ホーム > 特許ランキング > 国立大学法人大阪大学
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ 国立大学法人大阪大学の特許一覧 ▶ 公立大学法人大阪の特許一覧 ▶ 株式会社バイオマトリックス研究所の特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023053786
(43)【公開日】2023-04-13
(54)【発明の名称】Ｂ型肝炎ウイルスの感染予防抗体の開発
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20230406BHJP
C07K 16/08 20060101ALI20230406BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20230406BHJP
A61P 31/20 20060101ALI20230406BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/08 ZNA
A61K39/395 N
A61P31/20
【審査請求】未請求
【請求項の数】13
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021163028
(22)【出願日】2021-10-01
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）令和３年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、「感染症実用化研究事業 肝炎等克服実用化研究事業 Ｂ型肝炎創薬実用化等研究事業」「Ｂ型肝炎ウイルスの感染複製増殖機構解明による創薬基盤形成に関する研究」委託研究開発、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(71)【出願人】
【識別番号】504176911
【氏名又は名称】国立大学法人大阪大学
(71)【出願人】
【識別番号】519135633
【氏名又は名称】公立大学法人大阪
(71)【出願人】
【識別番号】503442709
【氏名又は名称】株式会社バイオマトリックス研究所
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】岡本 徹
(72)【発明者】
【氏名】張 赫
(72)【発明者】
【氏名】松浦 善治
(72)【発明者】
【氏名】立花 太郎
(72)【発明者】
【氏名】伊原 寛一郎
(72)【発明者】
【氏名】梶田 忠宏
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA14
4C085BB11
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA02
4H045CA40
4H045DA75
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
【課題】新規のＨＢｓ抗原結合抗体を提供すること。
【解決手段】
一つの局面において、本開示は、本明細書に記載されるＣＤＲ配列を有するＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を提供する。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体はヒト化されている。一つの実施形態において、本開示のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置または予防するための組成物が提供される。一つの実施形態において、本開示のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、移植用臓器を処置するための組成物が提供される。本開示のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む検出剤も提供される。
【選択図】なし
【解決手段】
一つの局面において、本開示は、本明細書に記載されるＣＤＲ配列を有するＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を提供する。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体はヒト化されている。一つの実施形態において、本開示のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置または予防するための組成物が提供される。一つの実施形態において、本開示のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、移植用臓器を処置するための組成物が提供される。本開示のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む検出剤も提供される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖、および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖を含む、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片であって、
（１）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１～５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６～１０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号１１～１５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１６～２０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号２１～２５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号２６～３０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、あるいは
（２）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号３１～３５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号３６～４０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号４１～４５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号４６～５０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号５１～５５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号５６～６０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、
（３）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号６１～６５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６６～７０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号７１～７５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号７６～８０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号８１～８５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号８６～９０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、
ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（１）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１～５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６～１０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号１１～１５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１６～２０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号２１～２５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号２６～３０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、あるいは
（２）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号３１～３５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号３６～４０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号４１～４５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号４６～５０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号５１～５５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号５６～６０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、
（３）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号６１～６５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６６～７０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号７１～７５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号７６～８０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号８１～８５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号８６～９０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、
ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項2】
前記重鎖ＣＤＲ１～３および軽鎖ＣＤＲ１～３アミノ酸配列がそれぞれ、
配列番号１、６、１１、１６、２１および２６、
配列番号２、７、１２、１７、２２および２７、
配列番号３、８、１３、１８、２３および２８、
配列番号４、９、１４、１９、２４および２９、
配列番号３１、３６、４１、４６、５１および５６、
配列番号３２、３７、４２、４７、５２および５７、
配列番号３３、３８、４３、４８、５３および５８、
配列番号３４、３９、４４、４９、５４および５９
配列番号６１、６６、７１、７６、８１および８６、
配列番号６２、６７、７２、７７、８２および８７、
配列番号６３、６８、７３、７８、８３および８８、または
配列番号６４、６９、７４、７９、８４および８９
であるか、または前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含む、
請求項１に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
配列番号１、６、１１、１６、２１および２６、
配列番号２、７、１２、１７、２２および２７、
配列番号３、８、１３、１８、２３および２８、
配列番号４、９、１４、１９、２４および２９、
配列番号３１、３６、４１、４６、５１および５６、
配列番号３２、３７、４２、４７、５２および５７、
配列番号３３、３８、４３、４８、５３および５８、
配列番号３４、３９、４４、４９、５４および５９
配列番号６１、６６、７１、７６、８１および８６、
配列番号６２、６７、７２、７７、８２および８７、
配列番号６３、６８、７３、７８、８３および８８、または
配列番号６４、６９、７４、７９、８４および８９
であるか、または前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含む、
請求項１に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項3】
前記アミノ酸変異が、独立して、アミノ酸置換、アミノ酸欠失またはアミノ酸挿入である、請求項１または２に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項4】
前記アミノ酸変異が、独立して、保存的アミノ酸置換である、請求項１または２に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項5】
（１）配列番号９１またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（２）配列番号９３またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
（３）配列番号９５またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（２）配列番号９３またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
（３）配列番号９５またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項6】
Ｋ１４１Ｅ変異ＨＢｓ、Ｇ１４５Ｒ変異ＨＢｓおよびＩ１５２Ａ変異ＨＢｓの少なくとも１つに結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項7】
Ｂ型肝炎ウイルスのジェノタイプＡ、Ｂ、ＣまたはＤのＨＢｓの少なくとも１つに結合する、請求項１～６のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項8】
バイオレイヤー干渉法でＨＢｓとの親和性を測定した場合のＫＤ値が１０ｎＭ未満である、請求項１～７のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項9】
ヒト化されている、請求項１～８のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置または予防するための組成物。
【請求項11】
移植用臓器を処置するための、請求項１０に記載の組成物。
【請求項12】
請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、Ｂ型肝炎ウイルス検出剤。
【請求項13】
請求項１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、Ｂ型肝炎ウイルスのＨＢｓ抗原に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。特に、本開示は、これらの抗体またはその抗原結合断片を使用したＢ型肝炎ウイルスの抑制および検出を提供する。
【背景技術】
【0002】
Ｂ型肝炎ウイルスの感染は、Ｂ型肝炎およびその後の肝硬変、肝臓がんを引き起こすことが知られる。Ｂ型肝炎ウイルスは血液を介してヒトからヒトへ感染し得る。特許文献１に開示されるワクチンなど、Ｂ型肝炎の予防および治療のための薬剤が開発されている。
【0003】
肝移植など、Ｂ型肝炎ウイルスの感染を直接的に阻害する必要があるケースがあり、ヒト血漿由来のＢ型肝炎兔疫グロブリン（ＨＢＩＧ）製剤が一般に使用されている。
【0004】
既存のＨＢＩＧは、Ｂ型肝炎に対する抗体を保有しているヒトの血液から抗体を分離し、ウイルス不活化技術を用いて潜在的な汚染源を除去して製造される。しかし、原料である血漿の確保が難しく、ＨＢＩＧの供給には問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】国際公開第２０１９／１２３２５２号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者らは、Ｂ型肝炎ウイルスのＨＢｓ抗原に対する新規の抗体を開発した。作製した抗体には、ＨＢｓ抗原に対して高い結合性を有する抗体、およびエスケープ変異を有するＨＢｓ抗原に対しても結合性を有する抗体が含まれていた。これに基づき、本開示は、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を提供し、またこれを使用したＢ型肝炎ウイルスの抑制および検出も提供する。
【0007】
したがって、本発明は以下を提供する。
（項目１）
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖、および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖を含む、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片であって、
（１）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１～５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６～１０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号１１～１５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１６～２０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号２１～２５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号２６～３０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、あるいは
（２）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号３１～３５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号３６～４０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号４１～４５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号４６～５０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号５１～５５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号５６～６０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、
（３）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号６１～６５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６６～７０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号７１～７５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号７６～８０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号８１～８５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号８６～９０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、
ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目２）
前記重鎖ＣＤＲ１～３および軽鎖ＣＤＲ１～３アミノ酸配列がそれぞれ、
配列番号１、６、１１、１６、２１および２６、
配列番号２、７、１２、１７、２２および２７、
配列番号３、８、１３、１８、２３および２８、
配列番号４、９、１４、１９、２４および２９、
配列番号３１、３６、４１、４６、５１および５６、
配列番号３２、３７、４２、４７、５２および５７、
配列番号３３、３８、４３、４８、５３および５８、
配列番号３４、３９、４４、４９、５４および５９
配列番号６１、６６、７１、７６、８１および８６、
配列番号６２、６７、７２、７７、８２および８７、
配列番号６３、６８、７３、７８、８３および８８、または
配列番号６４、６９、７４、７９、８４および８９
であるか、または前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含む、
項目１に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目３）
前記アミノ酸変異が、独立して、アミノ酸置換、アミノ酸欠失またはアミノ酸挿入である、項目１または２に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目４）
前記アミノ酸変異が、独立して、保存的アミノ酸置換である、項目１または２に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目５）
（１）配列番号９１またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（２）配列番号９３またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
（３）配列番号９５またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を有する、項目１～４のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目６）
Ｋ１４１Ｅ変異ＨＢｓ、Ｇ１４５Ｒ変異ＨＢｓおよびＩ１５２Ａ変異ＨＢｓの少なくとも１つに結合する、項目１～５のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目７）
Ｂ型肝炎ウイルスのジェノタイプＡ、Ｂ、ＣまたはＤのＨＢｓの少なくとも１つに結合する、項目１～６のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目８）
バイオレイヤー干渉法でＨＢｓとの親和性を測定した場合のＫＤ値が１０ｎＭ未満である、項目１～７のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目９）
ヒト化されている、項目１～８のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目１０）
項目１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置または予防するための組成物。
（項目１１）
移植用臓器を処置するための、項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
項目１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、Ｂ型肝炎ウイルス検出剤。
（項目１３）
項目１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸。
（項目１）
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖、および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖を含む、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片であって、
（１）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１～５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６～１０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号１１～１５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１６～２０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号２１～２５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号２６～３０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、あるいは
（２）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号３１～３５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号３６～４０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号４１～４５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号４６～５０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号５１～５５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号５６～６０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、
（３）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号６１～６５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６６～７０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号７１～７５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号７６～８０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号８１～８５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号８６～９０のいずれかを含む、または
前記重鎖および軽鎖が、前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含むアミノ酸配列を有する、
ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目２）
前記重鎖ＣＤＲ１～３および軽鎖ＣＤＲ１～３アミノ酸配列がそれぞれ、
配列番号１、６、１１、１６、２１および２６、
配列番号２、７、１２、１７、２２および２７、
配列番号３、８、１３、１８、２３および２８、
配列番号４、９、１４、１９、２４および２９、
配列番号３１、３６、４１、４６、５１および５６、
配列番号３２、３７、４２、４７、５２および５７、
配列番号３３、３８、４３、４８、５３および５８、
配列番号３４、３９、４４、４９、５４および５９
配列番号６１、６６、７１、７６、８１および８６、
配列番号６２、６７、７２、７７、８２および８７、
配列番号６３、６８、７３、７８、８３および８８、または
配列番号６４、６９、７４、７９、８４および８９
であるか、または前記６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１～６個のアミノ酸変異を含む、
項目１に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目３）
前記アミノ酸変異が、独立して、アミノ酸置換、アミノ酸欠失またはアミノ酸挿入である、項目１または２に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目４）
前記アミノ酸変異が、独立して、保存的アミノ酸置換である、項目１または２に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目５）
（１）配列番号９１またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（２）配列番号９３またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
（３）配列番号９５またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６またはこれと少なくとも８０％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を有する、項目１～４のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目６）
Ｋ１４１Ｅ変異ＨＢｓ、Ｇ１４５Ｒ変異ＨＢｓおよびＩ１５２Ａ変異ＨＢｓの少なくとも１つに結合する、項目１～５のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目７）
Ｂ型肝炎ウイルスのジェノタイプＡ、Ｂ、ＣまたはＤのＨＢｓの少なくとも１つに結合する、項目１～６のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目８）
バイオレイヤー干渉法でＨＢｓとの親和性を測定した場合のＫＤ値が１０ｎＭ未満である、項目１～７のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目９）
ヒト化されている、項目１～８のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片。
（項目１０）
項目１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置または予防するための組成物。
（項目１１）
移植用臓器を処置するための、項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
項目１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む、Ｂ型肝炎ウイルス検出剤。
（項目１３）
項目１～９のいずれか一項に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸。
【0008】
本発明において、上記の１つまたは複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。本発明のなおさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。
【発明の効果】
【0009】
本開示は、新規のＨＢｓ抗原結合抗体を提供する。この新規抗体は、Ｂ型肝炎ウイルスの抑制に有用であり、既存のＨＢＩＧを置き換え得る。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】ＨＢＶ感染細胞を各モノクローナル抗体クローンまたはＰｒｅＳ１ペプチドで処置した場合のＨＢＶ ＲＮＡ量の比較を示す。横軸は、各処理の条件を示す。ＮＴＣは薬剤添加なしである。縦軸は、薬剤添加なしの場合と比較した各薬剤処置の場合のＨＢＶ ＲＮＡ量を示す。
【図2】ＨＢＶ感染細胞を種々の濃度の各モノクローナル抗体クローンまたはＨＢＩＧで処置した場合のＨＢＶ ＲＮＡ量の変化を示す。各グラフは、それぞれ、異なるモノクローナル抗体クローンまたはＨＢＩＧの結果を示す。各グラフにおいて、横軸は添加した抗体濃度を（ｎｇ／ｍＬ）示し、縦軸は薬剤添加なしの場合と比較した各濃度における処置の場合のＨＢＶ ＲＮＡ量を示す。各グラフにおいて計算したＩＣ５０の値も示す。
【図3】Ｏｃｔｅｔシステムを用いて種々の濃度の各モノクローナル抗体クローンとＨＢｓ抗原との結合性を試験した結果を示す。各グラフは、それぞれ、異なるモノクローナル抗体クローンの結果を示す。
【図4】所望のＨＢＶ由来エンベロープを有するＤ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）粒子を使用した抗体による感染性抑制試験の概略を示す。
【図5】ジェノタイプＡ、Ｂ、ＣまたはＤのＨＢＶエンベロープを有するＨＤＶの感染におけるモノクローナル抗体クローンＨＢ３５１およびＨＢ１１７０の効果を示す。横軸はそれぞれの処理条件を示し、縦軸は薬剤添加なしの場合と比較したＨＢＶ ＲＮＡ量を示す。
【図6】上は実施例５の実験の概略を示す。下は実施例５の実験の結果を示す。左のグラフにおいて、縦軸は血清中のＨＢＶ ＤＮＡ量を示し、横軸は採血日を示す。右のグラフにおいて、縦軸は血清中のＨＢｓ抗原量を示し、横軸は採血日を示す。
【図7】ＨＢｓ抗原結合抗体により種々のアラニン置換ＨＢｓ抗原の認識能を調べた画像である。左から順に、Ｃ１４７Ａ、Ｔ１４８Ａ、Ｃ１４９Ａ、Ｉ１５０Ａ、Ｐ１５１Ａ、Ｉ１４２Ａの変異を有するＨＢｓ抗原を示す。上から順に、ＨＢ３５１クローン、ＨＢ１１７０クローン、ＨＢｓ抗原結合抗体ミックスを示す。
【図8】エスケープ変異Ｇ１４５Ｒを含むＨＢｓ抗原のＨＢＶエンベロープを有するＨＤＶの感染における各クローンの効果を示す。横軸はそれぞれの処理条件を示し、縦軸は薬剤添加なしの場合と比較したＨＢＶ ＲＮＡ量を示す。
【図9】左欄は、Ｏｃｔｅｔシステムを用いて種々の濃度の各ヒト化モノクローナル抗体クローンとＨＢｓ抗原との結合性を試験した結果を示す。右欄は、ＨＢＶ感染細胞を種々の濃度の各ヒト化モノクローナル抗体クローンで処置した場合のＨＢＶ ＲＮＡ量の変化を計算したＩＣ５０の値とともに示し、横軸は添加した抗体濃度を（ｎｇ／ｍＬ）示し、縦軸は薬剤添加なしの場合と比較した各濃度における処置の場合のＨＢＶ ＲＮＡ量を示す。各グラフは、ヒト化ＨＢ３５１またはヒト化ＨＢ１１７０の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0011】
以下、本開示を最良の形態を示しながら説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本開示の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【0012】
以下に本明細書において特に使用される用語の定義および／または基本的技術内容を適宜説明する。
【0013】
本明細書においてウイルスの「抑制」は、ウイルスの細胞への感染の低下、ウイルスの増殖速度の低下、ウイルスの減少および／またはウイルスの不活化をもたらすことを意味する。ウイルスの抑制は、細胞中または試料中のウイルスタンパク質または核酸の量の低減によって検出され得る。
【0014】
本明細書において、「Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）」とは、ヘパドナウイルス科オルトヘパドナウイルス属に属するＤＮＡウイルスを指す。ＨＢＶのジェノタイプとして、ジェノタイプＡ（Ａａ／１（Ａｓｉａｎ／Ａｆｒｉｃａｎ ｔｙｐｅ）、Ａｅ／２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｔｙｐｅ）、Ａｃ／３（Ｃａｍｅｒｏｏｎ）を含む）、ジェノタイプＢ（Ｂｊ／１（Ｊａｐａｎｅａｓｅ ｔｙｐｅ）、Ｂａ／２（Ａｓｉａｎ ｔｙｐｅ）、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５を含む）、ジェノタイプＣ（Ｃｅ／１（Ｅａｓｔ Ａｓｉａｎ ｔｙｐｅ）、Ｃｓ／２（Ｓｏｕｔｈ Ｅａｓｔ ｔｙｐｅ）、Ｃ３、Ｃ４を含む）、ジェノタイプＤ（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５を含む）、ジェノタイプＥ、ジェノタイプＦ（Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４を含む）、ジェノタイプＧ、ジェノタイプＨ、ジェノタイプＪなどが知られる。
【0015】
本明細書において、「ＨＢｓ」または「ＨＢｓ抗原」とは、Ｂ型肝炎ウイルスの表面タンパク質全般を指す。Ｂ型肝炎ウイルスの表面タンパク質としては、ＰｒｅＳ１領域＋ＰｒｅＳ２領域＋ＨＢｓ領域を有するＬタンパク質、ＰｒｅＳ２領域＋ＨＢｓ領域を有するＭタンパク質およびＨＢｓ領域を有するＳタンパク質が挙げられるが、特に断りがない限り、ＨＢｓはいずれのタンパク質も指し得る。例えば、ＵｎｉＰｒｏｔのデータベースのエントリー名「Ａ０Ａ６７９ＤＮＹ４＿ＨＢＶ」のジェノタイプＡのＨＢＶのＬタンパク質のアミノ酸配列は以下である。２２６アミノ酸の下線部分はＳタンパク質に相当し、太字部分（Ｓタンパク質２２６アミノ酸中の１２４～１４７位）は「ａ」決定基と呼ばれる。
【化1】
【0016】
本明細書において、ＨＢｓ抗原結合抗体およびＨＢｓ結合性などの表現において、特に断りがない限り、ＨＢｓに属する任意の種類のタンパク質（変異体を含む）の任意の位置または領域（エピトープ）が結合の対象であり得る。
【0017】
本明細書において、特に断らない限り、ある分子（例えば、タンパク質、核酸）についての言及は、その分子の生物学的機能と同様の機能（同じ程度でなくてもよい）を発揮するその分子のバリアント（例えば、アミノ酸配列に修飾を有するバリアント）についての言及でもあることが理解される。例えば、ジェノタイプＡのＨＢＶのＬタンパク質は、配列番号１０７で表されるアミノ酸配列を有するタンパク質だけでなく、このタンパク質と標識分子（蛍光標識など）とのコンジュゲート、内因性のＬタンパク質と置き換えてもＡ型のＨＢＶが宿主において増殖することができるバリアントなどが含まれ得る。このようなバリアントには、元の分子の断片、同一サイズの元の分子のアミノ酸配列または核酸配列にわたり、または当該分野で公知のコンピュータ相同性プログラムによってアラインメントを行ってアラインされる元の分子の配列と比較した際、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％同一である分子が含まれ得る。バリアントには、改変されたアミノ酸（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化またはリン酸化による改変）を有する分子が含まれ得る。
【0018】
本明細書において「アミノ酸」とは、当該技術分野における通常の意味で使用され、カルボキシル基およびアミノ基を一つの分子内に有する化合物を指す。代表的には、アミノ酸は、αアミノ酸であるが、本明細書では、βアミノ酸およびγアミノ酸などのカルボキシル基とアミノ基との距離がより離れたアミノ酸であってもよい。さらに、本明細書において、特段示さなければ、アミン酸は、Ｌ体の光学異性体を示し、Ｄ体である場合には、最初にＤ（もしくは、ｄ）を付す（例えば、Ｄ－Ａｌａ（もしくは、ｄ－Ａｌａ））か、または小文字のアルファベット（例えば、ａ）で示す。以下にアミノ酸の代表的な例を示すが、その他のアミノ酸も本明細書において企図される。
【表1】
【0019】
本明細書において「対応する位置」のアミノ酸またはヌクレオチドとは、あるポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子において、比較の基準となるポリペプチドまたはポリヌクレオチドにおける所定の位置のアミノ酸またはヌクレオチドと同様の作用を有するか、または有することが予測されるアミノ酸またはヌクレオチドをいう。例えば、当業者は、元の分子とそのバリアントとの間でアライメントを行い、適当な閾値を設けて対応する位置を特定することができる。例えば、１つのアミノ酸の挿入は、挿入箇所より後ろのアミノ酸残基の対応する位置をそれぞれ１だけ増加させ得る。
【0020】
特定の位置にあるアミノ酸を表現するとき、特定の位置を表す数字とアミノ酸の１文字コードまたは３文字コードを併記した表現が適宜使用され得る。例えば、ＲＩＤＰＡＮＧＤＴＫＹＤＰＮＦＱＧ（配列番号６）におけるアラニンは、５位、５番目に存在し、配列番号６における５Ａ、５Ａｌａなどと表され得る。参照する配列番号が異なる場合、同じアミノ酸は異なる位置で表され得る。
【0021】
ポリペプチドのアミノ酸配列中のアミノ酸の改変のためには、部位特異的変異誘発法（Ｋｕｎｋｅｌら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ （１９８５） ８２， ４８８－４９２））やＯｖｅｒｌａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ＰＣＲ等の公知の方法が適宜採用され得る。また、天然のアミノ酸以外のアミノ酸に置換するアミノ酸の改変方法も採用され得る（Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｂｉｏｍｏｌ． Ｓｔｒｕｃｔ． （２００６） ３５， ２２５－２４９、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． （２００３） １００ （１１）， ６３５３－６３５７）。例えば、終止コドンの１つであるＵＡＧコドン（アンバーコドン）の相補的アンバーサプレッサーｔＲＮＡに非天然アミノ酸が結合されたｔＲＮＡが含まれる無細胞翻訳系システム（Ｃｌｏｖｅｒ Ｄｉｒｅｃｔ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ））等が好適に用いられる。
【0022】
本明細書においてアミノ酸の「変異」または「改変」とは、アミノ酸の挿入、置換または欠失を指す。アミノ酸の１つの変異または改変は、１つのアミノ酸の挿入、１つのアミノ酸の置換、または１つのアミノ酸の欠失を指す。アミノ酸配列の末端へのアミノ酸付加もアミノ酸挿入に含まれる。
【0023】
本明細書において、アミノ酸の置換を表す表現として、特定の位置を表す数字の前後に置換前と置換後のアミノ酸の１文字コードまたは３文字コードを併記した表現が適宜使用され得る。例えば、ＲＩＤＰＡＮＧＤＴＫＹＤＰＮＦＱＧ（配列番号６）を参照して用いられるＧ６ＶまたはＧｌｙ６Ｖａｌという置換は、６位のグリシンのバリンへの置換を表す。
【0024】
本明細書において「保存的アミノ酸置換」とは、ペプチドにおけるアミノ酸を別の性質の類似したアミノ酸に置き換えることを指し、ペプチドの性質は保存的置換の前後で類似であることが予測され得る。具体的な保存的アミノ酸置換の例は、本明細書の別の箇所に提供される。
【0025】
本明細書において、「抗体」は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、および多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含む、種々の抗体構造を包含する。
【0026】
本明細書において、「ヒト化抗体」とは、ヒト以外の生物種において作製された抗体のＣＤＲ領域をヒトの抗体に組み込んだ構造を有する抗体を指す。また、「キメラ抗体」とは、ヒト以外の生物種において作製された抗体の可変領域をヒトの抗体に組み込んだ構造を有する抗体を指す。
【0027】
本明細書において、「抗原結合断片」は、目的の抗原に結合する能力を有する抗体の部分構造を指し、典型的には、抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を少なくとも含む。抗原結合断片として、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディおよび単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）が挙げられる。
【0028】
本明細書において、「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、通常、それぞれ４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ． Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ６ｔｈ ｅｄ．， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．， ｐａｇｅ ９１ （２００７）参照）。
【0029】
本明細書において、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体の可変ドメイン中の特に抗原結合性に寄与する領域を指す。通常、抗体は６つのＣＤＲを含む：ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。ＣＤＲ配列の決定法は複数種類存在し、Ｋａｂａｔナンバリングシステム、ＩＭＧＴナンバリングシステム、ＰａｒａｔｏｍｅナンバリングシステムおよびＣｈｏｔｈｉａナンバリングシステムなどがある（例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（Ｋａｂａｔナンバリングシステム）、Ｋｕｎｉｋ、Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ａｎｄ Ｏｆｒａｎ、２０１２、「Ｐａｒａｔｏｍｅ：ａｎ ｏｎｌｉｎｅ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ‘ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、４０：Ｗ５２１－Ｗ５２４（Ｐａｒａｔｏｍｅナンバリングシステム）、Ｌｅｆｒａｎｃら、２００３、Ｄｅｖ Ｃｏｍｐａｒａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７（ＩＭＧＴナンバリングシステム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、１９９７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８（Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングシステム）を参照のこと）。
【0030】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、可変ドメイン中の相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の領域を指す。可変ドメインのＦＲは、通常４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４からなる。ＣＤＲおよびＦＲの配列は、通常次の順序でＶＨ（またはＶＬ）に現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。
【0031】
本明細書において、「定常領域」または「定常ドメイン」は、抗体の可変領域以外の部分を指す。例えば、ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、Ｎ末端からＣ末端に向かって、各重鎖は、可変領域（ＶＨ）、ならびにＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域（ＣＨ）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端に向かって、各軽鎖は、可変領域（ＶＬ）、および定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。天然型抗体の軽鎖には、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプの定常ドメインが知られる。
【0032】
本明細書において、「Ｆｃ領域」は、抗体の定常ドメインのＣＨ３、ＣＨ２、およびヒンジ領域の少なくとも一部分を含む領域を指す。場合によっては、Ｆｃ領域には、いくつかの抗体クラスに存在するＣＨ４ドメインが含まれ得る。Ｆｃ領域は、抗体の定常ドメインのヒンジ領域全体を含むことができる。Ｆｃ領域は、Ｔ細胞などにより認識され、エフェクター機能などに関連する。ヒトＩｇＧ１の場合、重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端まで延びる。ただし、Ｆｃ領域のＣ末端のリジン（Ｌｙｓ４４７）またはグリシン－リジン（Ｇｌｙ４４６－Ｌｙｓ４４７）は、存在していてもしなくてもよい（Ｆｃ領域中のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ １９９１ に記載の、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックス）にしたがう）。
【0033】
抗体の「クラス」は、抗体の重鎖に含まれる定常ドメインのタイプにより分類される。抗体には５つの主要なクラスがある：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭである。そして、このうちいくつかはさらにサブクラス（アイソタイプ）に分けられ得る。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２である。
【0034】
本明細書において、「抗原」とは、抗体が結合する標的分子またはその部分を指す。抗原中に存在する抗原決定基をエピトープと呼び、抗体は抗原のエピトープの部分に結合す。エピトープには、線状エピトープおよび立体エピトープが含まれる。タンパク質抗原における線状エピトープは、アミノ酸一次配列が抗体により認識されるエピトープである。タンパク質抗原における線状エピトープは、典型的には、少なくとも３つ、少なくとも５つ、例えば８～１０個、６～２０個のアミノ酸で構成される。タンパク質抗原における立体エピトープは、線状エピトープとは対照的に、アミノ酸の一次配列のみでは規定できないエピトープである。立体エピトープの認識に関して、抗体は、タンパク質の三次元構造を認識する。エピトープの立体構造を決定する方法には、例えばＸ線結晶学、二次元核磁気共鳴分光学、部位特異的なスピン標識および電磁常磁性共鳴分光学が含まれるが、これらには限定されない。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９９６）、第６６巻、Ｍｏｒｒｉｓ（編）を参照のこと。
【0035】
本明細書では、アミノ酸配列または塩基配列の同一性の比較は、配列分析用ツールであるＢＬＡＳＴを用いてデフォルトパラメータを用いて算出される。同一性の検索は例えば、ＮＣＢＩのＢＬＡＳＴ２．７．１（２０１７．１０．１９発行）を用いて行うことができる。本明細書における「同一性」の値は通常は上記ＢＬＡＳＴを用い、デフォルトの条件でアラインした際の値をいう。「同一性」は、２つもしくは複数間のアミノ酸または塩基配列において相同なアミノ酸または塩基数の割合を、上述したような公知の方法に従って算定される。具体的に説明すると、割合を算定する前には、比較するアミノ酸または塩基配列群のアミノ酸または塩基配列を整列させ、同一アミノ酸または塩基の割合を最大にするために必要である場合はアミノ酸または塩基配列の一部に間隙を導入する。整列のための方法、割合の算定方法、比較方法、およびそれらに関連するコンピュータプログラムは、当該分野で従来からよく知られている（例えば、上述したＢＬＡＳＴ等）。ＢＬＡＳＴでアミノ酸または塩基配列を比較するときのアルゴリズムには、Ｂｌａｓｔｐをデフォルト設定で使用できる。
【0036】
本明細書において「医薬成分」とは、医薬を構成し得る任意の成分を意味し、例えば、有効成分（それ自体が薬効を示すもの）、添加成分（それ自体は、薬効を期待されていないが、医薬として含まれる場合一定の役割（例えば、賦形剤、滑沢剤、界面活性剤等）を果たすことが期待される成分）等を例示することができる。医薬成分は、単独の物質であってもよく、複数の物質や剤の組み合わせであってもよい。有効成分と添加成分との組み合わせ、アジュバントと有効成分との組み合わせなどの任意の組み合わせも含まれ得る。
【0037】
本明細書では、「有効成分」は、意図される薬効を発揮する成分をいい、単独または複数の成分が該当し得る。
【0038】
本明細書において「添加成分」とは、薬効を期待されていないが、医薬として含まれる場合一定の役割を果たす任意の成分をいい、例えば、薬学的に受容可能なキャリア、安定化剤、（補）助剤、溶解度改善剤、可溶化剤、希釈剤、賦形剤、緩衝剤、結合剤、希釈剤、香味料、潤滑剤を挙げることができる。
【0039】
本明細書において「薬剤」、「剤」または「因子」（いずれも英語ではagentに相当する）は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素（例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー）でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、抗体、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡのようなＤＮＡ、ｍＲＮＡのようなＲＮＡを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子（例えば、低分子リガンドなど）など）、これらの複合分子およびこれらの混合物が挙げられるがそれらに限定されない。
【0040】
本明細書において「標識」とは、目的となる分子または物質を他から識別するための存在（例えば、物質、エネルギー、電磁波など）をいう。そのような標識方法としては、ＲＩ（ラジオアイソトープ）法、蛍光法、ビオチン法、化学発光法等を挙げることができる。標的タンパク質またはそれを捕捉する因子または手段を複数、蛍光法によって標識する場合には、蛍光発光極大波長が互いに異なる蛍光物質によって標識を行う。蛍光発光極大波長の差は、１０ｎｍ以上であることが好ましい。機能に影響を与えない任意の標識が使用できるが、蛍光物質としては、ＡｌｅｘａＴＭＦｌｕｏｒが挙げられる。ＡｌｅｘａＴＭＦｌｕｏｒは、クマリン、ローダミン、フルオレセイン、シアニンなどを修飾して得られた水溶性の蛍光色素であり、広範囲の蛍光波長に対応したシリーズであり、他の該当波長の蛍光色素に比べ、非常に安定で、明るく、またｐＨ感受性が低い。蛍光極大波長が１０ｎｍ以上ある蛍光色素の組み合わせとしては、ＡｌｅｘａＴＭ５５５とＡｌｅｘａＴＭ６３３の組み合わせ、ＡｌｅｘａＴＭ４８８とＡｌｅｘａＴＭ５５５との組み合わせ等を挙げることができる。他の蛍光標識として、シアニン色素（例えば、ＣｙＤｙｅＴＭシリーズのＣｙ３、Ｃｙ５等）、ローダミン６Ｇ試薬、Ｎ－アセトキシ－Ｎ2－アセチルアミノフルオレン（ＡＡＦ）、ＡＡＩＦ（ＡＡＦのヨウ素誘導体）等が挙げられる。本開示では、このような標識を利用して、使用される検出手段に検出され得るように目的とする対象を改変することができる。そのような改変は、当該分野において公知であり、当業者は標識におよび目的とする対象に応じて適宜そのような方法を実施することができる。
【0041】
本明細書において「キット」とは、通常２つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分（例えば、抗体、説明書など）が提供されるユニットをいう。安定性等のため、混合されて提供されるべきでなく、使用直前に混合して使用することが好ましいような組成物の提供を目的とするときに、このキットの形態は好ましい。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分をどのように使用するか、あるいは、試薬をどのように処理すべきかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。本明細書においてキットが試薬キットとして使用される場合、キットには、通常、抗体等の使い方などを記載した指示書などが含まれる。
【0042】
本明細書において「指示書」は、本開示を使用する方法を医師または他の使用者に対する説明を記載したものである。この指示書は、本開示の医薬などを投与することを指示する文言が記載されている。また、指示書には、投与形態を指示する文言が記載されていてもよい。この指示書は、本開示が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（FDA）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（package insert）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような形態でも提供され得る。
【0043】
用語「約」は、示された値プラスまたはマイナス１０％を指す。「約」が、温度について使用される場合、示された温度プラスまたはマイナス５℃を指し、「約」が、ｐＨについて使用される場合、示されたｐＨプラスまたはマイナス０．５を指す。
【0044】
（好ましい実施形態）
以下に本開示の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本開示のよりよい理解のために提供されるものであり、本開示の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本開示の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
以下に本開示の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本開示のよりよい理解のために提供されるものであり、本開示の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本開示の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
【0045】
一つの局面において、本開示は、ＨＢｓ抗原結合抗体を提供する。一つの局面において、本開示は、ＨＢｓ抗原結合抗体を使用したＨＢＶの抑制および検出を提供する。これを達成するための任意の手段が本開示の範囲であると企図される。例えば、明示的な記載がなくとも、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を使用する方法の記載は、同抗体または抗原結合断片を含む組成物、同抗体または抗原結合断片の使用および同方法に使用するための同抗体または抗原結合断片など、他の手段を反映した実施形態も同時に企図するものである。本明細書では、主に組成物の実施形態において本開示を説明するが、ある成分を含むある使用のための組成物についての記載は、同成分の同使用のための方法、および同成分の同使用など、他の手段を反映した実施形態も同時に企図するものである。
【0046】
（抗体の性能）
本発明は、ＨＢｓ抗原に結合することができるＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を提供する。一つの実施形態において、本発明のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ジェノタイプＡ（Ａａ／１（Ａｓｉａｎ／Ａｆｒｉｃａｎ ｔｙｐｅ）、Ａｅ／２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｔｙｐｅ）、Ａｃ／３（Ｃａｍｅｒｏｏｎ）を含む）、ジェノタイプＢ（Ｂｊ／１（Ｊａｐａｎｅａｓｅ ｔｙｐｅ）、Ｂａ／２（Ａｓｉａｎ ｔｙｐｅ）、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５を含む）、ジェノタイプＣ（Ｃｅ／１（Ｅａｓｔ Ａｓｉａｎ ｔｙｐｅ）、Ｃｓ／２（Ｓｏｕｔｈ Ｅａｓｔ ｔｙｐｅ）、Ｃ３、Ｃ４を含む）、ジェノタイプＤ（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５を含む）、ジェノタイプＥ、ジェノタイプＦ（Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４を含む）、ジェノタイプＧ、ジェノタイプＨ、およびジェノタイプＪのうち１つまたは複数のＨＢＶジェノタイプのＨＢｓ抗原に結合することができる。好ましい実施形態において、本発明のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ジェノタイプＡ、Ｂ、ＣおよびＤのＨＢＶジェノタイプのＨＢｓ抗原に結合することができる。
本発明は、ＨＢｓ抗原に結合することができるＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を提供する。一つの実施形態において、本発明のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ジェノタイプＡ（Ａａ／１（Ａｓｉａｎ／Ａｆｒｉｃａｎ ｔｙｐｅ）、Ａｅ／２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｔｙｐｅ）、Ａｃ／３（Ｃａｍｅｒｏｏｎ）を含む）、ジェノタイプＢ（Ｂｊ／１（Ｊａｐａｎｅａｓｅ ｔｙｐｅ）、Ｂａ／２（Ａｓｉａｎ ｔｙｐｅ）、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５を含む）、ジェノタイプＣ（Ｃｅ／１（Ｅａｓｔ Ａｓｉａｎ ｔｙｐｅ）、Ｃｓ／２（Ｓｏｕｔｈ Ｅａｓｔ ｔｙｐｅ）、Ｃ３、Ｃ４を含む）、ジェノタイプＤ（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５を含む）、ジェノタイプＥ、ジェノタイプＦ（Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４を含む）、ジェノタイプＧ、ジェノタイプＨ、およびジェノタイプＪのうち１つまたは複数のＨＢＶジェノタイプのＨＢｓ抗原に結合することができる。好ましい実施形態において、本発明のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ジェノタイプＡ、Ｂ、ＣおよびＤのＨＢＶジェノタイプのＨＢｓ抗原に結合することができる。
【0047】
一つの実施形態において、本発明のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、（例えば、実施例の条件において）バイオレイヤー干渉法でＨＢｓとの親和性を測定した場合に１０００ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、７５ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、または２０ｎＭ未満、好ましくは１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、より好ましくは１ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、または０．１ｎＭ未満のＫＤ値を示す。抗体医薬は１ｎＭ未満のＫＤ値を示すものが多いが特定の基準値はない。ウイルスの中和抗体としておよそ１～５０ｎＭのＫＤ値を示すものが市販されており、このレベルの親和性は十分に高いと考えられる。本発明のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、いずれかのＨＢｓ抗原に結合できれば有用であり得、特定のＨＢｓ抗原に対する選択性および特異性を有してもよいし、有さなくてもよい。本発明のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、表面プラズモン共鳴によって決定した場合に上記親和性を示してもよく、例えば、表面プラズモン共鳴による測定では、ビオチン化ＨＢｓ抗原をストレプトアビジンビアコアセンサチップ（Ｂｉａｃｏｒｅなど）に捕捉し、異なる濃度の精製ＨＢｓ抗原結合抗体を３分間注入した後、緩衝液で５分間洗浄し、洗浄相からオフ速度（ｋｄ）を決定し、注入相からオン速度（ｋａ）を決定して、親和性（ＫＤ）を算出することができる。
【0048】
一つの実施形態において、本発明のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、変異を有するＨＢｓ抗原にも結合し得る。ＨＢＩＧによる処置に耐性を示すＨＢｓ抗原のエスケープ変異体が知られているが、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、このようなエスケープ変異体に対しても有効であり得るため、広範なＨＢＶの感染を抑制できると期待される。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｋ１４１Ｅ、Ｇ１４５ＲまたはＩ１５２Ａの変異を有するＨＢｓに結合し得る。好ましい実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｋ１４１ＥまたはＧ１４５Ｒの変異を有するＨＢｓに結合し得る。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｋ１４１Ｅ、Ｇ１４５ＲまたはＩ１５２Ａの変異を有するＨＢｓに、１０ｎＭ未満のＫＤ値で結合し得る。好ましい実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｋ１４１ＥまたはＧ１４５Ｒの変異を有するＨＢｓに、１０ｎＭ未満のＫＤ値で結合し得る。
【0049】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ＨＢｓ抗原の立体エピトープを認識し得る。そのため、変性したＨＢｓ抗原および非変性ＨＢｓ抗原に対する結合性が異なり、これらの区別が可能であり得る。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片が認識するＨＢｓ抗原のエピトープは１５２位（配列番号１０７の３２６位に対応する）のイソロイシンを含み得る。
【0050】
（ＨＢｓ抗原結合抗体）
一つの局面において、本開示は、特定のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を提供する。実施例に示されるように、モノクローナルＨＢｓ抗原結合抗体としてクローンＨＢ３５１、ＨＢ１１７０、ＨＢ１２１５を作製した。これらクローンのＣＤＲ配列は以下の通りである。
一つの局面において、本開示は、特定のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を提供する。実施例に示されるように、モノクローナルＨＢｓ抗原結合抗体としてクローンＨＢ３５１、ＨＢ１１７０、ＨＢ１２１５を作製した。これらクローンのＣＤＲ配列は以下の通りである。
【表2】
【表3】
【表4】
【0051】
本明細書において、抗体またはその部分（可変領域など）がＣＤＲまたはＣＤＲを指す配列番号のアミノ酸配列を含むと記載する場合、抗体またはその部分は、対応するＣＤＲ領域にそのＣＤＲアミノ酸配列を有することを意味し、またＣＤＲ領域の範囲が規定される。例えば、重鎖可変領域が配列番号１のアミノ酸配列を含む場合、ＤＴＹＭＹ（配列番号９１における５０～５４位）以外の配列番号９１のアミノ酸配列はＣＤＲ１領域ではないと判定される。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域アミノ酸配列を有する重鎖、および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する軽鎖を含み、６つのＣＤＲ配列は以下の（１）～（３）のいずれかで特定される：
（１）
重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１～５のいずれかを含み、
重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６～１０のいずれかを含み、
重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号１１～１５のいずれかを含み、
軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１６～２０のいずれかを含み、
軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号２１～２５のいずれかを含み、
軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号２６～３０のいずれかを含む、
（２）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号３１～３５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号３６～４０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号４１～４５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号４６～５０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号５１～５５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号５６～６０のいずれかを含む、または
（３）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号６１～６５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６６～７０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号７１～７５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号７６～８０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号８１～８５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号８６～９０のいずれかを含む。
（１）
重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１～５のいずれかを含み、
重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６～１０のいずれかを含み、
重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号１１～１５のいずれかを含み、
軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号１６～２０のいずれかを含み、
軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号２１～２５のいずれかを含み、
軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号２６～３０のいずれかを含む、
（２）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号３１～３５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号３６～４０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号４１～４５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号４６～５０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号５１～５５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号５６～６０のいずれかを含む、または
（３）
前記重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号６１～６５のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号６６～７０のいずれかを含み、
前記重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号７１～７５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列が配列番号７６～８０のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列が配列番号８１～８５のいずれかを含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列が配列番号８６～９０のいずれかを含む。
【0052】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片における重鎖ＣＤＲ１～３および軽鎖ＣＤＲ１～３アミノ酸配列は、それぞれ、
（１）
配列番号１、６、１１、１６、２１および２６（Ｋａｂａｔナンバリング）、
配列番号２、７、１２、１７、２２および２７（ＩＭＧＴナンバリング）、
配列番号３、８、１３、１８、２３および２８（Ｐａｒａｔｏｍｅナンバリング）、または
配列番号４、９、１４、１９、２４および２９（Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング）、
（２）
配列番号３１、３６、４１、４６、５１および５６（Ｋａｂａｔナンバリング）、
配列番号３２、３７、４２、４７、５２および５７（ＩＭＧＴナンバリング）、
配列番号３３、３８、４３、４８、５３および５８（Ｐａｒａｔｏｍｅナンバリング）、または
配列番号３４、３９、４４、４９、５４および５９（Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング）
（３）
配列番号６１、６６、７１、７６、８１および８６（Ｋａｂａｔナンバリング）、
配列番号６２、６７、７２、７７、８２および８７（ＩＭＧＴナンバリング）、
配列番号６３、６８、７３、７８、８３および８８（Ｐａｒａｔｏｍｅナンバリング）、または
配列番号６４、６９、７４、７９、８４および８９（Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング）
の組合せで表される。
（１）
配列番号１、６、１１、１６、２１および２６（Ｋａｂａｔナンバリング）、
配列番号２、７、１２、１７、２２および２７（ＩＭＧＴナンバリング）、
配列番号３、８、１３、１８、２３および２８（Ｐａｒａｔｏｍｅナンバリング）、または
配列番号４、９、１４、１９、２４および２９（Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング）、
（２）
配列番号３１、３６、４１、４６、５１および５６（Ｋａｂａｔナンバリング）、
配列番号３２、３７、４２、４７、５２および５７（ＩＭＧＴナンバリング）、
配列番号３３、３８、４３、４８、５３および５８（Ｐａｒａｔｏｍｅナンバリング）、または
配列番号３４、３９、４４、４９、５４および５９（Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング）
（３）
配列番号６１、６６、７１、７６、８１および８６（Ｋａｂａｔナンバリング）、
配列番号６２、６７、７２、７７、８２および８７（ＩＭＧＴナンバリング）、
配列番号６３、６８、７３、７８、８３および８８（Ｐａｒａｔｏｍｅナンバリング）、または
配列番号６４、６９、７４、７９、８４および８９（Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング）
の組合せで表される。
【0053】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片における重鎖ＣＤＲ１～３アミノ酸配列は、それぞれ、
（１）
配列番号１、６および１１、
配列番号２、７および１２、
配列番号３、８および１３、または
配列番号４、９および１４、
（２）
配列番号３１、３６および４１、
配列番号３２、３７および４２、
配列番号３３、３８および４３、または
配列番号３４、３９および４４、
（３）
配列番号６１、６６および７１、
配列番号６２、６７および７２、
配列番号６３、６８および７３、または
配列番号６４、６９および７４
の組合せで表される。
（１）
配列番号１、６および１１、
配列番号２、７および１２、
配列番号３、８および１３、または
配列番号４、９および１４、
（２）
配列番号３１、３６および４１、
配列番号３２、３７および４２、
配列番号３３、３８および４３、または
配列番号３４、３９および４４、
（３）
配列番号６１、６６および７１、
配列番号６２、６７および７２、
配列番号６３、６８および７３、または
配列番号６４、６９および７４
の組合せで表される。
【0054】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片における軽鎖ＣＤＲ１～３アミノ酸配列は、それぞれ、
（１）
配列番号１６、２１および２６、
配列番号１７、２２および２７、
配列番号１８、２３および２８、または
配列番号１９、２４および２９、
（２）
配列番号４６、５１および５６、
配列番号４７、５２および５７、
配列番号４８、５３および５８、または
配列番号４９、５４および５９
（３）
配列番号７６、８１および８６、
配列番号７７、８２および８７、
配列番号７８、８３および８８、または
配列番号７９、８４および８９
の組合せで表される。
（１）
配列番号１６、２１および２６、
配列番号１７、２２および２７、
配列番号１８、２３および２８、または
配列番号１９、２４および２９、
（２）
配列番号４６、５１および５６、
配列番号４７、５２および５７、
配列番号４８、５３および５８、または
配列番号４９、５４および５９
（３）
配列番号７６、８１および８６、
配列番号７７、８２および８７、
配列番号７８、８３および８８、または
配列番号７９、８４および８９
の組合せで表される。
【0055】
一つの実施形態において、上記で特定される６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１、２、３、４、５または６個のアミノ酸変異が含まれてもよい。一つの実施形態において、上記で特定される６つのＣＤＲアミノ酸配列において合計１または２個のアミノ酸変異が含まれてもよい。一つの実施形態において、アミノ酸変異は、配列番号５、１０、１５、２０、２５および３０、配列番号３５、４０、４５、５０、５５および６０、または配列番号６５、７０、７５、８０、８５および９０の共通ＣＤＲ配列以外の位置に存在する。一つの実施形態において、アミノ酸変異は、配列番号１～４の群、配列番号６～９の群、配列番号１１～１４の群、配列番号１６～１９の群、配列番号２１～２４の群、配列番号２６～２９の群、配列番号３１～３４の群、配列番号３６～３９の群、配列番号４１～４４の群、配列番号４６～４９の群、配列番号５１～５４の群、配列番号５６～５９の群、配列番号６１～６４の群、配列番号６６～６９の群、配列番号７１～７４の群、配列番号７６～７９の群、配列番号８１～８４の群または配列番号８６～８９の群の各群の配列番号のうちいずれか１つの配列番号の配列中にのみ出現するアミノ酸において生じる。
【0056】
一つの実施形態において、ＣＤＲアミノ酸配列におけるアミノ酸変異は、独立して、アミノ酸置換、アミノ酸欠失またはアミノ酸挿入である。一つの実施形態において、ＣＤＲアミノ酸配列におけるアミノ酸変異は、独立して、保存的アミノ酸置換である。一つの実施形態において、保存的アミノ酸置換は、以下のアミノ酸の群におけるアミノ酸を同じ群内の別のアミノ酸で置き換えることである。
・群１：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン
・群２：セリンおよびスレオニン
・群３：フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンおよびトリプトファン
・群４：リジン、ヒドロキシリジン、アルギニンおよびヒスチジン
・群５：システイン、メチオニン、メチオニンスルホキシドおよびホモシステイン
・群６：プロリンおよびヒドロキシプロリン
・群７：グルタミン酸およびアスパラギン酸
・群８：グルタミンおよびアスパラギン
・群１：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン
・群２：セリンおよびスレオニン
・群３：フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンおよびトリプトファン
・群４：リジン、ヒドロキシリジン、アルギニンおよびヒスチジン
・群５：システイン、メチオニン、メチオニンスルホキシドおよびホモシステイン
・群６：プロリンおよびヒドロキシプロリン
・群７：グルタミン酸およびアスパラギン酸
・群８：グルタミンおよびアスパラギン
【0057】
実施例で得られたクローンＨＢ３５１、ＨＢ１１７０およびＨＢ１２１５の重鎖・軽鎖可変領域の配列およびそのヒト化配列は以下の通りである。
【表5】
【表6】
【表7】
【0058】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、
（１）配列番号９１もしくは９７またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
（２）配列番号９３もしくは９９またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または
（３）配列番号９５またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含む。
（１）配列番号９１もしくは９７またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
（２）配列番号９３もしくは９９またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または
（３）配列番号９５またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域
を含む。
【0059】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、
（１）配列番号９２もしくは９８またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（２）配列番号９４もしくは１００またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
（３）配列番号９６またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を含む。
（１）配列番号９２もしくは９８またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（２）配列番号９４もしくは１００またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
（３）配列番号９６またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を含む。
【0060】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、
（１）配列番号９１もしくは９７またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２もしくは９８またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（２）配列番号９３もしくは９９またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４もしくは１００またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
（３）配列番号９５またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を含む。
（１）配列番号９１もしくは９７またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９２もしくは９８またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
（２）配列番号９３もしくは９９またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９４もしくは１００またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、または
（３）配列番号９５またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号９６またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一なアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域
を含む。
【0061】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化抗体もしくはキメラ抗体またはその抗原結合断片である。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）またはその抗原結合断片である。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、単離されている。
【0062】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体は全長抗体である。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体の抗原結合断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディまたは単鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）である。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）またはその抗原結合断片である。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、単離されている。
【0063】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＨ４ドメインのうちの１つまたは複数を含む。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ＣＬドメインを含む。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｆｃ領域を含む。
【0064】
一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧまたはＩｇＭのいずれかに分類される構造を有してもよい。一つの実施形態において、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２のいずれかに分類される構造を有してもよい。本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、ＰＥＧ化など任意の公知の抗体に対する修飾を含むことが企図される。
【0065】
一つの局面において、本開示は、ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を提供する。核酸には、本明細書に記載の任意のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片がコードされ得る。ＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、１分子の核酸にコードされていてもよいし、複数個の分子の核酸に分割してコードされていてもよい。
【0066】
実施例において、クローンＨＢ３５１、ＨＢ１１７０およびＨＢ１２１５の可変領域の塩基配列は以下の通りに決定されている。
【表8-1】
【表8-2】
【0067】
一つの実施形態において、核酸は、
（１）配列番号１０１またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、および／または配列番号１０２またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、
（２）配列番号１０３またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、および／または配列番号１０４またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、または
（３）配列番号１０５またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、および／または配列番号１０６またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列を含む。
（１）配列番号１０１またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、および／または配列番号１０２またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、
（２）配列番号１０３またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、および／または配列番号１０４またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、または
（３）配列番号１０５またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列、および／または配列番号１０６またはこれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一な塩基配列を含む。
【0068】
当業者であれば、任意の系を使用して、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を生産することができる。
【0069】
生産したＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、任意の精製方法により精製または単離できる。例えば、硫酸アンモニウムや硫酸ナトリウムを用いた塩析による分画法、ＰＥＧ分画法、エタノール分画法、ＤＥＡＥイオン交換クロマトグラフィー法、ゲル濾過法やプロテインＡ／Ｇアフィニティークロマトグラフィー法などのイムノグロブリン精製法が挙げられる。特に、モノクローナル抗体がマウスＩｇＧである場合、プロテインＡ結合担体または抗マウスイムノグロブリン結合担体を用いたアフィニティークロマトグラフィー法により効率良く精製することが可能である。
【0070】
（用途・使用）
一つの局面において、本開示は、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を使用したＢ型肝炎ウイルス感染の処置または予防あるいはＢ型肝炎ウイルスの検出を提供する。一つの実施形態において、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を使用してＢ型肝炎ウイルス感染を処置または予防することができる。好適な実施形態として、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ型肝炎ウイルスの中和抗体としてＢ型肝炎ウイルスの感染性を低減することができる。Ｂ型肝炎ウイルスにすでに感染している対象に使用することもできるし、Ｂ型肝炎ウイルスへの新規感染を防ぐために使用することもできる。Ｂ型肝炎ウイルス感染に伴うＤ型肝炎ウイルス感染の処置または予防にも使用できる。一つの実施形態において、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、移植用臓器（例えば、肝臓）を処置するために使用される。一つの実施形態において、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ型肝炎ウイルスに感染した対象またはＢ型肝炎ウイルス感染のリスクのある対象に投与される。
一つの局面において、本開示は、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を使用したＢ型肝炎ウイルス感染の処置または予防あるいはＢ型肝炎ウイルスの検出を提供する。一つの実施形態において、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を使用してＢ型肝炎ウイルス感染を処置または予防することができる。好適な実施形態として、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ型肝炎ウイルスの中和抗体としてＢ型肝炎ウイルスの感染性を低減することができる。Ｂ型肝炎ウイルスにすでに感染している対象に使用することもできるし、Ｂ型肝炎ウイルスへの新規感染を防ぐために使用することもできる。Ｂ型肝炎ウイルス感染に伴うＤ型肝炎ウイルス感染の処置または予防にも使用できる。一つの実施形態において、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、移植用臓器（例えば、肝臓）を処置するために使用される。一つの実施形態において、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、Ｂ型肝炎ウイルスに感染した対象またはＢ型肝炎ウイルス感染のリスクのある対象に投与される。
【0071】
本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、異なるエスケープ変異を有するＨＢｓ抗原に結合し得るため、異なる種類のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を同時に使用して広範なエスケープ変異体Ｂ型肝炎ウイルスを抑制することが有利であり得る。
【0072】
一つの実施形態において、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を使用してＢ型肝炎ウイルスを検出することができる。本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片は、変異を有するＨＢｓ抗原に対して異なる結合性を示し得るため、これに基づくＢ型肝炎ウイルスの変異の判定に使用することもできる。
【0073】
（組成物）
一つの局面において、本開示は、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を提供する。一つの実施形態において、Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置または予防するための組成物が提供される。一つの実施形態において、Ｂ型肝炎ウイルスを検出するための組成物が提供される。
一つの局面において、本開示は、本明細書に記載のＨＢｓ抗原結合抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を提供する。一つの実施形態において、Ｂ型肝炎ウイルス感染を処置または予防するための組成物が提供される。一つの実施形態において、Ｂ型肝炎ウイルスを検出するための組成物が提供される。
【0074】
（剤型等）
本明細書に記載される組成物は、種々の形態で提供され得る。組成物の形態としては、例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤等であってもよい。注射用の水溶液は、例えば、バイアル、またはステンレス容器で保存してもよい。また注射用の水溶液は、例えば生理食塩水、糖（例えばトレハロース）、ＮａＣｌ、またはＮａＯＨ等を配合してもよい。
本明細書に記載される組成物は、種々の形態で提供され得る。組成物の形態としては、例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤等であってもよい。注射用の水溶液は、例えば、バイアル、またはステンレス容器で保存してもよい。また注射用の水溶液は、例えば生理食塩水、糖（例えばトレハロース）、ＮａＣｌ、またはＮａＯＨ等を配合してもよい。
【0075】
一つの実施形態では、本開示の組成物は、薬学的に許容しうるキャリアもしくは賦形剤を含む。このようなキャリアは、無菌液体、例えば水および油であることも可能であり、石油、動物、植物または合成起源のものが含まれ、限定されるわけではないが、ピーナツ油、ダイズ油、ミネラルオイル、ゴマ油等が含まれる。医薬を経口投与する場合は、水が好ましいキャリアである。医薬組成物を静脈内投与する場合は、生理食塩水および水性デキストロースが好ましいキャリアである。好ましくは、生理食塩水溶液、並びに水性デキストロースおよびグリセロール溶液が、注射可能溶液の液体キャリアとして使用される。適切な賦形剤には、軽質無水ケイ酸、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等が含まれる。組成物は、望ましい場合、少量の湿潤剤または乳化剤、あるいはｐＨ緩衝剤もまた含有することも可能である。これらの組成物は、溶液、懸濁物、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末、持続放出配合物等の形を取ることも可能である。伝統的な結合剤およびキャリア、例えばトリグリセリドを用いて、組成物を座薬として配合することも可能である。経口配合物は、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン・ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的キャリアを含むことも可能である。適切なキャリアの例は、E．W．Martin, Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mark Publishing Company, Easton, U.S.A）に記載される。これらのほか、例えば、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等を含んでいてもよい。一つの実施形態では、本開示の任意の液体組成物のｐＨは、約３、約３．５、約４、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１またはこれらの任意の２つの値の間の範囲であり得る。
【0076】
本開示の組成物の任意の成分は、薬学的に許容しうる塩として提供することができ、例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する遊離型のカルボキシル基とともに形成される塩、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどの遊離型のアミン基とともに形成される塩、並びにナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、および水酸化第二鉄とともに形成される塩であり得る。
【0077】
好ましい実施形態において、公知の方法に従って、ヒトへの投与に適応させた医薬組成物として、組成物を配合することができる。このような組成物は注射により投与することができる。代表的には、注射投与のための組成物は、無菌等張水性緩衝剤中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるリドカインなどの局所麻酔剤も含むことも可能である。一般的に、成分を別個に供給するか、または単位投薬型中で一緒に混合して供給し、例えば活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密封容器中、凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として供給することができる。組成物を注入によって投与しようとする場合、無菌薬剤等級の水または生理食塩水を含有する注入ビンを用いて、分配することも可能である。組成物を注射によって投与しようとする場合、投与前に、成分を混合可能であるように、注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルを提供することも可能である。
【0078】
本開示の組成物を被験体に適用する場合、被験体は特に限定されず、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、ブタ、サル、ヒトなど）、鳥類、爬虫類、両生類、節足動物、魚類などであり得る。
【0079】
本開示の組成物および／または有効成分の量は、処置または予防する障害または状態の性質によって変動しうるが、当業者は本明細書の記載に基づき標準的臨床技術によって決定可能である。場合によって、in vitroアッセイを使用して、最適投薬量範囲を同定するのを補助することも可能である。配合物に使用しようとする正確な用量はまた、投与経路、および疾患または障害の重大性によっても変動しうるため、担当医の判断および各患者の状況に従って、決定すべきである。本開示の組成物および／または有効成分の投与量は特に限定されないが、例えば、１回あたり０．００００１、０．０００１、０．００１、１、５、１０、１５、１００、または１０００ｍｇ／ｋｇ体重であってもよく、それらいずれか２つの値の範囲内であってもよい。投与間隔は特に限定されないが、例えば、１、７、１４、２１、または２８日あたりに１または２回投与してもよく、それらいずれか２つの値の範囲あたりに１または２回投与してもよい。投与量、投与間隔、投与方法は、患者の年齢や体重、症状、対象臓器等により、適宜選択してもよい。
【0080】
本明細書に記載の組成物の投与経路は、ウイルス感染の処置または予防に際して効果的なものを使用するのが好ましく、例えば、静脈内、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻内、硬膜外、または経口投与等であってもよい。一つの実施形態では、本開示の組成物、種々の送達（デリバリー）系をともに使用することができる。このような系には、例えばリポソーム、微小粒子、および微小カプセル中の被包：受容体が仲介するエンドサイトーシスの使用；レトロウイルスベクターまたは他のベクターの一部としての療法核酸の構築などがある。好適な経路いずれによって、例えば注入によって、ボーラス（bolus）注射によって、上皮または皮膚粘膜裏打ち（例えば口腔、直腸および腸粘膜など）を通じた吸収によって、医薬を投与することも可能であるし、必要に応じてエアロゾル化剤を用いて吸入器または噴霧器を使用しうるし、そして他の薬剤と一緒に投与することも可能である。投与は全身性または局所であることも可能である。
【0081】
本開示の組成物はキットとして提供することができる。一つの実施形態では、本開示は、本開示の組成物に添加され得る１以上の成分が充填された、１以上の容器を含む、薬剤パックまたはキットを提供する。場合によって、このような容器に付随して、医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形で、政府機関による、ヒト投与のための製造、使用または販売の認可を示す情報を示すことも可能である。
【0082】
本開示の組成物の医薬等としての製剤化手順は、当該分野において公知であり、例えば、日本薬局方、米国薬局方、他の国の薬局方などに記載されている。従って、当業者は、本明細書の記載があれば、過度な実験を行うことなく、使用すべき量等の実施形態を決定することができる。
【0083】
本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも１つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「２つの値」の「範囲内」と明記した場合、その範囲には２つの値自体も含む。
【0084】
本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
【0085】
以上、本開示を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本開示を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本開示を限定する目的で提供したのではない。従って、本開示の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例0086】
試薬類は具体的には実施例中に記載した製品を使用したが、他メーカー（Sigma－Aldrich、和光純薬、ナカライ、R&D Systems、USCN Life Science INC等）の同等品でも代用可能である。
【0087】
（実施例１：ＨＢｓ抗原結合抗体の作製）
ＨＢｓ抗原結合抗体は、ＨＢｓ抗原によりマウスを免疫し、そのマウスの細胞を用いてハイブリドーマを作製することにより取得した。
ＨＢｓ抗原結合抗体は、ＨＢｓ抗原によりマウスを免疫し、そのマウスの細胞を用いてハイブリドーマを作製することにより取得した。
【0088】
ＣＨＯ細胞で産生された精製リコンビナントタンパク質ａｄｒ型ＨＢｓ抗原（PROSPEC社製、配列番号１０８）をマウスに投与して初回免疫し、さらに追加免疫を行った。その後、脾細胞を分離し、これをＰＥＧ法によりマウス骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を作製した。プレート上でハイブリドーマ細胞を培養し、コロニーを出現させたところで、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマのスクリーニングを行なった。
【0089】
具体的には、ａｄｒ型ＨＢｓ抗原の溶液をプレートの各ウェルに分注し、インキュベートしてａｄｒ型ＨＢｓ抗原をプレートに固定した後、洗浄およびブロッキングを行った。この各ウェルに、ハイブリドーマ培養上清を添加し、インキュベートした後、洗浄した。その後、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇポリクローナル抗体を各ウェルに添加し、反応させた後、洗浄し、ＯＰＤ（ｏ－フェニレンジアミン）基質液を用いて陽性を示すウェルを検出した。陽性を示すウェルのモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞のうちＨＢｓ抗原に対して反応性の強いハイブリドーマ細胞について限界希釈法によってクローニングを行い、単一クローンとした。
【0090】
クローニングにより単一クローンとして得られたハイブリドーマ細胞の産生するモノクローナル抗体のマウスイムノグロブリンサブクラスを決定した。マウスイムノグロブリンサブクラスの同定には、ハイブリドーマ細胞の培養上清を用い、各アイソタイピング用ポリクローナル抗体（抗マウスＩｇＧ１抗体、抗マウスＩｇＧ２ａ抗体、抗マウスＩｇＧ２ｂ抗体、抗マウスＩｇＧ３抗体、抗マウスκ抗体及び抗マウスλ抗体：Bethyl Laboratory社）を用いて、通常のＥＬＩＳＡ法により同定した。
【0091】
得られた抗体について、広範なＨＢＶに対して有効かどうかを確認するために。ＨＢＶのジェノタイプＡ、Ｂ、Ｃ、ＤのＨＢｓ抗原に対する各抗体の結合性を試験した。その結果、一部の抗体は特定のジェノタイプのＨＢｓ抗原だけに対して結合性を示したが、クローンＨＢ３５１、ＨＢ１１７０、ＨＢ１２１５などは全てのジェノタイプのＨＢｓ抗原に対して結合性を示した。なお、ゲル電気泳動で展開したジェノタイプＣの変性ＨＢｓ抗原に対して各抗体を使用してウエスタンブロットで検出できるかどうかを試験したが、いずれの抗体を使用しても検出できなかった。このことから、取得した抗体はＨＢｓ抗原の立体エピトープを認識すると考えられる。
【0092】
（実施例２：モノクローナル抗体のＨＢＶ抑制能）
得られた各モノクローナル抗体について、ＨＢＶを抑制する能力を試験した。
得られた各モノクローナル抗体について、ＨＢＶを抑制する能力を試験した。
【0093】
ＨＢＶと、２５μｇ／ｍＬのモノクローナル抗体または２．５μＭのＰｒｅＳ１ペプチド（対照）とを含む培地中でＨｅｐＧ２－ＮＴＣＰ Ｃ４細胞を２４時間インキュベートした。その後、培地を交換して１０日間インキュベートした。これらの培養物に含まれるＨＢＶのＲＮＡの量をリアルタイムｑＰＣＲで評価した。
【0094】
結果を図１に示す。クローンＨＢ３５１など取得したＨＢｓ抗原結合抗体は、ＨＢＶを抑制できる抗体を含むことが確認された。
【0095】
種々のモノクローナル抗体の添加量において同様の実験を行い、培養物に含まれるＨＢＶ ＲＮＡ量を定量した。比較として、市販のＨＢＩＧについても同様に試験した。それぞれの濃度での結果をプロットしてＨＢＶ抑制曲線を作成し、ＩＣ５０を計算した。
【0096】
結果を図２に示す。クローン３５１などｎｇ／ｍＬレベルの濃度でＨＢＶを抑制できることが見出された。これらのクローンは、ＨＢＩＧと比較しても効率的にＨＢＶを抑制できると考えられる。
【0097】
（実施例３：モノクローナル抗体のＨＢｓ抗原結合能）
クローンＨＢ３５１、ＨＢ１１７０、ＨＢ１２１５などについて、Ｏｃｔｅｔシステムを用いてＨＢｓ抗原との親和性を評価し、ＫＤ値を測定した。
クローンＨＢ３５１、ＨＢ１１７０、ＨＢ１２１５などについて、Ｏｃｔｅｔシステムを用いてＨＢｓ抗原との親和性を評価し、ＫＤ値を測定した。
【0098】
具体的には、ＨＢｓ抗原（Prosec Tany Technology Ltd. HBS 875）をＥｚ－Ｌｉｎｋ（商標）ＮＨＳ－ＰＥＧ４－ビオチン（ThermoFisher Scientific）を用いてビオチン化し、これを、分子間相互作用解析装置であるＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ｅ（Sartorius）を用いてストレプトアビジン（ＳＡ）バイオセンサー（Sartorius）上に１０μｇ／ｍＬの濃度で流して固定化を行った。その後、１０μＭから３倍づつ希釈したクローンＨＢ３５１、ＨＢ１１７０、ＨＢ１２１５などの抗体と反応させ、Ｋｏｎ（会合速度定数）とＫｄｉｓ（解離速度定数）を算出し、平衡解離定数（ＫＤ）をＫｄｉｓ／Ｋｏｎとして算出した。
【0099】
結果を図３および以下の表に示す。いずれのモノクローナル抗体も高い親和性でビオチン化ＨＢｓ抗原に結合することが確認された。算出したＫＤ値は、それぞれ、約３００ｐＭ（クローンＨＢ３５１、ＨＢ１２１５）、約３ｎＭ（クローンＨＢ１１７０）であった。
【表9】
【0100】
（実施例４：各ジェノタイプのＨＢＶエンベロープタンパク質を有するウイルスの抑制）
モノクローナル抗体が異なるジェノタイプのＨＢＶの感染を抑制できるかどうかを試験した。概要を図４に示す。
モノクローナル抗体が異なるジェノタイプのＨＢＶの感染を抑制できるかどうかを試験した。概要を図４に示す。
【0101】
所望のＨＢＶ由来エンベロープを有するＤ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）粒子を作製する系を構築した。ＨＤＶは、ＨＢＶのサテライトウイルスとして知られ、ウイルス粒子表面はＨＢＶのエンベロープ成分によって覆われ、ウイルス粒子内部にはデルタ抗原および遺伝子ＲＮＡを有する。ＨＤＶはＨＢＶと同様にＮＴＣＰを介して宿主細胞内に侵入するため、本モデルは、ＨＢＶの感染ステップを評価できると考えられる。ジェノタイプＡ、Ｂ、ＣまたはＤのラージＨＢｓ抗原をコードするプラスミドと、ＨＤＶゲノムをコードするプラスミドとをＨｕｈ７細胞にトランスフェクトすることによって、各ジェノタイプのＨＢＶエンベロープによって覆われたＨＤＶ粒子を取得した。その後、これらのＨＤＶ粒子をＨＢ３５１またはＨＢ１１７０モノクローナル抗体（２５μｇ／ｍＬ）と同時にＨｅｐＧ２－１８Ｃ細胞に添加して、十日間インキュベートし、細胞内のＨＤＶ ＲＮＡの量を測定した。
【0102】
結果を図５に示す。ＨＢ３５１およびＨＢ１１７０は両方ともジェノタイプＡ、Ｂ、ＣおよびＤのＨＢＶエンベロープを有するＨＤＶの感染を抑制できることが見出された。
【0103】
（実施例５：ＨＢＶ産生マウスモデルにおけるモノクローナル抗体処置）
次に、ＨＢＶ産生マウスモデルにおいてＨＢ３５１およびＨＢ１１７０の効果を試験した。
次に、ＨＢＶ産生マウスモデルにおいてＨＢ３５１およびＨＢ１１７０の効果を試験した。
【0104】
実験の概要を図６の上部に示す。ＨＢＶおよびＨＢ３５１またはＨＢ１１７０をマウスに投与し、１日毎に採血を行った。取得した血清中のＨＢｓ抗原およびＨＢＶ ＤＮＡを定量した。
【0105】
結果を図６の下部に示す。マウスにおいても、ＨＢ３５１およびＨＢ１１７０がＨＢＶを抑制できることが見出された。
【0106】
（実施例６：モノクローナル抗体の認識部位）
モノクローナル抗体がＨＢｓ抗原のどの部位を認識するか検討した。
モノクローナル抗体がＨＢｓ抗原のどの部位を認識するか検討した。
【0107】
ＨＢｓ抗原の１４７～１５２の位置（配列番号１０７の３２１～３２６位、配列番号１０８の１４７～１５２位に対応する）のアミノ酸をそれぞれアラニンに置換して抗体の結合性が維持されるか検討した。結果を図７に示す。ＨＢ３５１およびＨＢ１１７０はいずれも、Ｉ１５２Ａ変異を導入したＨＢｓとの結合性が観察されなかった。１５２位のイソロイシンは、ＨＢ３５１およびＨＢ１１７０のＨＢｓ認識において重要なアミノ酸残基であることが示唆された。１５２位のイソロイシンはほぼ全てのＨＢＶにおいて保存されており、１５２位に変異が生じるとＨＢＶ粒子形成が阻害されることが見出されている。そのため、ＨＢ３５１およびＨＢ１１７０は、ＨＢＶを網羅的に抑制できると予想される。なお、ＨＢ１２１５クローンはＩ１５２Ａ変異を導入したＨＢｓに対しても結合性を維持することが観察されている。
【0108】
（実施例７：ＨＢＩＧエスケープ変異体に対する中和活性）
ＨＢＩＧによる処置に耐性を示すＨＢｓ抗原のエスケープ変異体が知られている。これらのエスケープ変異体に対して作製したモノクローナル抗体が有効かどうか検討した。
ＨＢＩＧによる処置に耐性を示すＨＢｓ抗原のエスケープ変異体が知られている。これらのエスケープ変異体に対して作製したモノクローナル抗体が有効かどうか検討した。
【0109】
実施例４と同様のＨＤＶを使用する系を用いて、エスケープ変異（Ｋ１４１Ｅ、Ｇ１４５Ｒ）を含むＨＢｓ抗原を発現するＨＢＶのエンベロープを有するＤ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）粒子を作製した。その後、実施例４と同様にこれらのＨＤＶ粒子をＨＢ３５１、ＨＢ１１７０、ＨＢ１２１５などのモノクローナル抗体と同時に宿主細胞に添加して、インキュベートした後に、細胞内のＨＤＶ ＲＮＡの量を測定した。
【0110】
エスケープ変異Ｇ１４５Ｒについての結果を図８に示す。ＨＢ３５１はエスケープ変異Ｇ１４５Ｒを含むＨＢｓ抗原のＨＢＶエンベロープを有するＨＤＶの感染も良好に抑制できることが見出された。エスケープ変異Ｋ１４１Ｅについては、試験したクローンのうちＨＢ１２１５だけが良好な感染抑制を示した。作製したクローンは、ＨＢｓ抗原の各種エスケープ変異体に対しても有効であるため、広範なＨＢＶの感染を抑制できると期待される。
【0111】
（実施例８：モノクローナル抗体のヒト化）
クローンＨＢ３５１およびＨＢ１１７０に基づきヒト化抗体を作製した。
クローンＨＢ３５１およびＨＢ１１７０に基づきヒト化抗体を作製した。
【0112】
最初にこれらのクローンのコード塩基配列およびアミノ酸配列を決定した。以下に決定したそれぞれの配列を示す。
【表10】
【表11】
【表12】
【0113】
Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＰａｒａｔｏｍｅおよびＣｈｏｔｈｉａのナンバリングシステムに従いＣＤＲ配列を決定した。これら４つのナンバリングシステムのうち少なくとも１つにおいてＣＤＲとして決定された配列（カバー配列）を抽出し、カバー配列を維持してヒト化を行った抗体を作製した。
【表13】
【表14】
【0114】
クローンＨＢ３５１に基づくヒト化抗体において、重鎖可変領域のヒト化率は９０．８％、軽鎖可変領域のヒト化率は８５．５％であった。クローンＨＢ１１７０に基づくヒト化抗体において、重鎖可変領域のヒト化率は９０．２％、軽鎖可変領域のヒト化率は８５．５％であった。
【0115】
これらのヒト化重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列に基づき、ヒト化抗体を作製した。ＧｅｎｅＡｒｔ ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒにてＣＨＯ細胞にコドン最適化し、ユーロフィンにて人工遺伝子を合成し、この人工遺伝子を定常領域をコードする抗体発現ベクターへシームレス挿入して核酸構築物を作製した。この核酸構築物を使用してヒト化抗体を生産し、目的のヒト化抗体が得られていることを確認した。
【0116】
（実施例９：ヒト化モノクローナル抗体の性能評価）
ヒト化したモノクローナル抗体ＨＢ３５１およびＨＢ１１７０についてＨＢｓ抗原との親和性およびＨＢＶ抑制能を評価した。ＨＢＶ抑制能は実施例２と同様に評価し、ＨＢｓ抗原との親和性は実施例３と同様に評価した。
ヒト化したモノクローナル抗体ＨＢ３５１およびＨＢ１１７０についてＨＢｓ抗原との親和性およびＨＢＶ抑制能を評価した。ＨＢＶ抑制能は実施例２と同様に評価し、ＨＢｓ抗原との親和性は実施例３と同様に評価した。
【0117】
結果を図９および以下の表に示す。ヒト化によりＨＢｓ抗原との親和性はわずかに低下したものの、いずれのヒト化抗体もＨＢｓ抗原に対する高い親和性を有するといえる。算出したＫｄ値は、ヒト化ＨＢ３５１は約３００ｐＭ、ヒト化ＨＢ１１７０は約３ｎＭであった。また、ヒト化ＨＢ３５１およびヒト化ＨＢ１１７０はいずれも、ｎｇ／ｍＬレベルの濃度でＨＢＶを抑制できることが見出された。
【表15】
【0118】
（注記）
以上のように、本開示の好ましい実施形態を用いて本開示を例示してきたが、本開示は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
以上のように、本開示の好ましい実施形態を用いて本開示を例示してきたが、本開示は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【0119】
本開示は、本開示は、新規のＨＢｓ抗原結合抗体を提供し、この新規抗体は、Ｂ型肝炎ウイルスの抑制に有用であり、既存のＨＢＩＧを置き換え得る。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【配列表】