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特表2025-504136イソキサゾリン誘導体を含む注射用製剤及びこの製造方法

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2025-02-06

(54)【発明の名称】イソキサゾリン誘導体を含む注射用製剤及びこの製造方法

(51)【国際特許分類】

A61K 31/4725 20060101AFI20250130BHJP

A61P 1/04 20060101ALI20250130BHJP

A61P 1/16 20060101ALI20250130BHJP

A61P 3/10 20060101ALI20250130BHJP

A61P 9/00 20060101ALI20250130BHJP

A61P 9/10 20060101ALI20250130BHJP

A61P 19/00 20060101ALI20250130BHJP

A61P 19/02 20060101ALI20250130BHJP

A61P 25/00 20060101ALI20250130BHJP

A61P 25/28 20060101ALI20250130BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20250130BHJP

A61P 31/04 20060101ALI20250130BHJP

A61P 31/12 20060101ALI20250130BHJP

A61P 37/06 20060101ALI20250130BHJP

A61K 9/08 20060101ALI20250130BHJP

A61K 9/14 20060101ALI20250130BHJP

A61K 47/04 20060101ALI20250130BHJP

A61K 47/69 20170101ALI20250130BHJP

A61K 47/40 20060101ALI20250130BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4725

A61P1/04

A61P1/16

A61P3/10

A61P9/00

A61P9/10

A61P19/00

A61P19/02

A61P25/00

A61P25/28

A61P29/00 101

A61P31/04

A61P31/12

A61P37/06

A61K9/08

A61K9/14

A61K47/04

A61K47/69

A61K47/40

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024546186

(86)(22)【出願日】2023-02-20

(85)【翻訳文提出日】2024-08-02

(86)【国際出願番号】 KR2023002402

(87)【国際公開番号】W WO2023163470

(87)【国際公開日】2023-08-31

(31)【優先権主張番号】10-2022-0023373

(32)【優先日】2022-02-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500239823

【氏名又は名称】エルジー・ケム・リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100122161

【弁理士】

【氏名又は名称】渡部崇

(72)【発明者】

【氏名】ジェウク・ベク

(72)【発明者】

【氏名】スン・ウォン・キム

(72)【発明者】

【氏名】ジュン・ウン・ユン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076AA29

4C076BB11

4C076BB21

4C076CC01

4C076CC07

4C076CC11

4C076CC16

4C076CC21

4C076CC32

4C076CC35

4C076DD26Z

4C076DD30Z

4C076EE39E

4C076FF36

4C076FF63

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC67

4C086GA02

4C086GA07

4C086GA09

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA17

4C086MA43

4C086MA56

4C086MA66

4C086NA03

4C086ZA02

4C086ZA15

4C086ZA36

4C086ZA68

4C086ZA96

4C086ZB08

4C086ZB15

4C086ZB33

4C086ZB35

4C086ZC35

(57)【要約】

本発明は、カスパーゼ阻害剤として有用なイソキサゾリン誘導体またはこの薬学的に許容可能な塩を活性薬理成分（ＡＰＩ）として含む注射用製剤に関する。
本発明による注射用製剤は、高用量のＡＰＩで構成された第１剤と再構成溶液を含む第２剤とを含み、患者に投与直前に第１剤と第２剤とを混合して製造されることができ、活性型ＡＰＩを安定的に含んで含有しているので、患者に投与する場合、効果的に薬効を期待できる長所がある。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記化学式１の化合物、ホスフェート緩衝剤、可溶化剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）及びｐＨ調節剤を含む粉末形態である第１剤；及び
ｐＨが５ないし１２である再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）溶液を含む第２剤；を含む、注射用製剤：

【化1】

【請求項2】

前記ホスフェート緩衝剤は、リン酸ナトリウム２塩基性７水和物及びリン酸ナトリウム１塩基酸１水和物の混合物である、請求項１に記載の注射用製剤。

【請求項3】

前記ホスフェート緩衝剤の含量は、第１剤を基準にして１ないし１５ｍＭである、請求項１に記載の注射用製剤。

【請求項4】

前記可溶化剤はシクロデキストリンである、請求項１に記載の注射用製剤。

【請求項5】

前記シクロデキストリンは、アルファ‐シクロデキストリン、２‐ヒドロキシプロピル‐ベータ‐シクロデキストリン及びスルホブチルエーテル‐ベータ‐シクロデキストリンからなる群からいずれか一つが選択される、請求項４に記載の注射用製剤。

【請求項6】

前記シクロデキストリンの含量は第１剤を基準にして１０ないし３０重量％である、請求項４に記載の注射用製剤。

【請求項7】

前記第１剤及び前記第２剤を混合した再構成後の溶液のｐＨが５．０ないし７．０である、請求項１に記載の注射用製剤。

【請求項8】

前記第１剤及び前記第２剤を混合した再構成後の溶液の浸透圧が３００ｍＯｓｍ／ｋｇないし４００ｍＯｓｍ／ｋｇである、請求項１に記載の注射用製剤。

【請求項9】

前記化学式１の化合物の含量が前記第１剤及び前記第２剤を混合した再構成後の溶液を基準にして１ないし２０ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の注射用製剤。

【請求項10】

（Ｓ１）ホスフェート緩衝剤、可溶化剤及び塩基性ｐＨ調節剤を含むｐＨが１０ないし１２である溶媒を製造する段階；
（Ｓ２）前記製造された溶媒に下記化学式１の化合物を溶解させてｐＨが６ないし８である第１溶液を製造する段階；

【化2】

（Ｓ３）前記第１溶液に酸性ｐＨ調節剤を添加してｐＨ１．０ないし３．０である第２溶液を製造する段階；
（Ｓ４）前記第２溶液を凍結乾燥して粉末形態である第１剤を製造する段階；及び
（Ｓ５）ｐＨが５ないし１２である再構成溶液を含む第２剤を製造する段階；を含む、注射用製剤の製造方法。

【請求項11】

前記化学式１の化合物の含量が再構成後の溶液を基準にして１ないし２０ｍｇ／ｍｌである、請求項１０に記載の注射用製剤の製造方法。

【請求項12】

前記ホスフェート緩衝剤は、リン酸ナトリウム２塩基性７水和物及びリン酸ナトリウム１塩基性１水和物の混合物である、請求項１０に記載の注射用製剤の製造方法。

【請求項13】

前記ホスフェート緩衝剤の含量は溶媒を基準にして１ないし１５ｍＭである、請求項１０に記載の注射用製剤の製造方法。

【請求項14】

前記可溶化剤はシクロデキストリンである、請求項１０に記載の注射用製剤の製造方法。

【請求項15】

前記シクロデキストリンは、アルファ‐シクロデキストリン、２‐ヒドロキシプロピル‐ベータ‐シクロデキストリン及びスルホブチルエーテル‐ベータ‐シクロデキストリンからなる群からいずれか一つが選択されるものである、請求項１４に記載の注射用製剤の製造方法。

【請求項16】

前記シクロデキストリンの含量は溶媒を基準にして１０ないし３０重量％である、請求項１４に記載の注射用製剤の製造方法。

【請求項17】

前記注射用製剤は、骨関節炎、関節リウマチ、退行性関節炎、破壊性骨障害、ウイルス性肝炎による肝疾患、急性肝炎、肝硬化、ウイルス性肝炎による脳損傷、人間突発性肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、虚血性心疾患、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿及び胃潰瘍からなる群から選択される疾患を治療または予防するための、請求項１に記載の注射用製剤。

【請求項18】

前記疾患は、骨関節炎、関節リウマチ、退行性関節炎及び破壊性骨障害からなる群から選択されるものである、請求項１７に記載の注射用製剤。

【請求項19】

前記注射用製剤は単一投与量で、第１剤及び第２剤を混合した溶液状態で使われるものである、請求項１に記載の注射用製剤。

【請求項20】

前記注射用製剤は、第１剤及び第２剤を混合した後、関節腔内に投与されるものである、請求項１９に記載の注射用製剤。

【請求項21】

前記注射用製剤は、第１剤及び第２剤を混合した後、３０分以内に関節腔内に投与されるものである、請求項１９に記載の注射用製剤。

【請求項22】

前記注射用製剤は、第１剤及び第２剤を混合した後、１回投与されるものである、請求項１９に記載の注射用製剤。

【請求項23】

下記化学式１の化合物、ホスフェート緩衝剤、可溶化剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）及びｐＨ調節剤を含む粉末形態である第１剤；及び
ｐＨが５ないし１２である再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）溶液を含む第２剤；を含む注射用製剤であって、

【化3】

前記注射用製剤は、第１剤及び第２剤を混合した後、３０分以内に下記化学式２の化合物及び下記化学式３の化合物の含量を測定した時、化学式２の化合物及び化学式３の化合物の全体含量のうち、化学式２の化合物の含量が９４％以上である、注射用製剤：

【化4】

【化5】

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２２年２月２３日付韓国特許出願第１０‐２０２２‐００２３３７３に基づく優先権の利益を主張し、該当韓国特許出願の文献に開示されているすべての内容を本明細書の一部として組み込む。

【0002】

本発明は、カスパーゼ阻害剤として有用なイソキサゾリン誘導体またはこの薬学的に許容可能な塩を活性薬理成分（ＡＰＩ）として含む注射用製剤及びこの製造方法に関する。

【背景技術】

【0003】

カスパーゼ（ｃａｓｐａｓｅ）は、システインプロテアーゼ（ｃｙｓｔｅｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅ）であり、カスパーゼ阻害剤は、このようなカスパーゼの作用を抑制することで、カスパーゼの作用によって引き起こされる炎症や細胞死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を調節できる化合物である。このような化合物を投与して症状を無くしたり、緩和させることができる疾病としては、骨関節炎、関節リウマチ、退行性関節炎、破壊性骨障害、ウイルス性肝炎による肝疾患、急性肝炎、肝硬化、ウイルス性肝炎による脳損傷、人間突発性肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、虚血性心疾患、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍などがある。

【0004】

カスパーゼ阻害剤として、多様な種類のイソキサゾリン誘導体及びイソキサゾリン誘導体のプロドラッグが知られている。前記イソキサゾリン誘導体のうち、（Ｒ）‐Ｎ‐（（２Ｓ，３Ｓ）‐２‐（フルオロメチル）‐２‐ヒドロキシ‐５‐オキソテトラヒドロフラン‐３‐イル）‐５‐イソプロピル‐３‐（イソキノリン‐１‐イル）‐４，５‐ジヒドロイソオキサゾール‐５‐カルボキサミド（以下「化学式１の化合物」という）は、既にウイルス性肝炎による肝疾患、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎（Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ：ＮＡＳＨ）からその効能が立証されたことがある。

【化1】

【0005】

最近、前記化学式１の化合物を骨関節炎（ＯＡ：ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、関節リウマチ、退行性関節炎、破壊性骨障害などの骨関節と係る疾患に適用しようとする試みがある。

【0006】

骨関節と係る疾患の治療において、一般的な薬物投与方法は、潤滑液（ｓｙｎｏｖｉａｌｆｌｕｉｄ）で満たされている関節腔（ｊｏｉｎｔｃａｖｉｔｙ）内に直接注射器で投与することである。経口投与の場合、全身へ薬物効果が及ぼすが、全身副作用を避けることはできない。一方、関節腔内に直接投与する場合、薬物の局所投与により、薬物が直接伝わる局所治療の効果だけでなく、高濃度の薬物を投与することができ、全身副作用を最小化することができるという長所がある。

【0007】

化学式１の化合物は、既存の肝疾患に対して経口用製剤で治療効果を確認したが、化学式１の化合物は水にあまり溶けないので、注射用製剤で剤形化するには困難がある。

【0008】

したがって、化学式１の化合物を注射剤で使うことができる高濃度の注射用製剤の開発が必要な実情である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】韓国特許公報第０７７４９９９号（２００７年１１月０２日）イソキサゾリン誘導体及びその製造方法

【特許文献2】韓国特許出願第２０２１‐０１０２４７６号（２０２１年０８月０４日）カスパーゼ阻害剤の骨関節炎緩和または治療における用途

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｒａｔｚｉｕｅｔａｌ．，‘ＡＰｈａｓｅ２、Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ、Ｄｏｕｂｌｅ‐Ｂｌｉｎｄ、Ｐｌａｃｅｂｏ‐ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＳｔｕｄｙｏｆＧＳ‐９４５０ｉｎＳｕｂｊｅｃｔｓｗｉｔｈＮｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃＳｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ' ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ、Ｖｏｌ．５５，Ｎｏ．２，２０１２

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

これにより、本発明者らは前記問題を解決するために多角的に研究した結果、高含量の化学式１の化合物を活性薬理成分（ＡＰＩ）とする注射用製剤を導き出すことが本発明の解決しようとする課題である。

【0012】

また、高含量の化学式１の化合物を活性薬理成分（ＡＰＩ）とする注射用製剤において、活性薬理成分の安定性を高め、長期保管が可能な凍結乾燥注射用製剤を導き出すことが本発明の解決しようとする課題である。

【課題を解決するための手段】

【0013】

本発明は、下記化学式１の化合物、ホスフェート緩衝剤、可溶化剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）及びｐＨ調節剤を含む粉末形態である第１剤；及びｐＨが５ないし１２の再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）溶液を含む第２剤；を含む、注射用製剤を提供する：

【化2】

【0014】

また、本発明は、前記ホスフェート緩衝剤がリン酸ナトリウム２塩基性７水和物及びリン酸ナトリウム１塩基酸１水和物との混合物である注射用製剤を提供する。

【0015】

また、本発明は、前記ホスフェート緩衝剤の含量が第１剤を基準にして１ないし１５ｍＭである注射用製剤を提供する。

【0016】

また、本発明は、前記可溶化剤がベータ‐シクロデキストリンである注射用製剤を提供する。

【0017】

また、本発明は、前記ベータ‐シクロデキストリンがヒドロキシメチル‐ベータ‐シクロデキストリン、ヒドロキシエチル‐ベータ‐シクロデキストリン及びヒドロキシプロピル‐ベータシクロデキストリンからなる群からいずれか一つが選択される注射用製剤を提供する。

【0018】

また、本発明は、前記ベータ‐シクロデキストリンの含量が第１剤を基準にして１０ないし３０重量％である注射用製剤を提供する。

【0019】

また、本発明は、前記第１剤及び前記第２剤とを混合した再構成後溶液のｐＨが５．０ないし７．０である注射用製剤を提供する。

【0020】

また、本発明は、前記第１剤及び前記第２剤とを混合した再構成後溶液の浸透圧が３００ｍＯｓｍ／ｋｇないし４００ｍＯｓｍ／ｋｇである注射用製剤を提供する。

【0021】

また、本発明は、前記化学式１の化合物の含量が前記第１剤及び前記第２剤を混合した再構成後溶液を基準にして１ないし２０ｍｇ／ｍｌである注射用製剤を提供する。

【0022】

また、本発明は、（Ｓ１）ホスフェート緩衝剤、可溶化剤及び塩基性ｐＨ調節剤を含むｐＨが１０ないし１２である溶媒を製造する段階；（Ｓ２）前記製造された溶媒に下記化学式１の化合物を溶解させてｐＨが６ないし８である第１溶液を製造する段階；

【化3】

【0023】

（Ｓ３）前記第１溶液に酸性ｐＨ調節剤を添加してｐＨ１．０ないし３．０である第２溶液を製造する段階；（Ｓ４）前記第２溶液を凍結乾燥して粉末形態である第１剤を製造する段階；及び（Ｓ５）ｐＨが５ないし１２である再構成溶液を含む第２剤を製造する段階；を含む、注射用製剤の製造方法を提供する。

【0024】

また、本発明は、前記化学式１の化合物の含量が再構成後溶液を基準にして１ないし２０ｍｇ／ｍｌである注射用製剤の製造方法を提供する。

【0025】

また、本発明は、前記ホスフェート緩衝剤がリン酸ナトリウム２塩基性７水和物及びリン酸ナトリウム１塩基酸１水和物の混合物である注射用製剤の製造方法を提供する。

【0026】

また、本発明は、前記ホスフェート緩衝剤の含量が溶媒を基準にして１ないし１５ｍＭである注射用製剤の製造方法を提供する。

【0027】

また、本発明は、前記可溶化剤がベータ‐シクロデキストリンである注射用製剤の製造方法を提供する。

【0028】

また、本発明は、前記ベータ‐シクロデキストリンがヒドロキシメチル‐ベータ‐シクロデキストリン、ヒドロキシエチル‐ベータ‐シクロデキストリン及びヒドロキシプロピル‐ベータシクロデキストリンからなる群からいずれか一つが選択される注射用製剤の製造方法を提供する。

【0029】

また、本発明は、前記ベータ‐シクロデキストリンの含量が溶媒を基準にして１０ないし３０重量％である注射用製剤の製造方法を提供する。

【0030】

また、本発明は、骨関節炎、関節リウマチ、退行性関節炎、破壊性骨障害、ウイルス性肝炎による肝疾患、急性肝炎、肝硬化、ウイルス性肝炎による脳損傷、人間突発性肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、虚血性心疾患、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿及び胃潰瘍からなる群から選択される疾患を治療または予防するための注射用製剤を提供する。

【0031】

また、本発明は、前記疾患が骨関節炎、関節リウマチ、退行性関節炎及び破壊性骨障害からなる群から選択される注射用製剤を提供する。

【0032】

また、本発明は、単一投与量で、第１剤及び第２剤を混合した溶液状態で使われる注射用製剤を提供する。

【0033】

また、本発明は、第１剤及び第２剤を混合した後、関節腔内に投与される注射用製剤を提供する。

【0034】

また、本発明は、第１剤及び第２剤を混合した後、３０分以内に関節腔内に投与される注射用製剤を提供する。

【0035】

また、本発明は、第１剤及び第２剤を混合した後、１回投与される注射用製剤を提供する。

【0036】

また、本発明は、下記化学式１の化合物、ホスフェート緩衝剤、可溶化剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）及びｐＨ調節剤を含む粉末形態である第１剤；及びｐＨが５ないし１２である再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）溶液を含む第２剤；を含む注射用製剤で、

【化4】

前記注射用製剤は、第１剤及び第２剤を混合した後、３０分以内に下記化学式２の化合物及び下記化学式３の化合物の含量を測定した時、化学式２の化合物及び化学式３の化合物の全体含量のうち、化学式２の化合物の含量が９４％以上である注射用製剤を提供する：

【化5】

【化6】

【発明の効果】

【0037】

本発明による注射用製剤は、凍結乾燥剤形である第１剤と再構成溶液を含む第２剤とを含み、実際患者に投与する直前に第１剤及び第２剤を混合して薬物を製造した後、３０分以内に患者に投与するので、活性型ＡＰＩの含量が高い注射用製剤を提供することができる。

【0038】

また、活性薬理成分（ＡＰＩ）の安定性を高め、長期保管が可能な凍結乾燥注射用製剤を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0039】

【図1】撹拌時間に対するＡＰＩ混合溶液内のＡＰＩ純度を測定した結果を示す図面である。

【図2】（ａ）は実施例５２で製造されたＡＰＩ凍結乾燥最終剤形のＴＧＡ測定結果で、（ｂ）は実施例５２で製造されたＡＰＩ凍結乾燥最終剤形のＤＳＣ測定結果を示す図面である。

【図3】実施例５２で製造されたＡＰＩ凍結乾燥最終剤形のＸＲＤパターン測定結果を示す図面である。

【発明を実施するための形態】

【0040】

以下、本発明をより詳細に説明する。

【0041】

本発明で使われるすべての技術用語は、他に定義されない限り、本発明の関連分野で通常の知識を有する者が一般的に理解するものと同様の意味で使われる。また、本明細書には好ましい方法や試料が記載されるが、これと類似または同等なものなども本発明の範疇に含まれる。本明細書に参考文献として記載されるすべての刊行物の内容は、全体が本明細書に参照として統合される。

【0042】

本発明の化学式１の化合物は水にほとんど溶けないので、化学式１の化合物を高含量で溶かすことができる溶媒を見つけるために多様な組成の溶媒での溶解度を分析した。

【0043】

その結果、化学式１の化合物は、ホスフェート緩衝剤、可溶化剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）及びｐＨ調節剤を含む溶媒の中で、ｐＨ４以下の酸性溶媒ではほとんど溶けないことに対し、ｐＨ６以上の弱酸性溶媒及びｐＨ７．５以上の塩基性溶媒でよく溶けることを確認した。また、前記化学式１の化合物は、溶媒に溶けながら溶液のｐＨを減少させる性質を持つことを確認した。

【0044】

また、化学式１の化合物が水性溶媒に溶解される場合、ラクトン環が切れながら下記化学式２の化合物に変換されることを見つけ出した。この時、前記化学式２の化合物は活性を持つ形態であるが、前記化学式２の化合物は水溶液状態で速く構造異性体である化学式３の化合物に非可逆的に変換され、前記化学式３の化合物は化学式２の化合物とは違って、カスパーゼ阻害活性を示さない不活性形態であることを見つけ出した。

【0045】

【化7】

【0046】

【化8】

【0047】

【化9】

【0048】

さらに、溶媒のｐＨによって化学式２の化合物から化学式３の化合物への変換率を確認した結果、酸性溶媒では化学式３の化合物がほとんど生成されないが、中性以上の塩基性溶媒では前記化学式３の化合物が速く生成されることを確認することができた。

【0049】

したがって、化学式１の化合物を溶かすためには、ｐＨが高い塩基性溶媒を利用しなければならないが、前記化学式１の化合物が溶解されながら、溶液のｐＨを下げて溶解されていない化合物の溶解度を下げるだけでなく、溶解された化合物の活性型は塩基性溶媒で急速に不活性型に変更されることが分かった。このような機序は、化学式１の化合物をＡＰＩとする注射剤剤形で活性成分の純度を下げるので、薬効に影響を及ぼすだけでなく、前記化学式１の化合物が溶解されながら溶液のｐＨを下げるので、個体への投与のための最終薬品製造の際にｐＨを調節することが難しいという問題がある。

【0050】

したがって、本発明者は多様な注射用製剤を研究した結果、前記化学式１の化合物を含む溶液を酸性化された溶液に製造した後凍結乾燥させることで、長期間保管の安定性が向上された凍結乾燥注射用製剤を完成した。

【0051】

注射用製剤の製造方法
本発明の一実施例によれば、注射用製剤の製造方法は下記段階を含む：
（Ｓ１）ホスフェート緩衝剤、可溶化剤及び塩基性ｐＨ調節剤を含むｐＨが１０ないし１２である溶媒を製造する段階；
（Ｓ２）前記製造された溶媒に下記化学式１の化合物を溶解させてｐＨが６ないし８である第１溶液を製造する段階；

【化10】

（Ｓ３）前記第１溶液に酸性ｐＨ調節剤を添加してｐＨ１．０ないし３．０である第２溶液を製造する段階；
（Ｓ４）前記第２溶液を凍結乾燥して粉末形態である第１剤を製造する段階；及び
（Ｓ５）ｐＨが５ないし１２の再構成溶液を含む第２剤を製造する段階。

【0052】

本発明の一実施例において、注射用製剤の製造方法は、（Ｓ１）ホスフェート緩衝剤、可溶化剤及び塩基性ｐＨ調節剤を含む、ｐＨが１０ないし１２である溶媒を製造する段階を含むことができる。

【0053】

前記緩衝剤、可溶化剤及び塩基性ｐＨ調節剤を含む溶媒は、前記化学式１の化合物を溶解させることができる溶媒の組成であり得る。

【0054】

前記溶媒は緩衝剤を含むことができる。前記緩衝剤は注射用製剤に使われることができる通常の緩衝剤を使うことができ、具体的な例としては、ホスフェート緩衝剤、トリス緩衝剤、ＭＥＳ緩衝剤などがあるが、これに制限されない。ホスフェート緩衝剤を使う場合、リン酸ナトリウム２塩基酸、リン酸ナトリウム１塩基酸、リン酸カリウム２塩基酸、リン酸カリウム１塩基酸、及びこれらの混合物からなる群から選択することができる。トリス緩衝剤を使う場合、ＴＲＩＺＭＡ（登録商標）緩衝剤を使うことができる。

【0055】

前記緩衝剤は、溶媒を基準にして１ないし１５ｍＭの濃度を有し、具体的には、１ないし１５ｍＭ、２ないし１５ｍＭ、３ないし１５ｍＭ、４ないし１５ｍＭ、５ないし１５ｍＭ、１ないし１４ｍＭ、２ないし１４ｍＭ、３ないし１４ｍＭ、４ないし１４ｍＭ、５ないし１４ｍＭ、１ないし１３ｍＭ、２ないし１３ｍＭ、３ないし１３ｍＭ、４ないし１３ｍＭ、５ないし１３ｍＭ、１ないし１２ｍＭ、２ないし１２ｍＭ、３ないし１２ｍＭ、４ないし１２ｍＭ、５ないし１２ｍＭ、１ないし１１ｍＭ、２ないし１１ｍＭ、３ないし１１ｍＭ、４ないし１１ｍＭ、５ないし１１ｍＭ、１ないし１０ｍＭ、２ないし１０ｍＭ、３ないし１０ｍＭ、４ないし１０ｍＭまたは５ないし１０ｍＭの濃度を有することができる。

【0056】

前記溶媒は、可溶化剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）を含むことができる。前記可溶化剤はシクロデキストリンまたはこの誘導体を含むことができる。前記シクロデキストリンは前記化学式１の化合物の溶解安定度を向上させ、凍結乾燥の際に安定的で、均一なケーキが形成されることに影響を及ぼすことがある。

【0057】

前記シクロデキストリン（ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）は、６～１２個のブドウ糖分子がアルファ‐１，４‐グリコシド結合をした環状のオリゴ糖であって、６個のブドウ糖分子が繋がったアルファ‐シクロデキストリン、７個のブドウ糖分子が繋がったベータ‐シクロデキストリン、及び８個のブドウ糖分子が繋がったガンマ‐シクロデキストリンなどがある。本発明で使われることができるシクロデキストリンとしては、前記３種類の他にシクロデキストリン誘導体も全て含むことができる。

【0058】

前記シクロデキストリンの誘導体は、アルファ‐シクロデキストリン、２‐ヒドロキシプロピル‐ベータ‐シクロデキストリン、スルホブチルエーテル‐ベータ‐シクロデキストリンなどがあり、具体的には、２‐ヒドロキシプロピル‐ベータ‐シクロデキストリンであってもよい。

【0059】

前記可溶化剤は、溶媒を基準にして１０ないし３０重量％含むことができる。具体的には、１０ないし３０重量％、１０．５ないし３０重量％、１１ないし３０重量％、１１．５ないし３０重量％、１２ないし３０重量％、１０ないし２９．５重量％、１０．５ないし２９．５重量％、１１ないし２９．５重量％、１１．５ないし２９．５重量％、１２ないし２９．５重量％、１０ないし２９重量％、１０．５ないし２９重量％、１１ないし２９重量％、１１．５ないし２９重量％、１２ないし２９重量％、１０ないし２８．５重量％、１０．５ないし２８．５重量％、１１ないし２８．５重量％、１１．５ないし２８．５重量％、１２ないし２８．５重量％、１０ないし２８重量％、１０．５ないし２８重量％、１１ないし２８重量％、１１．５ないし２８重量％または１２ないし２８重量％含むことができる。

【0060】

前記溶媒は塩基性ｐＨ調節剤を含むことができる。前記塩基性ｐＨ調節剤は、ｐＨ１０ないし１２の溶媒製造の際に使われることができ、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、アンモニア、炭酸水素ナトリウムなどが使われることができるが、これらの例のみに限定されるものではない。

【0061】

前記塩基性ｐＨ調節剤は、溶媒を基準にして２０ないし４０ｍＭの濃度を有する。

【0062】

前記溶媒は前記緩衝剤及び塩基性ｐＨ調節剤を利用してｐＨを１０ないし１２に調節することができる。

【0063】

本発明の一実施例において、注射用製剤の製造方法は、（Ｓ２）前記製造された溶媒に下記化学式１の化合物を溶解させてｐＨが６ないし８である第１溶液を製造する段階を含むことができる：

【化11】

【0064】

前記化学式１の化合物は、ｐＨが１０ないし１２の溶媒で溶解されることができる。前記化学式１の化合物が溶媒に溶解されながら、第１溶液のｐＨを下げるため、前記化学式１の化合物及び溶媒を混合した第１溶液のｐＨは６ないし８であってもよい。前記化学式１の化合物の混合溶液のｐＨが６ないし８範囲を脱する場合、ＡＰＩを溶解することに適しないこともある。

【0065】

本発明の一実施例において、注射用製剤の製造方法は、（Ｓ３）前記第１溶液に酸性ｐＨ調節剤を添加してｐＨ１．０ないし３．０の第２溶液を製造する段階を含むことができる。

【0066】

ＡＰＩである化学式１の化合物は、ｐＨが１０ないし１２の溶媒で溶解されるが、溶解された化学式１の化合物の活性型は塩基性溶液で急速に不活性型に変更される。したがって、前記第２溶液の製造はＡＰＩを含む第１溶液のｐＨが高いほどＡＰＩの活性型が水溶液で速く加水分解されて不活性型に変わることを防止するためである。

【0067】

前記第２溶液の製造はＡＰＩが析出されてはならず、第２溶液の製造後、ＡＰＩの安定性（純度）が維持されなければならない。このような条件を満たすために、第２溶液のｐＨは１．０ないし３．０の範囲であってもよい。具体的に、第２溶液のｐＨは、１．０ないし３．０、１．０ないし２．９、１．０ないし２．８、１．０ないし２．７、１．０ないし２．６または１．０ないし２．５であってもよい。

【0068】

前記第２溶液の製造のために添加される酸性ｐＨ調節剤は塩酸であってもよいが、これに限定されず、前記第２溶液のｐＨが１．０ないし３．０を満たすことができる過塩素酸、硝酸、硫酸などが使われることができる。

【0069】

本発明の一実施例において、注射用製剤の製造方法は、（Ｓ４）前記第２溶液を凍結乾燥して粉末形態である第１剤を製造する段階を含むことができる。

【0070】

本明細書で使われる用語「凍結乾燥」は、乾燥する物質が先に凍結され、続いて氷または凍結された溶媒が真空環境で昇華によって除去される工程を意味する。

【0071】

前記凍結乾燥は、‐８０℃で３ないし５時間凍結した後、１０ないし２０Ｐａで１０ないし５０時間乾燥させることができる。

【0072】

前記第１剤は、粉末、乾燥粉末または凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌｅ）の形態であってもよい。前記第１剤は長期間保存が可能で、注射剤として製剤化が容易である。また、副作用を起こすような添加剤が存在しないので、人体に使うに全く害にならない。

【0073】

本発明の一実施例において、注射用製剤の製造方法は、（Ｓ５）ｐＨが５ないし１２である再構成溶液を含む第２剤を製造する段階を含むことができる。

【0074】

本明細書で使われる用語「再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）」とは、凍結乾燥粉末などの乾燥粉末に水または溶液を添加することで固体状態を液体状態に戻すことを意味し、本発明による再構成溶液は、第１剤に加えて液体状態で製造するための溶液を意味する。

【0075】

前記第２剤は、再構成媒体である滅菌精製水、注射用水、生理食塩水またはこれらの組み合わせを含み、前記再構成媒体に水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウムまたはこれらの組み合わせをさらに含む再構成溶液を含むことができる。

【0076】

前記再構成溶液のｐＨは５ないし１２の溶液であってもよい。前記ｐＨが５ないし１２の再構成溶液を含む第２剤の製造は、ｐＨが１．０ないし３．０である前記第２溶液を凍結乾燥して粉末形態に製造された第１剤を再構成するためのもので、注射用製剤を体内に投与する前に患者の痛み誘発防止のために体内に適した注射用製剤のｐＨを調節するためである。

【0077】

前記第２剤は再構成溶液の他にｐＨに影響を及ぼさない他の添加剤をさらに含むことができる。前記添加剤としては、防腐剤、界面活性剤などをさらに含むことができるが、これらの例のみに限定されず、当業界で通常使われる添加剤を選択的に含むことができる。前記防腐剤は２次汚染を防ぐためのもので、薬学的に許容される防腐剤を利用することができる。界面活性剤は、例えば、ポリオキシエチレン基を含む非イオン性界面活性剤を挙げることができるが、これに限定されず、薬学的に許容される界面活性剤を利用することができる。

【0078】

注射用製剤
本発明の一実施例によると、下記化学式１の化合物、ホスフェート緩衝剤、可溶化剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）及びｐＨ調節剤を含む粉末形態である第１剤；及びｐＨが５ないし１２の再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）溶液を含む第２剤；を含む注射用製剤を提供することができる：

【化12】

【0079】

前記第１剤は、緩衝剤、可溶化剤及びｐＨ調節剤を含むことができる。

【0080】

前記緩衝剤は、注射用製剤に使われることができる通常の緩衝剤を使用することができ、具体的な例としては、ホスフェート緩衝剤、トリス緩衝剤、ＭＥＳ緩衝剤などがあるが、これに制限されない。ホスフェート緩衝剤を使う場合、リン酸ナトリウム２塩基酸、リン酸ナトリウム１塩基酸、リン酸カリウム２塩基酸、リン酸カリウム１塩基酸、及びこれらの混合物からなる群から選択することができる。トリス緩衝剤を使う場合、ＴＲＩＺＭＡ（登録商標）緩衝剤を使うことができる。

【0081】

前記緩衝剤は、第１剤を基準にして１ないし１５ｍＭの濃度を有し、具体的には、１ないし１５ｍＭ、２ないし１５ｍＭ、３ないし１５ｍＭ、４ないし１５ｍＭ、５ないし１５ｍＭ、１ないし１４ｍＭ、２ないし１４ｍＭ、３ないし１４ｍＭ、４ないし１４ｍＭ、５ないし１４ｍＭ、１ないし１３ｍＭ、２ないし１３ｍＭ、３ないし１３ｍＭ、４ないし１３ｍＭ、５ないし１３ｍＭ、１ないし１２ｍＭ、２ないし１２ｍＭ、３ないし１２ｍＭ、４ないし１２ｍＭ、５ないし１２ｍＭ、１ないし１１ｍＭ、２ないし１１ｍＭ、３ないし１１ｍＭ、４ないし１１ｍＭ、５ないし１１ｍＭ、１ないし１０ｍＭ、２ないし１０ｍＭ、３ないし１０ｍＭ、４ないし１０ｍＭまたは５ないし１０ｍＭの濃度を有することができる。

【0082】

前記可溶化剤は、シクロデキストリンまたはこの誘導体を含むことができる。前記シクロデキストリンは、前記化学式１の化合物の溶解安定度を向上させ、凍結乾燥の際に安定的で、均一なケーキが形成されることに影響を及ぼすことができる。

【0083】

前記シクロデキストリン（ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）は、６～１２個のブドウ糖分子がアルファ‐１，４‐グリコシド結合をした環状のオリゴ糖であって、６個のブドウ糖分子が繋がったアルファ‐シクロデキストリン、７個のブドウ糖分子が繋がったベータ‐シクロデキストリン、及び８個のブドウ糖分子が繋がったガンマ‐シクロデキストリンなどがある。本発明で使われてもよいシクロデキストリンとしては、前記３種類の他にシクロデキストリン誘導体も全て含むことができる。

【0084】

【0085】

前記可溶化剤は、第１剤を基準にして１０ないし３０重量％含むことができる。具体的には、１０ないし３０重量％、１０．５ないし３０重量％、１１ないし３０重量％、１１．５ないし３０重量％、１２ないし３０重量％、１０ないし２９．５重量％、１０．５ないし２９．５重量％、１１ないし２９．５重量％、１１．５ないし２９．５重量％、１２ないし２９．５重量％、１０ないし２９重量％、１０．５ないし２９重量％、１１ないし２９重量％、１１．５ないし２９重量％、１２ないし２９重量％、１０ないし２８．５重量％、１０．５ないし２８．５重量％、１１ないし２８．５重量％、１１．５ないし２８．５重量％、１２ないし２８．５重量％、１０ないし２８重量％、１０．５ないし２８重量％、１１ないし２８重量％、１１．５ないし２８重量％または１２ないし２８重量％含むことができる。

【0086】

前記ｐＨ調節剤は、塩基性ｐＨ調節剤及び酸性ｐＨ調節剤を含むことができる。前記ｐＨ調節剤は前に説明したとおりである。

【0087】

前記第１剤は、粉末、乾燥粉末または凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌｅ）の形態であってもよい。前記第１剤は、長期間保存が可能で、注射剤への製剤化が容易である。また、副作用を起こすような添加剤が存在しないので、人体に使うのに全く害にならない。

【0088】

前記第２剤は、ｐＨが５ないし１２の再構成溶液を含むことができる。前記再構成溶液は、前に説明したとおりである。

【0089】

本発明の一実施例による注射用製剤は、第１剤及び第２剤を混合した再構成後溶液のｐＨが５．０ないし７．０であってもよい。前記再構成後、溶液のｐＨが５．０ないし７．０範囲を脱する場合、患者に注射用製剤を投与する時に痛みを感じることがあるため、注射用製剤として使うには不向きである。

【0090】

本発明の一実施例による注射用製剤は、第１剤及び第２剤を混合した再構成後溶液の浸透圧が３００ｍＯｓｍ／ｋｇないし４００ｍＯｓｍ／ｋｇであってもよい。前記再構成後、溶液の浸透圧が３００ｍＯｓｍ／ｋｇないし４００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲を脱する場合、患者に注射用製剤を投与する時に痛みを感じることがあるため、注射用製剤として使うには不向きである。

【0091】

本発明の一実施例による注射用製剤は、前記化学式１の化合物の含量を投与対象患者の状態、目的とする治療の度合いなどに応じて異にすることができる。

【0092】

前記注射用製剤は、前記化学式１の化合物の含量を前記第１剤及び前記第２剤を混合した再構成後溶液を基準にして１ないし２０ｍｇ／ｍｌ含むことができる。具体的に、前記化学式１の化合物の含量は、再構成後溶液を基準にして１ないし２０ｍｇ／ｍｌ、５ないし２０ｍｇ／ｍｌ、１０ないし２０ｍｇ／ｍｌ、１ないし１５ｍｇ／ｍｌ、５ないし１５ｍｇ／ｍｌ、１０ないし１５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌまたは２０ｍｇ／ｍｌであってもよく、これは１回分の用量で好ましい。

【0093】

前記化学式１の化合物の含量が１ｍｇ／ｍｌ未満の低濃度の場合、十分な治療効果を表すために、多い用量の注射液が投入されて患者の患部への投与時に難しさを引き起こすことがあって、２０ｍｇ／ｍｌ超過の高濃度の場合、溶媒の溶解時にＡＰＩが析出されたり患者の患部への投与時に痛みを引き起こすことがある。

【0094】

本発明の一実施例による注射用製剤は、前記化学式１の化合物を含む第１剤が第２剤と混合して前記化学式１の化合物が完全に溶解された透明な状態であってもよい。

【0095】

本発明の一実施例による注射用製剤は、患者に投与する直前に前記化学式１の化合物を含む第１剤を、前記再構成溶液を含む第２剤に再構成して、再構成後溶液を患者の患部に投与することで使われることができる。

【0096】

本発明の一実施例による注射用製剤は、患者に投与する直前に第１剤及び第２剤を混合して使用するので、抗酸化剤、防腐剤など保存のための賦形剤をさらに含まなくてもよいが、再構成溶液を含む第２剤の場合、２次汚染を防ぐための防腐剤などが含まれることができる。

【0097】

本発明は、本発明の注射用製剤を利用してカスパーゼ関連疾患を治療したり予防する方法を提供する。

【0098】

前記「治療」とは、発病症状を見せる対象に使われる時、疾病の進行を中断または遅延させることを意味し、前記「予防」とは、発病症状は見せないが、そのような危険性の高い対象に使われる時、発病の兆しを中断または遅延させることを意味する。

【0099】

本発明の「カスパーゼ関連疾患」とは、カスパーゼを阻害することで治療ないし予防することができる疾病であって、例えば、骨関節炎、関節リウマチ、退行性関節炎、破壊性骨障害、ウイルス性肝炎による肝疾患、急性肝炎、肝硬化、ウイルス性肝炎による脳損傷、人間突発性肝不全、敗血症、臓器移植拒絶反応、虚血性心疾患、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍などを挙げることができるが、上記疾患のみに限定されるものではない。

【0100】

本発明の注射用製剤は、治療または予防を要する個体に投与され、個体のカスパーゼ関連疾患を治療または予防することができる。

【0101】

本発明の用語「投与」または「投与すること」は、本発明の注射用製剤の投与量を哺乳動物、鳥類、魚類または両生類を含む脊椎動物または非脊椎動物に注射で投与する方法を指す。好ましい投与方法は、治療しようとする疾患の種類、疾患の部位及び疾患の軽重度に応じて血管注射、皮下注射、経皮注射、筋肉注射、脊髓注射、肌内注射など通常の注射方法から選択することができ、特に、骨関節と係る疾患である骨関節炎、関節リウマチ、退行性関節炎、または破壊性骨障害の場合、関節腔内注射を選択することができる。

【0102】

本発明の注射用製剤を利用して関節腔内に注射する場合、超音波などを利用した照影方法を利用して案内したり、局所痲酔剤が先行または組み合わせられて投与されることができる。

【0103】

本発明の用語「個体」は、ヒト、またはヒトではない哺乳動物、例えば、犬、猫、マウス、ラット、牛、羊、豚、山羊、ヒトではない類人猿、または鳥類を称する。一部の具体例において、前記個体はヒトである。

【0104】

本発明の注射用製剤は、第１剤と第２剤とを混合して混合溶液を作った後、３０分以内に個体に投与する。したがって、本発明の注射用製剤は単一患者への注入または投与のための単一投与のためのものである。

【0105】

また、本発明の注射用製剤には、さらに痛み止め、消炎剤、ステロイドなどの薬物と組み合わせて投与されることができる。具体的には、イブプロフェン、ナプロキセン、アスピリン、アセトアミノフェン、インドメタシン、経口または病変部位へのジクロフェナク、メロキシカム、セレコキシブ、ピロキシカム、エトドラク、ナブメトン、ルミラコキシブ、バルデコキシブ、エトリコキシブ、パレコキシブ、フェノプロフェン、オキサプロジン、メフェナム酸、ジフルニサル、フルルビプロフェン、ケトプロフェンから選択される非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）；プレドニゾン、メチルプレドニゾロンなどのコルチコイド系列薬剤、コデイン、ペンタニル、モルヒネ、メペリジンなどの麻薬類痛み止め、またはヒアルロン酸誘導体の注射剤などの薬物と組み合わせて投与されることができる。

【0106】

本発明は、本発明の注射用製剤を含むキットを提供する。本発明の一実施例において、前記キットは本発明の化学式１の化合物を含む第１剤、及び再構成溶液を含む第２剤を含む注射用製剤；前記製剤を投与するための一つ以上の注射器などの投与システム、前記第１剤及び第２剤を混合する方法、及び患者を治療するための説明などが記載されたキットの使用に関する説明書を含むことができる。

【0107】

本発明の一実施例において、前記キットはここに記述されたような製剤及び内容物が骨関節と係る疾患である骨関節炎、関節リウマチ、退行性関節炎または破壊性骨障害にかかった患者に投与されることが記載されたラベル（ｌａｂｅｌ）を含むことができる。ここで、患者に適する投与量を選択することは、患者の症状、年齢などを考慮して該当分野の通常の技術者の知識範囲内である。

【0108】

他に示さない限り、本明細書及び請求範囲に使われたすべての数字は、言及されても、言及されなくても、すべての場合に用語「約」によって修飾されるものとして理解しなければならない。また、本明細書及び特許請求範囲に使われた精密な数値は、本開示内容の追加的な実施様態を形成するものとして理解しなければならない。実施例に開示された数値の正確性を保障するために努力した。しかし、測定されたすべての数値は、内在的にそれぞれの測定技法で実測された標準偏差から生成された特定の誤差値を含むことができる。

【実施例】

【0109】

実施例及び比較例における各種評価は、次のように実施した。

【0110】

製造例
本発明において、活性薬理成分（ＡＰＩ）として使われる化学式１の化合物である（Ｒ）‐Ｎ‐（（２Ｓ，３Ｓ）‐２‐（フルオロメチル）‐２‐ヒドロキシ‐５‐オキソテトラヒドロフラン‐３‐イル）‐５‐イソプロピル‐３‐（イソキノリン‐１‐イル）‐４，５‐ジヒドロイソオキサゾール‐５‐カルボキサミド） [（Ｒ）‐Ｎ‐（（２Ｓ，３Ｓ）‐２‐（ｆｌｕｏｒｅｍｅｔｈｙｌ）‐２‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐５‐ｏｘｏｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ‐３‐ｙｌ）‐５‐ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ‐３‐（ｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ‐１‐ｙｌ）‐４，５‐ｄｉｈｙｄｒｏｉｓｏｏｘａｚｏｌ‐５‐ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ）（以下「ＡＰＩ」という）は、ＫＲ１０‐０７７４９９９にしたがって製造された。

【0111】

試験例１：溶媒の組成によるＡＰＩ溶解の有無、溶媒のｐＨ確認及びＡＰＩ混合溶液内のＡＰＩの安定性確認（実施例１ないし１６）
下記表１に記載されている組成でＡＰＩを溶解して濃度１０ｍｇ／ｍｌのＡＰＩ混合溶液を作るための溶媒を製造した。下記表１のように、０ないし１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（Ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ：ＰＢ）、２４ないし３６ｍＭの水酸化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍｈｙｄｒｏｘｉｄｅ、ＮａＯＨ）及び１０ないし３０％（ｗ／ｖ）のヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｂｅｔａｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ：ＨＰβＣＤ）を含む溶媒を製造した。

【0112】

リン酸ナトリウム緩衝液は、リン酸ナトリウム２塩基性７水和物（Ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉｂａｓｉｃｈｅｐｔａｈｙｄｒａｔｅ）とリン酸ナトリウム１塩基性１水和物（Ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｏｎｏｂａｓｉｃｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）とを混合してｐＨ７．４に製造した。ＨＰβＣＤは、モル当たり置換範囲（ｍｏｌａｒｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｒａｎｇｅ）は、０．８１～０．９９で、分子量は約１５００ｇ／ｍｏｌである非経口グレード（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｇｒａｄｅ）の試薬を使った。

【0113】

下記表１のように、実施例１ないし１６によって製造された溶媒１ｍｌに１０ｍｇのＡＰＩを入れて、約８００ｒｐｍで３０分間撹拌してＡＰＩ混合溶液を製造した。

【0114】

【表1】

【0115】

下記表２は、前記表１に記載されている組成の溶媒にＡＰＩを入れて混合したＡＰＩ混合溶液のｐＨ及び混合３０分後の前記ＡＰＩ混合溶液におけるＡＰＩ安定性（純度）を確認した結果である。

【0116】

化学式１のＡＰＩの活性型（Ａｃｔｉｖｅｆｏｒｍ）は水溶液で速く加水分解されて活性がない状態の不活性型（Ｉｎａｃｔｉｖｅｆｏｒｍ）に変わるので、ＡＰＩ混合溶液の製造３０分後のＡＰＩの安定性（純度またはＡＰＩ混合溶液内の活性型の含量）を確認するために、ＨＰＬＣを利用してピーク面積（％）を測定した。

【0117】

【表2】

【0118】

ＡＰＩが溶けない溶媒（実施例３、５及び６）、ＡＰＩの混合溶液のｐＨが６ないし８範囲を脱する溶媒（実施例１、７及び１２ないし１６）またはＡＰＩの混合溶液製造３０分後のＡＰＩの純度（ピーク面積％）が９４％未満になる溶媒（実施例１及び１０ないし１６）は、本発明のＡＰＩを溶かすに適しないことを確認した。したがって、実施例２、４、８及び９で製造された溶媒がＡＰＩを溶解するのに適した溶媒であることを確認した。

【0119】

実施例１ないし４において、ホスフェート緩衝液を含む溶媒（実施例２及び４）がｐＨの制御が容易でＡＰＩを溶解したりＡＰＩの混合溶液製造３０分後のＡＰＩの純度が９４％以上を維持するに好適な溶媒であることを確認した。

【0120】

ホスフェート緩衝液の濃度が１０ｍＭ以下で、ＮａＯＨの濃度が３０ないし３６ｍＭの場合（実施例６、７及び１１ないし１６）、ＡＰＩの混合溶液のｐＨが７．２以上であるため、ＮａＯＨ濃度を適切な水準に下げることが望ましい。これはＡＰＩの混合溶液のｐＨが高いほど化学式１のＡＰＩの活性型が水溶液で速く加水分解されて不活性型に変わるためＡＰＩの純度が低くなる問題がある。

【0121】

一方、ホスフェート緩衝液の濃度が１０ｍＭ以下で、ＮａＯＨが２４ｍＭで、ＨＰβＣＤの含量が１２．５ｗｔ％ないし１５ｗｔ％の場合（実施例８及び９）、ＡＰＩの混合溶液のｐＨが６ないし７の範囲で、ＡＰＩの純度も９４％以上に維持されたので、実施例８及び９で製造された溶媒がＡＰＩの混合溶液を製造するに適した溶媒であることを確認した。

【0122】

試験例２：酸性化された混合溶液製造及び酸性化された混合溶液でのＡＰＩ安定性確認（実施例１７ないし２２）
先に製造した実施例２、４、８及び９の溶媒を含むＡＰＩの混合溶液に酸（６ＮのＨＣｌ）を添加して、酸性化された混合溶液を製造した。

【0123】

前記酸性化された混合溶液の製造は、ＡＰＩの混合溶液のｐＨが高いほど化学式１のＡＰＩの活性型が水溶液で速く加水分解されて不活性型に変わることを防ぐためである。

【0124】

下記表３のように、前記実施例２、４、８及び９で製造された溶媒を含むＡＰＩの混合溶液に、酸性化溶液として６ＮのＨＣｌを利用して６０ないし１５０ｍＭのＨＣｌを投与した後、酸性化された混合溶液を製造した。

【0125】

【表3】

【0126】

下記表４は前記表３に記載されているＡＰＩの混合溶液に酸性化溶液を投与して製造された酸性化された混合溶液のｐＨ及び酸性化された混合溶液でのＡＰＩ析出有無及びＡＰＩ安定性（純度）を確認した結果である。

【0127】

【表4】

【0128】

前記表４の結果で、実施例１７ないし２２によって製造されたＡＰＩを含む酸性化された混合溶液はＡＰＩが析出されず、溶液内に溶けていることを確認した。

【0129】

実施例１７及び１８は、ＡＰＩを含む酸性化された混合溶液のｐＨが約６．０であり、酸性化された混合溶液の製造後に純度が急激に落ちて、酸性化された混合溶液の製造から１日後には、約６０％に減少した。これを通じて、ＡＰＩを含む酸性化された混合溶液のｐＨが約６．０である場合、ＡＰＩが安定的に存在しがたいことを確認した。

【0130】

実施例１９及び２０は、ＡＰＩを含む酸性化された混合溶液のｐＨが約２．０ないし２．７で、酸性化された溶液の製造から１日後、純度の変化がほとんどなく、安定した状態で維持された。ただ、酸性化された混合溶液のｐＨが低いほど純度の変化が少なくてＡＰＩがより安定していることを確認することができた。

【0131】

実施例２１及び２２は、ＡＰＩを含む酸性化された混合溶液のｐＨが約１．７で、酸性化された混合溶液の製造から１日後、純度の変化がほとんどなく、安定した状態で維持された。

【0132】

したがって、ＡＰＩを含む酸性化された溶液のｐＨが１．０ないし２．０である場合、ＡＰＩが安定的に存在することを確認した。

【0133】

試験例３：凍結乾燥剤形の製造（実施例２３ないし２５）
先に製造された実施例２０ないし２２の溶液を凍結乾燥した。前記凍結乾燥は下記表５に記載されたような条件で行った。すなわち、凍結乾燥条件は‐８０℃で３時間凍結した後、１０ないし２０Ｐａで１６時間または４０時間乾燥させた。

【0134】

【表5】

【0135】

前記実施例２３ないし２５で製造したＡＰＩ凍結乾燥剤形の性状は、白のケーキが均一に形成され、凍結乾燥がよくできたことを確認した。

【0136】

試験例４：再構成溶液の製造、再構成時間、再構成後のｐＨ及び浸透圧、再構成後の安定性確認（実施例２６ないし２９）
先に製造された実施例２３ないし２５の凍結乾燥剤形を再構成するために、下記表６のように再構成溶液を製造した。再構成溶媒の投与体積は、前記実施例２３ないし２５で凍結乾燥後に水が抜けた体積を計算して求めた値である。前記凍結乾燥剤形に再構成溶媒を投入した後、速く振って再構成溶液を製造した。

【0137】

【表6】

【0138】

下記表７は、実施例２６ないし２９によって製造された再構成溶液が再構成の際に透明な溶液になるまで要した時間、再構成後の溶液のｐＨ及び浸透圧、並びに再構成後の溶液の純度を測定した結果である。ここで、再構成後の溶液の純度はＵＰＬＣを通じて確認した

【0139】

【表7】

【0140】

前記表７の結果で、実施例２６ないし２９によって製造された再構成後の溶液のｐＨは６．４ないし６．９で、注射剤として使うには、いずれも適したｐＨであることを確認した。

【0141】

しかし、注射剤として使うための剤形の好ましい浸透圧範囲は３００～４００ｍＯｓｍ／ｋｇで、この範囲未満あるいはこの範囲を超えると、患者は痛みを感じることがある。したがって、このような基準を適用した時、再構成後の溶液の浸透圧がそれぞれ３０８ｍＯｓｍ／ｋｇ及び３６５ｍＯｓｍ／ｋｇである実施例２８及び２９が１０ｍｇ／ｍｌのＡＰＩを含む注射剤剤形として好ましいことを確認した。

【0142】

試験例５：溶媒の組成によるＡＰＩ溶解有無、溶媒のｐＨ確認及びＡＰＩ混合溶液内のＡＰＩの安定性確認（実施例３０ないし３４）
下記表８に記載されている組成でＡＰＩを溶解して濃度１５ｍｇ／ｍｌのＡＰＩ混合溶液を作るための溶媒を製造した。下記表８のように、５ないし１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（Ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ：ＰＢ）、３５ないし４０ｍＭの水酸化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍｈｙｄｒｏｘｉｄｅ、ＮａＯＨ）及び１７．５ないし２０．０％（ｗ／ｖ）のヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌｂｅｔａｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ：ＨＰβＣＤ）を含む溶媒を製造した。

【0143】

リン酸ナトリウム緩衝液は、リン酸ナトリウム２塩基性７水和物（Ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉｂａｓｉｃｈｅｐｔａｈｙｄｒａｔｅ）とリン酸ナトリウム１塩基酸１水和物（Ｓｏｄｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｍｏｎｏｂａｓｉｃｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）とを混合してｐＨ７．４に製造した。ＨＰβＣＤはモル当たり置換範囲（ｍｏｌａｒｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｒａｎｇｅ）は０．８１～０．９９で、分子量は約１５００ｇ／ｍｏｌである非経口グレード（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｇｒａｄｅ）の試薬を使った。

【0144】

下記表８のように実施例３０ないし３４によって製造された溶媒１ｍｌに１５ｍｇのＡＰＩを入れて、約８００ｒｐｍで３０分間撹拌してＡＰＩ混合溶液を製造した。

【0145】

【表8】

【0146】

下記表９は、前記表８に記載されている組成の溶媒にＡＰＩを入れて混合したＡＰＩ混合溶液のｐＨ及び混合３０分後の前記ＡＰＩ混合溶液でのＡＰＩ安定性（純度）を確認した結果である。

【0147】

化学式１のＡＰＩの活性型（Ａｃｔｉｖｅｆｏｒｍ）は水溶液で速く加水分解されて活性のない状態である不活性型（Ｉｎａｃｔｉｖｅｆｏｒｍ）に変わるので、ＡＰＩ混合溶液の製造３０分後のＡＰＩの安定性（純度またはＡＰＩ混合溶液内の活性型の含量）を確認するために、ＨＰＬＣを利用してピーク面積（％）を測定した。

【0148】

【表9】

【0149】

前記表９の結果で、実施例３０ないし３４によって製造された溶媒はＡＰＩを溶解するのに適した溶媒であることを確認した。

【0150】

ホスフェート緩衝液の濃度が１０ｍＭ以下で、ＮａＯＨ濃度が高いほど（実施例３１及び３４）、ＡＰＩの混合溶液のｐＨが高くなることを確認した。ＮａＯＨ濃度を適切な水準に下げることが好ましい。これは、ＡＰＩ混合溶液のｐＨが高いほど化学式１のＡＰＩの活性型が水溶液で速く加水分解されて不活性型に変わるので、ＡＰＩの純度が低くなる問題がある。

【0151】

試験例６：酸性化された混合溶液の製造及び酸性化された混合溶液でのＡＰＩ安定性確認（実施例３５ないし３９）
先に製造した実施例３０ないし３４の溶媒を含むＡＰＩの混合溶液に酸（６ＮＨＣｌ）を添加して酸性化された混合溶液を製造した。

【0152】

【0153】

下記表１０のように、前記実施例３０ないし３４で製造された溶媒を含むＡＰＩの混合溶液に酸性化溶液として６ＮＨＣｌを利用して５０ないし６０ｍＭＨＣｌを投与した後、酸性化された混合溶液を製造した。

【0154】

【表10】

【0155】

下記表１１は、前記表１０に記載されているＡＰＩの混合溶液に酸性化溶液を投与して製造された酸性化された混合溶液のｐＨ及び酸性化された混合溶液でのＡＰＩ析出有無及びＡＰＩ安定性（純度）を確認した結果である。

【0156】

【表11】

【0157】

前記表１１の結果で、実施例３５ないし３９によって製造されたＡＰＩを含む酸性化された混合溶液は、ＡＰＩが析出されず、溶液内に溶けていることを確認した。実施例３５及び３６は、ＡＰＩを含む酸性化された混合溶液のｐＨが約１．８ないし２．０で、酸性化された混合溶液の製造から１日後、純度の変化がほとんどなく、安定した状態で維持された。

【0158】

実施例３７ないし３９は、ＡＰＩを含む酸性化された溶液のｐＨが約２．０ないし２．２で、ｐＨが低い方であったが、酸性化された溶液製造から１日後に純度の変化が少し発生した。

【0159】

したがって、ＡＰＩを含む酸性化された溶液のｐＨが２．０以下である場合、ＡＰＩが安定的に存在することを確認した。

【0160】

試験例７：凍結乾燥剤形の製造（実施例４０ないし４４）
先に製造された実施例３５ないし３９の溶液を凍結乾燥した。前記凍結乾燥は下記表１２に記載されたような条件で行った。すなわち、凍結乾燥の条件は、‐８０℃で３時間凍結した後、１０ないし２０Ｐａで４０時間乾燥した。

【0161】

【表12】

【0162】

実施例４０ないし４４で製造したＡＰＩ凍結乾燥剤形の性状は、不透明な白のケーキが均一に形成され、凍結乾燥がよくできたことを確認した。

【0163】

試験例８：再構成溶液の製造、再構成時間、再構成後の溶液のｐＨ及び浸透圧、再構成後の安定性確認（実施例４５ないし４９）
先に製造された実施例４０ないし４４の凍結乾燥剤形を再構成するために、下記表１３のように再構成溶液を製造した。再構成溶媒の投与体積は前記実施例40ないし44で凍結乾燥した後、水が抜けた体積を、計算を通じて求めた値である。前記凍結乾燥剤形に再構成溶媒を投入した後、速く振って再構成溶液を製造した。

【0164】

【表13】

【0165】

下記表１４は、実施例４５ないし４９によって製造された再構成溶液が再構成の際に透明な溶液になるまで要しれた時間、再構成後の溶液のｐＨ及び浸透圧、及び再構成後の溶液の純度を測定した結果である。ここで、再構成後の溶液の純度は、ＵＰＬＣを通じて確認した。

【0166】

【表14】

【0167】

前記表１４の結果で、実施例４５ないし４９によって製造された再構成後の溶液のｐＨは約５．８ないし７．０で、注射剤として使うにいずれも適したｐＨであることを確認した。

【0168】

しかし、注射剤として使うための剤形の好ましい浸透圧の範囲は３００～４００ｍＯｓｍ／ｋｇで、この範囲未満あるいはこの範囲を超えると、患者は痛みを感じることがある。したがって、このような基準を適用した時、再構成後の溶液の浸透圧がそれぞれ３７２ｍＯｓｍ／ｋｇ及び３６７ｍＯｓｍ／ｋｇである実施例４７及び４８が１５ｍｇ／ｍｌのＡＰＩを含む注射剤剤形として好ましいことを確認した。

【0169】

実施例４９の場合、再構成直後の純度が約９３％で、再構成３０分後の純度が約９２％であって、ＡＰＩの純度自体が低すぎて適しないことを確認した。

【0170】

試験例９：撹拌装備によるＡＰＩ混合溶液の製造
ＡＰＩ混合溶液の製造において、撹拌装備によるＡＰＩ混合溶液内のＡＰＩの純度変化を確認した。

【0171】

下記表１５のように、ＡＰＩの濃度及び溶媒の組成によって製造された混合溶液を互いに異なる撹拌装備であるホモジナイザー（Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）及びマグネチックスターラー（Ｍａｇｎｅｔｉｃｓｔｉｒｒｅｒ）を利用してＡＰＩ混合溶液を製造した。

【0172】

【表15】

【0173】

撹拌装備でホモジナイザーを利用した実施例５０において、ＡＰＩの湿潤性（ｗｅｔｔａｂｉｌｉｔｙ）はよくなかったが、溶媒上に浮遊せず、均一にＡＰＩと溶媒がよくまじることを確認した。一方、撹拌装備でマグネチックスターラーを利用した実施例５１において、ＡＰＩが溶媒上にすぐ溶解されずに浮遊して、溶かすのに時間がさらにかかった。

【0174】

図１は、撹拌時間に対するＡＰＩ混合溶液内のＡＰＩ純度を測定した結果である。図１と同様に、ホモジナイザーを利用した実施例５０でＡＰＩの純度は９６．４％であって、マグネチックスターラーを利用した実施例５１でＡＰＩの純度は９６．１％で、撹拌装備による純度変化に影響があるとは見がたい。ただ、溶解時間によって純度が大きく依存することを確認することができた。

【0175】

したがって、速くて均一に混合溶液を製造することができるホモジナイザーが撹拌装備として適することを確認した。

【0176】

試験例１０：凍結乾燥剤形製造の際のＡＰＩの純度変化
下記表１６に記載されたように、ＡＰＩ凍結乾燥最終剤形を製造した。

【0177】

【表16】