイン又はその断片に融合していない（即ち４－１ＢＢＬの第３の外部ドメイン又はその断片は、４－１ＢＢＬの第１及び第２の外部ドメイン又はそれらの断片とは別々のポリペプチド上にある）。
【0104】
一態様において、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの第１及び第２の外部ドメイン又はそれらの断片を含む第１のポリペプチドと、４－１ＢＢＬの第３の外部ドメイン又はその断片を含む第２のポリペプチドとを含む分子である。一態様において、４－１ＢＢＬの第１及び第２の外部ドメイン又はそれらの断片は、ペプチドリンカー、特に（Ｇ４Ｓ）２ペプチドリンカーを介して融合している。一態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとは、ジスルフィド結合により結合している。一態様において、第１のポリペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一態様において、第１のポリペプチドは、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。一態様において、第２のポリペプチドは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一態様において、第２のポリペプチドは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
【0105】
さらなる態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、腫瘍関連抗原、特に腫瘍間質抗原（即ち腫瘍間質関連抗原）、さらに詳細には腫瘍線維芽細胞抗原（即ちがん関連線維芽細胞上に発現される抗原）に特異的に結合する抗原結合部分を含む。
【0106】
好ましい態様では、抗原結合部分は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、特にヒトＦＡＰに特異的に結合する。
【0107】
一態様において、抗原結合部分は、Ｆａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である。
【0108】
したがって、特定の態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、４－１ＢＢＬの３つの外部ドメイン又はそれらの断片と、腫瘍関連抗原に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部分、特にＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分とを含む抗原結合分子である。
【0109】
一態様において、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分は、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３７のＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４０のＬＣＤＲ２、及び配列番号４１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0110】
一態様において、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。
【0111】
一態様において、ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分は、配列番号４２の重鎖可変領域配列と、配列番号４３の軽鎖可変領域配列とを含む。
【0112】
さらなる態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインを含む。
【0113】
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストに含まれるＦｃドメインには、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体に含まれるＦｃドメインに関連して本明細書で上述した特徴のすべてを、単独で又は組み合わせで、組み込むことができる。
【0114】
特に、一態様において、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストに含まれるＦｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１のＦｃドメインである。さらなる好ましい態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。特定の好ましい態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
【0115】
特定の態様では、Ｆｃドメインは、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体に関連して本明細書で上述した、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾（例えば「ノブ・イントゥー・ホール」修飾）を含む。
【0116】
さらに詳細な態様では、Ｆｃドメインは、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体に関連して本明細書で上述した、Ｆｃ受容体への結合を低減する及び／又はエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換（例えば「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」，「ＰＧＬＡＬＡ」又は「ＬＡＬＡＰＧ」アミノ酸置換）を含む。
【0117】
特に好ましい態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストに含まれるＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインであり、Ｆｃドメインの各サブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（カバットＥＵインデックス番号付け）を含む。
【0118】
一態様において、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニストは、
（ｉ）４－１ＢＢＬの３つの外部ドメイン又はそれらの断片；
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分であって、特にＦａｂ分子である抗原結合部分；及び
（ｉｉｉ）第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、特にＦｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾並びに／又はＦｃ受容体への結合を低減する及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含むＦｃドメイン
を含む抗原結合分子である。
（ｉ）４－１ＢＢＬの３つの外部ドメイン又はそれらの断片；
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分であって、特にＦａｂ分子である抗原結合部分；及び
（ｉｉｉ）第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、特にＦｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾並びに／又はＦｃ受容体への結合を低減する及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含むＦｃドメイン
を含む抗原結合分子である。
【0119】
特定の態様では、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニストは、
（ｉ）４－１ＢＢＬの第１、第２及び第３の外部ドメイン又はそれらの断片；
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分であって、Ｆａｂ分子である抗原結合部分；
（ｉｉｉ）第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、特にＦｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾並びに／又はＦｃ受容体への結合を低減する及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含むＦｃドメイン；
（ｉｖ）ＣＬドメイン及びＣＨ１ドメイン
を含む抗原結合分子であり、
この抗原結合分子は、
（ａ）（ａ１）そのＣ末端において４－１ＢＢＬの第１の外部ドメイン又はその断片のＮ末端に融合している、４－１ＢＢＬの第１の外部ドメイン又はその断片、（ａ２）そのＣ末端においてＣＬドメインのＮ末端に融合している、４－１ＢＢＬの第２の外部ドメイン又はその断片、（ａ３）そのＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの一方（例えば第１のサブユニット）のＮ末端に融合しているＣＬドメイン、及び（ａ４）Ｆｃドメインのサブユニットのうちの一方（例えば第１のサブユニット）を含む第１のポリペプチドと；
（ｂ）（ｂ１）そのＣ末端においてＣＨ１ドメインのＮ末端に融合している４－１ＢＢＬの第３の外部ドメイン又はその断片、及び（ｂ２）ＣＨ１ドメインを含む第２のポリペプチドと；
（ｃ）（ｃ１）そのＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの他方（例えば第２のサブユニット）のＮ末端に融合しているＦａｂ分子の重鎖、及び（ｃ２）Ｆｃドメインのサブユニットのうちの他方（例えば第２のサブユニット）を含む第３のポリペプチドと；
（ｄ）Ｆａｂ分子の軽鎖を含む第４のポリペプチドと
から構成される。
（ｉ）４－１ＢＢＬの第１、第２及び第３の外部ドメイン又はそれらの断片；
（ｉｉ）ＦＡＰに特異的に結合する抗原結合部分であって、Ｆａｂ分子である抗原結合部分；
（ｉｉｉ）第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインであって、特にＦｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾並びに／又はＦｃ受容体への結合を低減する及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含むＦｃドメイン；
（ｉｖ）ＣＬドメイン及びＣＨ１ドメイン
を含む抗原結合分子であり、
この抗原結合分子は、
（ａ）（ａ１）そのＣ末端において４－１ＢＢＬの第１の外部ドメイン又はその断片のＮ末端に融合している、４－１ＢＢＬの第１の外部ドメイン又はその断片、（ａ２）そのＣ末端においてＣＬドメインのＮ末端に融合している、４－１ＢＢＬの第２の外部ドメイン又はその断片、（ａ３）そのＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの一方（例えば第１のサブユニット）のＮ末端に融合しているＣＬドメイン、及び（ａ４）Ｆｃドメインのサブユニットのうちの一方（例えば第１のサブユニット）を含む第１のポリペプチドと；
（ｂ）（ｂ１）そのＣ末端においてＣＨ１ドメインのＮ末端に融合している４－１ＢＢＬの第３の外部ドメイン又はその断片、及び（ｂ２）ＣＨ１ドメインを含む第２のポリペプチドと；
（ｃ）（ｃ１）そのＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの他方（例えば第２のサブユニット）のＮ末端に融合しているＦａｂ分子の重鎖、及び（ｃ２）Ｆｃドメインのサブユニットのうちの他方（例えば第２のサブユニット）を含む第３のポリペプチドと；
（ｄ）Ｆａｂ分子の軽鎖を含む第４のポリペプチドと
から構成される。
【0120】
抗原結合分子の種々のドメイン間の融合は、好ましくはペプチドリンカーを介しており、ペプチドリンカーは、免疫グロブリンヒンジ領域（の一部）も含みうる又は同領域からなりうる。特に、４－１ＢＢＬの第１の外部ドメイン又はその断片と４－１ＢＢＬの第２の外部ドメイン又はその断片との融合は、ペプチドリンカー、特にａ（Ｇ４Ｓ）２リンカーを介している。
【0121】
一態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとは、ジスルフィド結合、特にＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合により互いに結合される。
【0122】
一態様では、第１のポリペプチドのＣＬドメインにおいて、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）により独立して置換されており（カバットによる番号付け）、第２のポリペプチドのＣＨ１ドメインにおいて、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）により独立して置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0123】
一態様では、第１のポリペプチドのＣＬドメインにおいて、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（カバットによる番号付け）、第２のポリペプチドのＣＨ１ドメインにおいて、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0124】
特定の態様では、第１のポリペプチドのＣＬドメインにおいて、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（カバットによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がアルギニン（Ｒ）により置換されており（カバットによる番号付け）、第２のポリペプチドのＣＨ１ドメインにおいて、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（カバットＥＵインデックスによる番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（カバットＥＵインデックスによる番号付け）。
【0125】
特定の態様では、上記態様によるアミノ酸置換が第１及び第２のポリペプチドのＣＬ及びＣＨ１ドメインにおいて行われる場合、第１のポリペプチドのＣＬドメインは、カッパアイソタイプである。
【0126】
一態様において、ＣＬドメインは、ヒトＣＬドメイン、特にカッパアイソタイプのヒトＣＬドメインである。さらなる態様では、ＣＨ１ドメインは、ヒトＣＨ１ドメイン、特にγアイソタイプのヒトＣＨ１ドメイン、最も詳細にはγ１アイソタイプのヒトＣＨ１ドメインである。
【0127】
一態様において、第１のポリペプチドは、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0128】
一態様において、第２のポリペプチドは、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0129】
一態様において、第３のポリペプチドは、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0130】
一態様において、第４のポリペプチドは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【0131】
一態様において、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７）アゴニストは、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド、及び配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む第４のポリペプチドを含む抗原結合分子である。
【0132】
代替的な態様では、４－１ＢＢアゴニストは、抗４－１ＢＢ抗体、特に抗ＦＡＰ／抗４－１ＢＢ二重特異性抗体でもよい。
【0133】
「がん」という用語は、制御されていない細胞増殖を典型的に特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す。がんの例には、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病が含まれる。がんの非限定的な例には、白血病などの血液がん、膀胱がん、脳がん、頭頸部がん、膵臓がん、胆管がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、胃がん、前立腺がん、皮膚がん、扁平上皮癌、肉腫、骨がん、及び腎臓がんが含まれる。他の細胞増殖性障害には、限定されないが、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、睾丸、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、（中枢及び末梢）神経系 、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、及び泌尿生殖器系に位置する新生物が含まれる。前がん状態又は病変及びがん転移も含まれる。
【0134】
本発明のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用及びキットのいくつかの態様では、がんは、固形腫瘍がんである。「固形腫瘍がん」が意味するのは、患者の体内の特定の位置に分離した腫瘍塊（腫瘍転移も含む）を形成する悪性腫瘍、例えば肉腫又は癌腫（例えば通常固形腫瘍を形成しない白血病といった血液のがんとは対照的な）である。固形腫瘍がんの非限定的な例には、膀胱がん、脳がん、頭頸部がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、胃がん、前立腺がん、皮膚がん、扁平細胞癌腫、骨がん、肝臓がん及び腎臓がんが含まれる。本発明の文脈で企図される他の固形腫瘍がんには、限定されないが、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、脳下垂体、睾丸、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、神経系（中枢及び末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、筋肉、脾臓、胸部領域及び泌尿生殖器系に位置する新生物が含まれる。前がん状態又は病変及びがん転移も含まれる。
【0135】
一態様において、がんは、肺がん、頭頸部がん、膀胱がん、食道がん、皮膚がん、軟組織がん、胃がん、子宮頸がん及び卵巣がんからなる群から選択されるがんである。一態様において、がんは、肺がん、頭頸部がん、膀胱がん、食道がん、軟組織がん及び卵巣がんからなる群から選択されるがんである。一態様において、がんは、膀胱がんである。別の態様では、がんは、子宮頸がんである。
【0136】
いくつかの態様では、がんは、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性がんである。「ＭＡＧＥ－Ａ４陽性がん」又は「ＭＡＧＥ－Ａ４発現がん」は、がん細胞におけるＭＡＧＥ－Ａ４の発現又は過剰発現を特徴とするがんを意味する。ＭＡＧＥ－Ａ４の発現は、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ＭＡＧＥ－Ａ４ ｍＲＮＡレベルを測定する）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、又はウエスタンブロットアッセイによって決定されうる。一態様において、がんは、ＭＡＧＥ－Ａ４を発現する。一態様において、がんは、ＭＡＧＥ－Ａ４に特異的な抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定した場合、腫瘍細胞の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、又は少なくとも８０％にＭＡＧＥ－Ａ４を発現する。
【0137】
いくつかの態様では、がんは、ＦＡＰを発現する細胞（例えば線維芽細胞）を含む。いくつかの態様では、がんは、特に腫瘍間質に、ＦＡＰを発現する。
【0138】
本明細書の「患者」、「対象」、又は「個体」は、がんの１つ又は複数の徴候、症状、又は他の指標を経験しているか又は経験したことのある、治療に適格な任意の単一のヒト対象である。いくつかの態様では、患者は、がんを有するか、又はがんを有すると診断されている。患者は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体又は別の薬物で以前に治療されていても、治療されていなくてもよい。特定の態様では、患者は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体で以前に治療されていない。患者は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体療法が開始される前に、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体以外の１つ又は複数の薬物を含む治療法で治療されたことがあってもよい。特定の態様では、患者は、ＨＬＡ－Ａ２対立遺伝子、特にＨＬＡ－Ａ＊０２：０１対立遺伝子を担持する。
【0139】
本明細書で使用される「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」等のその文法的変化形）は、治療される個体の疾患の自然な経過を変える試みにおける臨床的介入を指し、予防のために又は臨床病理の過程で実施することができる。治療の望ましい効果には、限定されないが、疾患の発生又は再発を防止すること、症候の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移を防止すること、疾患の進行速度を低下させること、病状の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。
【0140】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、有効量で投与される。
【0141】
薬剤、例えば、薬学的組成物の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な投薬量及び期間において有効な量を指す。
【0142】
一態様において、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の投与は、特にがんの部位に、Ｔ細胞、特の細胞傷害性Ｔ細胞の活性化をもたらす。前記活性化は、Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞の分化、Ｔ細胞によるサイトカイン分泌、Ｔ細胞からの細胞傷害性エフェクター分子の放出、Ｔ細胞の細胞傷害活性、及びＴ細胞による活性化マーカーの発現を含みうる。一態様において、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の投与は、がんの部位に、Ｔ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加をもたらす。
【0143】
上記及び本明細書に記載されるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用又はキットのいくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療又はそれらの投与は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体のみによる治療又はその投与と比較して、特にがんの部位に、Ｔ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞の活性化の増大をもたらす。特定の態様では、活性化は、Ｔ細胞の細胞傷害活性（具体的にはがん細胞の溶解）及び／又はＴ細胞によるサイトカイン（具体的にはＩＬ－２、ＴＮＦ－α、及び／又はインターフェロン－γ）の分泌を含む。
【0144】
上記及び本明細書に記載されるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用又はキットのいくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療又はそれらの投与は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体のみによる治療又はその投与と比較して、特にがんの部位に、ナイーブＴ細胞の記憶Ｔ細胞への分化の増加をもたらす。一態様において、分化は、例えばフローサイトメトリーを使用して、ＣＤ４５ＲＡ発現の測定によって検出される。
【0145】
上記及び本明細書に記載されるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト、方法、使用又はキットのいくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療又はそれらの投与は、個体に応答をもたらしうる。いくつかの態様では、応答は、完全寛解でありうる。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後の持続的応答でありうる。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後に持続される完全寛解でありうる。他の態様では、応答は、部分寛解でありうる。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後に持続される部分寛解でありうる。いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療又はそれらの投与は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体のみ（即ち４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含まない）による治療又はその投与と比較して、応答を改善しうる。
【0146】
いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストによる治療又はそれの投与は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体のみ（即ち４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含まない）で治療された対応する患者集団と比較して、患者集団の応答率を上昇させうる。
【0147】
本発明の併用療法は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの投与を含む。
【0148】
本明細書で使用される「組み合わせ（及び「組み合わせる（ｃｏｍｂｉｎｅ）又は「組み合わせること「ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ」等のその文法的変化形）は、本発明によるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体と４－ １ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとの組み合わせを包含し、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体と４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとは、同じ又は異なる容器内にあり、同じ又は異なる薬学的製剤中で、一緒に又は別々に投与され、一緒に又は連続して（任意の順序で）投与され、同じ又は異なる経路により投与されるが、ただし、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストが身体中でそれらの生物学的効果を一緒に発揮することができることを条件とする。例えば本発明によるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体と４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとを「組み合わせること」は、まず特定の薬学的製剤中のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体を投与し、続いて別の薬学的製剤中の４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを投与すること、又はその逆を意味する。
【0149】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体と４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、当技術分野で既知の任意の適切な方式で投与されうる。一態様において、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体と４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、連続して投与される（異なる時間に）。別の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体と４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、同時に投与される（同じ時間に）。理論に拘束されることを願うものではないが、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体に先立って及び／又は同二重特異性抗体と同時に、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを投与することが有利でありうる。いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストとは別の組成物中にある。いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストと同じ組成物中にある。
【0150】
ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、任意の適切な経路により投与することができ、同じ投与経路により又は異なる投与経路により投与されうる。いくつかの態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所に、経口で、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、移植により、吸入により、髄腔内に、脳室内に、又は鼻腔内に投与される。特定の態様では、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体は、静脈内投与される。いくつかの態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所に、経口で、経皮的に、腹腔内に、眼窩内に、移植により、吸入により、髄腔内に、脳室内に、又は鼻腔内に投与される。特定の態様では、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、静脈内投与される。有効量のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、疾患の予防又は治療のために投与されうる。ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び／又は４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの適切な投与経路及び投薬量は、治療される疾患の種類、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体の種類、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストの種類、疾患の重症度及び経過、個体の臨床状態、個体の病歴及び治療への応答、並びに主治医の裁量に基づいて決定されうる。投薬は、その投与が短期か又は長期かに部分的に依存して、任意の適切な経路、例えば静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、単回又は様々な時点にわたる複数回の投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含む種々の投薬スケジュールが、本明細書で企図される。ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストは、単回で又は一連の治療にわたって患者に適切に投与される。
【0151】
本発明の組み合わせは、単独で又は他の薬剤との組み合わせで治療法に使用することができる。例えば、本発明の組み合わせは、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与されうる。一部の態様では、追加の治療剤は、抗がん剤、例えば化学療法剤、腫瘍細胞増殖の阻害剤、又は腫瘍細胞アポトーシスのアクチベーターである。本発明の組み合わせは、放射線療法と組み合わせることもできる。
【0152】
本明細書で提供されるキットは、典型的には、１つ又は複数の容器と、容器上の若しくは容器に不随するラベル又は添付文書とを含む。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器は、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成されうる。容器は、病気の治療、予防、及び／又は診断に効果的な、それ自体であるか又は別の組成物と組み合わせられた組成物を収容し、滅菌アクセスポートを有しうる（例えば容器は、皮下注射針で穿刺可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の組み合わせに使用されるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体である。別の活性剤は、本発明の組み合わせに使用される４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストであり、これは、二重特異性抗体のように、同じ組成物及び容器内にあってよいか、又は異なる組成物及び容器内に提供されうる。ラベル又は添付文書は、１つ以上の組成物ががんなどの選択された状態を治療するために使用されることを表示する。
【0153】
一態様において、本発明は、がんの治療のために意図されたキットを提供し、このキットは、同じ又は別々の容器内に、（ａ）ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体、及び（ｂ）４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含み、任意選択的に（ｃ）がんを治療するための方法としての併用治療の使用を指示する印刷された説明文を含む添付文書をさらに含む。さらに、キットは、（ａ）中に組成物を含む第１の容器であって、組成物がＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４×ＣＤ３二重特異性抗体を含む第１の容器；（ｂ）中に組成物を含む第２の容器であって、組成物が４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストを含む第２の容器；及び任意選択的に（ｃ）中に組成物を含む第３の容器であって、組成物がさらなる細胞傷害性の又はそれ以外の治療剤を含む第３の容器を含む。本発明のこれら態様のキットは、組成物ががんを治療するために使用することができることを示す添付文書をさらに含みうる。代替的に又は追加的に、キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容されるバッファーを含む第３（又は第４）の容器をさらに含んでもよい。キットは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含みうる。
アミノ酸配列
アミノ酸配列
【図面の簡単な説明】
【0154】
【図1】（Ａ）実施例で使用されるＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４標的化Ｔ細胞二重特異性（ＴＣＢ）抗体分子（「ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ」）を概略的に示している。分子は、ＣＤ３に対する単一の抗原結合部分、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４に対する２つの抗原結合部分、及びＦｃドメインを含んでいる。（Ｂ）実施例で使用されるＦＡＰ標的化４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト（「ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ」）を概略的に示している。分子は、４－１ＢＢＬ外部ドメイン三量体、ＦＡＰに対する抗原結合部分、及びＦｃドメインを含んでいる。黒点：ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメイン中の修飾。＊：ＣＨ及びＣＬドメインに導入された反対の電荷のアミノ酸。
【図2】ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬの組み合わせで治療されたＨＬＡ－Ａ＊０２＋／ＭＡＧＥ－Ａ４＋腫瘍細胞株ＳＣａＢＥＲの連続的正細胞イメージングである。ＳＣａＢＥＲ細胞は、照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で、５：１のＥ：Ｔ比でヒトＰＢＭＣと共にインキュベートされ、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬと種々の濃度（（Ａ）５０ｎＭ、（Ｂ）８．３３ｎＭ、（Ｃ）１．３９ｎＭ、（Ｄ）０．２３ｎＭ、（Ｅ）０．０３９ｎＭ）のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢとの組み合わせで治療された。腫瘍細胞増殖曲線（イメージ当たりの赤色の数として測定された）は、１２０時間にわたる連続的生細胞イメージングによりモニタリングされた。コントロールとして、ＳＣａＢＥＲ細胞が、治療の非存在下で（治療なし）、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬのみを用いて（ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ）又はＦＡＰ－４－１－ＢＢＬなしで種々の濃度のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢを用いて（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ）、ＰＢＭＣと共に（照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で）インキュベートされた。
【図3】ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬの組み合わせで治療されたＨＬＡ－Ａ＊０２＋／ＭＡＧＥ－Ａ４＋腫瘍細胞株Ｃ－３３ａの連続的生細胞イメージングである。Ｃ－３３ａ細胞は、照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で、５：１のＥ：Ｔ比でヒトＰＢＭＣと共にインキュベートされ、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬと種々の濃度（（Ａ）５０ｎＭ、（Ｂ）８．３３ｎＭ、（Ｃ）１．３９ｎＭ、（Ｄ）０．２３ｎＭ、（Ｅ）０．０３９ｎＭ）のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢとの組み合わせで治療された。腫瘍細胞増殖曲線（イメージ当たりの赤色の数として測定された）は、１２０時間にわたる連続的生細胞イメージングによりモニタリングされた。コントロールとして、Ｃ－３３ａ細胞が、治療の非存在下で（治療なし）、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬのみを用いて（ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ）又はＦＡＰ－４－１－ＢＢＬなしで種々の濃度のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢを用いて（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ）、ＰＢＭＣと共に（照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で）インキュベートされた。
【図4A-F】ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ活性化Ｔ細胞により放出されたサイトカイン及びグランザイムＢの定量化である。ＳＣａＢＥＲ細胞は、照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で、５：１のＥ：Ｔ比でヒトＰＢＭＣと共にインキュベートされ、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬと種々の濃度（５０ｎＭ～１ｐＭ）のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢとの組み合わせで治療された。コントロールとして、ＳＣａＢＥＲ細胞が、治療の非存在下で（治療なし）、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬのみを用いて（ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ）又はＦＡＰ－４－１－ＢＢＬなしで種々の濃度のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢを用いて（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ）、ＰＢＭＣと共に（照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で）インキュベートされた。示されているのは、Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイにより決定された、４８時間のインキュベーション後の上清中へのサイトカイン放出の用量応答曲線（ｐｇ／ｍＬ）である。（Ａ）インターフェロン（ＩＦＮ）－γ、（Ｂ）インターロイキン（ＩＬ）－２、（Ｃ）腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、（Ｄ）ＩＬ－６、（Ｅ）ＩＬ－８、（Ｆ）ＩＬ－１０。
【図4G】ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ活性化Ｔ細胞により放出されたサイトカイン及びグランザイムＢの定量化である。ＳＣａＢＥＲ細胞は、照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で、５：１のＥ：Ｔ比でヒトＰＢＭＣと共にインキュベートされ、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬと種々の濃度（５０ｎＭ～１ｐＭ）のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢとの組み合わせで治療された。コントロールとして、ＳＣａＢＥＲ細胞が、治療の非存在下で（治療なし）、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬのみを用いて（ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ）又はＦＡＰ－４－１－ＢＢＬなしで種々の濃度のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢを用いて（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ）、ＰＢＭＣと共に（照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で）インキュベートされた。示されているのは、Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイにより決定された、４８時間のインキュベーション後の上清中へのサイトカイン放出の用量応答曲線（ｐｇ／ｍＬ）である。（Ｇ）グランザイムＢ。
【図5A-F】ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ活性化Ｔ細胞により放出されたサイトカイン及びグランザイムＢの定量化である。Ｃ３３－ａ細胞は、照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で、５：１のＥ：Ｔ比でヒトＰＢＭＣと共にインキュベートされ、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬと種々の濃度（５０ｎＭ～１ｐＭ）のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢとの組み合わせで治療された。コントロールとして、Ｃ－３３ａ細胞が、治療の非存在下で（治療なし）、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬのみを用いて（ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ）又はＦＡＰ－４－１－ＢＢＬなしで種々の濃度のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢを用いて（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ）、ＰＢＭＣと共に（照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で）インキュベートされた。示されているのは、Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイにより決定された、４８時間のインキュベーション後の上清中へのサイトカイン放出の用量応答曲線（ｐｇ／ｍＬ）である。（Ａ）インターフェロン（ＩＦＮ）－γ、（Ｂ）インターロイキン（ＩＬ）－２、（Ｃ）腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、（Ｄ）ＩＬ－６、（Ｅ）ＩＬ－８、（Ｆ）ＩＬ－１０、（Ｇ）グランザイムＢ。
【図5G】ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ活性化Ｔ細胞により放出されたサイトカイン及びグランザイムＢの定量化である。Ｃ３３－ａ細胞は、照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で、５：１のＥ：Ｔ比でヒトＰＢＭＣと共にインキュベートされ、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬと種々の濃度（５０ｎＭ～１ｐＭ）のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢとの組み合わせで治療された。コントロールとして、Ｃ－３３ａ細胞が、治療の非存在下で（治療なし）、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬのみを用いて（ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ）又はＦＡＰ－４－１－ＢＢＬなしで種々の濃度のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢを用いて（ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ）、ＰＢＭＣと共に（照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ細胞の存在下で）インキュベートされた。示されているのは、Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイにより決定された、４８時間のインキュベーション後の上清中へのサイトカイン放出の用量応答曲線（ｐｇ／ｍＬ）である。（Ｇ）グランザイムＢ。
【実施例】
【0155】
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上述の一般的な説明を考慮すると、種々の他の態様が実施されうることが理解される。
【0156】
実施例１－ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬ媒介性腫瘍細胞溶解をモニタリングするための連続的生細胞イメージング
ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬの組み合わせにより数日間にわたり動的に誘導される腫瘍細胞溶解をモニタリングするために、連続的生細胞イメージングが、２つの異なるＭＡＧＥ－Ａ４＋／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１＋ 細胞株（ＳＣａＢＥＲ、ヒト膀胱の扁平上皮癌由来の細胞株（Ｏ’Ｔｏｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １７：７０７－７１４（１９７６））及びＣ－３３ａ、ヒト子宮頸癌由来の細胞株（Ａｕｅｒｓｐｅｒｇ，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．３２，１３５－１６３（１９６４））を用いて実施された。細胞は、照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ線維芽細胞細胞（増殖を防止するために照射された、ヒトＦＡＰを安定的に発現するＮＩＨ／３Ｔ３細胞）の存在下で、ヒトＰＢＭＣと共にインキュベートし、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬと種々の濃度（５０ｎＭ～１ｐＭ）のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢとの組み合わせで治療した。コントロールとして、腫瘍細胞を、治療の非存在下で（治療なし）、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬのみを用いて、又は種々の濃度のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢのみを用いて、ＰＢＭＣと共にインキュベートした。
ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬの組み合わせにより数日間にわたり動的に誘導される腫瘍細胞溶解をモニタリングするために、連続的生細胞イメージングが、２つの異なるＭＡＧＥ－Ａ４＋／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１＋ 細胞株（ＳＣａＢＥＲ、ヒト膀胱の扁平上皮癌由来の細胞株（Ｏ’Ｔｏｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １７：７０７－７１４（１９７６））及びＣ－３３ａ、ヒト子宮頸癌由来の細胞株（Ａｕｅｒｓｐｅｒｇ，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．３２，１３５－１６３（１９６４））を用いて実施された。細胞は、照射されたＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰ線維芽細胞細胞（増殖を防止するために照射された、ヒトＦＡＰを安定的に発現するＮＩＨ／３Ｔ３細胞）の存在下で、ヒトＰＢＭＣと共にインキュベートし、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬと種々の濃度（５０ｎＭ～１ｐＭ）のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢとの組み合わせで治療した。コントロールとして、腫瘍細胞を、治療の非存在下で（治療なし）、２ｎＭのＦＡＰ－４－１－ＢＢＬのみを用いて、又は種々の濃度のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢのみを用いて、ＰＢＭＣと共にインキュベートした。
【0157】
アッセイ設定の１日前に、健常なドナーＰＢＭＣ（Ｌｏｎｚａ）を解凍し、１０％のＦＣＳ、及び１％のＧｌｕｔａＭＡＸを含有するＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁した。細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２のインキュベーター内で一晩維持した。
【0158】
それと並行して、標的腫瘍細胞株を収集し、それらの生存率及び細胞数を、ＶｉＣｅｌｌ ＸＲ細胞カウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して評価した。遠心分離（３５０×ｇ、４℃、５分）後、１０％のＦＣＳ、及び１％のＧｌｕｔａＭＡＸを含有するＲＰＭＩ１６４０中において、細胞数を、８×１０４細胞／ｍＬ（ＳＣａＢＥＲ Ｈ２ＢＲＦＰ、即ちｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｄ蛍光性タンパク質を安定的に発現するレンチウイルス（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃４４７６）を形質導入）、２４×１０４細胞／ｍＬ（Ｃ－３３ａ Ｈ２ＢＲＦＰ）、又は１６×１０４細胞／ｍＬ（ＮＩＨ／３Ｔ３－ｈｕＦＡＰクローン１９照射）に調整した。６２．５μＬの細胞懸濁液を蒔いて、５０００、１５，０００、又は１０，０００細胞／ウェルの最終細胞密度を得た。すべてのエッジウェルを、アッセイウェル中での液体のエバポレーションを避けるためにアッセイ培地で満たした。標的細胞を含有するアッセイプレートを、３７℃及び５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。
【0159】
アッセイ日に、６２．５μＬのＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢを標的細胞に加え、ウェル当たり５０ｎＭ～１ｐＭの最終濃度を得た。２ｎＭのＦＡＰ－４－１ＢＢＬ又はＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ用のアッセイ培地のみでの治療を加えた。「抗体なし」コントロールには、アッセイ培地を加えた。
【0160】
以前に解凍したＰＢＭＣ（上記参照）をインキュベーターから採取し、ＶｉＣｅｌｌ ＸＲ細胞カウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いてカウントし、遠心分離した（３５０×ｇ、５分）。ＰＢＭＣを、アッセイ培地に４×１０５細胞／ｍＬ（ＳＣａＢＥＲ Ｈ２ＢＲＦＰについて）又は１．２×１０６細胞／ｍＬ（Ｃ３３ａ Ｈ２ＢＲＦＰについて）で再懸濁した。それぞれのＰＢＭＣ溶液をウェル毎に蒔き、最終容積２５０μＬにおいて５：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比を得た。
【0161】
２００×ｇで１分間の遠心分離後、プレートを３７℃及び５％ ＣＯ２のＩｎｃｕｃｙｔｅ Ｓ３ Ｌｉｖｅ－Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｌｔｄ．）のインキュベーター内に置き、スキャンを１時間後（タイム０時間）にスタートした。プレートは、ウェル当たり４つの写真を撮ることにより、３時間毎に合計１２０時間スキャンした（位相差、赤色チャネル［即ち、標的細胞］）。タイム０時間における平均シグナルを、各条件の３つの複製物から計算した。この値を、その後の時点の同じ条件の各値から減算し、平均化した値を得た。
【0162】
４８時間後、各ウェルから２５μＬの上清を新鮮なプレートに移し、Ｌｕｍｉｎｅｘサイトカイン分析のために－８０℃で凍結した（実施例0参照）。
【0163】
【0164】
図２及び図３に示されるように、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢと標的化共刺激分子ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬとの組み合わせは、連続的生細胞イメージングによりモニタリングした場合に、腫瘍細胞増殖に強い阻害を導く。対照的に、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢは、単剤治療として使用したとき、腫瘍増殖の阻害を誘導しないか、又は極めて弱い誘導しかしない（高濃度で）。このことは、ＳＣａＢＥＲ及びＣ－３３ａ細胞のＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ単剤療法への非応答性が、ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬとの併用療法により克服できることを示すものである。
【0165】
実施例２－ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬの組み合わせによって誘導されるサイトカイン放出を定量化するためのＬｕｍｉｎｅｘイムノアッセイ
連続的生細胞イメージングに加えて、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬの組み合わせの薬理的活性を、活性化Ｔ細胞により細胞上清中に放出されたサイトカイン及び細胞傷害性顆粒（グランザイムＢ）のレベルを定量化することによって、さらに評価した。細胞培養上清中に放出されたサイトカインは、Ｈｕｍａｎ Ｃｕｓｔｏｍ ＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘ ７－ｐｌｅｘキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ ＰＰＸ－０７－ＭＸＦＶＫ４Ｙ）を使用することにより、Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイを介して定量化された。
連続的生細胞イメージングに加えて、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１－ＢＢＬの組み合わせの薬理的活性を、活性化Ｔ細胞により細胞上清中に放出されたサイトカイン及び細胞傷害性顆粒（グランザイムＢ）のレベルを定量化することによって、さらに評価した。細胞培養上清中に放出されたサイトカインは、Ｈｕｍａｎ Ｃｕｓｔｏｍ ＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘ ７－ｐｌｅｘキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ ＰＰＸ－０７－ＭＸＦＶＫ４Ｙ）を使用することにより、Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイを介して定量化された。
【0166】
アッセイ日に、腫瘍細胞溶解実験からの凍結細胞上清を、氷上で解凍した。３つの複製物を、ボルテックスすることによりよく混合し、１つのウェルにプールした。試料は、アッセイ培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％ ＦＢＳ、１％ ＧｌｕｔａＭＡＸ）中で１：３に希釈して使用した。
【0167】
標準バイアル（キット中に提供される）を、２０００×ｇで１０秒間遠心分離し、製造者の説明（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従ってアッセイ培地を加えることにより再構成した。アッセイ培地及び空（培地のみの）試料中の３倍の標準希釈系列を、プレートレイアウトに従って懸濁プレート中に加えた。
【0168】
磁気ビーズを、３０秒間ボルテックスし、アッセイ培地中で１：２に希釈し、光から保護した（アルミ箔により）。
【0169】
フィルタープレートを、１００μＬ／ウェルのＰＢＳを加えることにより５分間事前に湿らせ、真空マニホールドで乾燥させた。
【0170】
ビーズ溶液を３０秒間ボルテックスし、５０μＬ／ウェルをフィルターアッセイプレートに加えた。１００μＬ／ウェルの洗浄バッファーで２回洗浄した後、５０μＬ／ウェルの試料、標準物質、又は空試料を加え、プレートを、暗所において室温でプレートシェーカー（５００ｒｐｍ）上で＞６０分間インキュベートした。
【0171】
フィルタープレートを、１００μＬ／ウェルの洗浄バッファーで２回洗浄した。次いで、１×の検出抗体混合物を、ＰＢＳ又はＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ中で１：２に希釈し、各ウェルに２５μＬを加え、暗所において室温でプレートシェーカー（５００ｒｐｍ）上で３０分間インキュベートした。
【0172】
１００μＬ／ウェルの洗浄バッファーで２回洗浄した後、５０μＬ／ウェルのＳＡ－ＲＰＥ溶液（ＰＢＳ又はＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ中で１：２に希釈）を、各ウェルに加えた。プレートを、暗所において室温でプレートシェーカー（５００ｒｐｍ）上で３０分間インキュベートした。１００μＬ／ウェルの洗浄バッファーで２回洗浄した後、１００μＬ／ウェルの読み取りバッファーを各ウェルに加え、プレートを、さらに５分間同じ条件でインキュベートした。
【0173】
プレートをＢｉｏＰｌｅｘ（登録商標）（ＢｉｏＲａｄ）プレートリーダーで読み取り、得られたシグナルを、Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘ Ｍａｎａｇｅｒ ６．１．１ソフトウェアにより自動的に定量化した。
【0174】
結果を図４及び図５に示す。サイトカイン濃度の値をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍに移し、グラフ化した。各サイトカイン濃度の値は、ベースライン減算により補正された。ベースラインは、一切の治療分子なしで標的細胞及びＰＢＭＣで共培養したウェルの上清中に蓄積されたサイトカイン濃度を指す。Ｓ字状用量応答、４パラメーターロジスティック方程式、及び最小二乗法（通常の）フィッティング分析をベースライン減算値に適用し、用量応答曲線のフィッティングを行った。
【0175】
連続的生細胞イメージングについて得られた結果と一致して、用量依存性サイトカイン分泌は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ＋ＦＡＰ－４－１ＢＢＬ活性化Ｔ細胞について観察することができた（図４及び図５）が、ＭＡＧＥ－Ａ４ ＴＣＢ単剤療法については、サイトカイン放出を観察することができなかったか、又は観察されたサイトカイン放出は極めて小さかった。
【0176】
先述の発明は、理解を明瞭にする目的で説明及び例示によりある程度詳細に記載されたが、それら記載及び例示は本発明の範囲を限定するものではない。本明細書に引用されるすべての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が援用される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4A-F】
【図4G】
【図5A-F】
【図5G】
【配列表】
【国際調査報告】