特開 2024-89334 胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法、それに用いられるマーカー及び試薬

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024089334

(43)【公開日】2024-07-03

(54)【発明の名称】胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法、それに用いられるマーカー及び試薬

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/68 20060101AFI20240626BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20240626BHJP

   C07K 16/40 20060101ALI20240626BHJP

   C07K 16/18 20060101ALI20240626BHJP

   C12Q 1/44 20060101ALI20240626BHJP

【ＦＩ】

G01N33/68

G01N33/53 D

C07K16/40

C07K16/18

C12Q1/44

【審査請求】未請求

【請求項の数】11

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2022204626

(22)【出願日】2022-12-21

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 国立大学法人東京大学 学位審査会 開催日：令和３年１２月２２日

(71)【出願人】

【識別番号】504137912

【氏名又は名称】国立大学法人 東京大学

(71)【出願人】

【識別番号】000003300

【氏名又は名称】東ソー株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(74)【代理人】

【識別番号】100197169

【弁理士】

【氏名又は名称】柴田 潤二

(72)【発明者】

【氏名】永松 健

(72)【発明者】

【氏名】柳澤 愛実

(72)【発明者】

【氏名】矢冨 裕

(72)【発明者】

【氏名】蔵野 信

(72)【発明者】

【氏名】五十嵐 浩二

【テーマコード（参考）】

2G045

4B063

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA25

2G045AA27

2G045CA25

2G045DA36

2G045FB01

2G045FB03

4B063QQ03

4B063QQ32

4B063QQ70

4B063QR12

4B063QR24

4B063QR45

4B063QR57

4B063QR72

4B063QS28

4B063QS36

4B063QX02

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

【課題】早期診断、早期管理を要する胎児発育不全の診断に有用な定量的な検査結果に関する情報を提供する事。
【解決手段】本発明は、妊娠期間の少なくとも２つの異なる時点で採取された同一の妊娠被検体由来の血液のオートタキシン濃度をそれぞれ測定し、前記少なくとも２つの異なる時点の間のオートタキシン濃度の変動を指標として、胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法を提供する。また、本発明は、当該方法に用いるためのマーカー及び試薬を提供する。
【選択図】図２

【特許請求の範囲】

【請求項1】

妊娠期間の少なくとも２つの異なる時点で採取された同一の妊娠被検体由来の血液のオートタキシン濃度をそれぞれ測定し、前記少なくとも２つの異なる時点の間のオートタキシン濃度の変動を指標として、胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法。

【請求項2】

前記少なくとも２つの異なる時点が、妊娠初期（１０～１７週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点である請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記少なくとも２つの異なる時点の間のオートタキシン濃度の変動が０．５８ｍｇ／Ｌから０．５９ｍｇ／Ｌの範囲をカットオフ値とする、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記少なくとも２つの異なる時点が、妊娠中期（１８～２５週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点である請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記少なくとも２つの異なる時点の間のオートタキシン濃度の変動が－０．１５ｍｇ／Ｌから０．１３ｍｇ／Ｌの範囲をカットオフ値とする、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記変動が、１日あたりのオートタキシン濃度の変動である、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記少なくとも２つの異なる時点が妊娠初期から中期（１０～２５週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点である請求項６に記載の方法。

【請求項8】

１日あたりのオートタキシン濃度の変動が２．４５μｇ／Ｌ／ｄａｙから５．６６μｇ／Ｌ／ｄａｙの範囲をカットオフ値とする、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか１項に記載の方法に用いられる、オートタキシンからなる、胎児発育不全の妊婦を鑑別するためのマーカー。

【請求項10】

オートタキシンを特異的に認識する抗体を含有することを特徴とする、請求項１～８のいずれか１項に記載の胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法に使用するための試薬。

【請求項11】

リゾホスフォリパーゼＤの基質を含有することを特徴とする、請求項１～８のいずれか１項に記載の胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法に使用するための試薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法、それに用いられるマーカー及び試薬に関する。

【背景技術】

【0002】

産科における代表的な異常妊娠として、母体管理の場面では妊娠高血圧症候群、分娩管理の場面では早産、胎児発育不全（以下、「ＦＧＲ」と記載することもある）などがあげられる。妊娠により妊婦血清中のオートタキシン濃度が上昇することが報告（特許文献１、２、非特許文献１）されており、妊娠の週数が進むにつれ血液中のオートタキシン濃度が上昇し、分娩後速やかに濃度が低下することが示されている。また、オートタキシン濃度の上昇機序として胎盤での産生亢進によることが示唆されている（特許文献２、非特許文献２）。妊娠高血圧症候群は妊婦全体の７～１０％が発症すると言われており、特に妊娠高血圧腎症に進まないよう注意が必要とされている。妊娠高血圧症候群において正常妊娠に比較し血液中のオートタキシンの濃度変動が異なることが報告されており、妊娠高血圧症候群のマーカーになるとの報告がある（特許文献２、非特許文献１）。具体的には、妊娠第１期、第３期で低値である事、また第１期あるいは第２期から第３期への変動が正常妊娠に比較し濃度上昇が少ないことが示されている。早産については、正常妊娠と有意な差が認められていない。

【0003】

以上のとおり妊娠高血圧症候群ならびに早産については報告があるが、胎児発育不全についての報告はこれまでなかった。胎児発育不全は、在胎期間に相当した胎児の発育が見られない状態であり、その診断基準は、胎児体重基準値を用いて、基準範囲からのずれの程度（－１．５ＳＤ値以下）を目安に診断されるが、胎児の体重計測はあくまでも超音波計測による推定体重であるため、その測定方法や検査をする術者、胎児の向きなどによっては測定誤差があるとされる。胎児発育不全は慎重な管理が必要であり、特に分娩時期の決定が重要であり重症度と早産による未熟性とのバランスを考慮し、胎児の予備能力が決定的に低下する前に予測し、適切な分娩時期、分娩方法を決定が必要であり、必要に応じ２次、３次周産期医療機関への紹介も考慮する必要がある。以上のとおり、胎児発育不全を定量的に診断補助できるバイオマーカー検査の開発が期待されている。

【0004】

ヒトオートタキシンは分子量約１２５ＫＤａの糖蛋白質であり、そのリゾホスホリパーゼＤ活性によりリゾホスファチジルコリンを基質としリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）を産生する酵素であり、免疫測定法によりサンプル中のオートタキシン濃度が測定可能であること（非特許文献１）は既に知られている。

【0005】

また、オートタキシンが有するリゾホスフォリパーゼＤ活性が、オートタキシン濃度と良好に相関することが知られている（非特許文献３、４）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】特許５７００４６１

【特許文献2】特許５８３１７２３

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ４１２、１９４４－１９５０、２０１１

【非特許文献2】Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６２、９０－９５、２００９

【非特許文献3】Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ３８８、５１－５８、２００８

【非特許文献4】Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ４１２、１２０１－１２０６、２０１１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

これまで胎児発育不全の診断基準は、胎児体重基準範囲からのずれを目安に診断されているが、超音波計測による推定体重であるため様々な測定誤差があるとされている。胎児発育不全は適切な分娩時期、分娩方法を決定が必要であり、必要に応じ２次、３次周産期医療機関への紹介も考慮するなど慎重な管理が必要である。本発明の目的は定量的数値により胎児発育不全診断を補助する検査法であり、早期診断、早期管理を要する胎児発育不全の診断に有用な定量的な検査結果に関する情報を提供する事にある。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明者らは、妊娠被検体の血液中のオートタキシン濃度を測定し、鋭意検討を重ねた結果、正常妊娠と胎児発育不全とを鑑別できることを見いだし本発明に到達した。即ち本発明は下記の発明を包含する：

【0010】

［１］ 妊娠期間の少なくとも２つの異なる時点で採取された同一の妊娠被検体由来の血液のオートタキシン濃度をそれぞれ測定し、前記少なくとも２つの異なる時点の間のオートタキシン濃度の変動を指標として、胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法。
［２］ 前記少なくとも２つの異なる時点が、妊娠初期（１０～１７週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点である［１］に記載の方法。
［３］ 前記少なくとも２つの異なる時点の間のオートタキシン濃度の変動が０．５８ｍｇ／Ｌから０．５９ｍｇ／Ｌの範囲をカットオフ値とする、［２］に記載の方法。
［４］ 前記少なくとも２つの異なる時点が、妊娠中期（１８～２５週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点である［１］に記載の方法。
［５］ 前記少なくとも２つの異なる時点の間のオートタキシン濃度の変動が－０．１５ｍｇ／Ｌから０．１３ｍｇ／Ｌの範囲をカットオフ値とする、［４］に記載の方法。
［６］ 前記変動が、１日あたりのオートタキシン濃度の変動である、［１］に記載の方法。
［７］ 前記少なくとも２つの異なる時点が妊娠初期から中期（１０～２５週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点である［６］に記載の方法。
［8］ １日あたりのオートタキシン濃度の変動が２．４５μｇ／Ｌ／ｄａｙから５．６６μｇ／Ｌ／ｄａｙの範囲をカットオフ値とする、［７］に記載の方法。

【0011】

［９］ ［１］～［８］のいずれか１項に記載の方法に用いられる、オートタキシンからなる、胎児発育不全の妊婦を鑑別するためのマーカー。
［１０］ オートタキシンを特異的に認識する抗体を含有することを特徴とする、［１］～［８］のいずれか１項に記載の胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法に使用するための試薬。
［１１］ リゾホスフォリパーゼＤの基質を含有することを特徴とする、［１］～［８］のいずれか１項に記載の胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法に使用するための試薬。

【発明の効果】

【0012】

本発明は、オートタキシンを、胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するためのマーカーとするのであり、妊娠被検体の血液中のオートタキシンを少なくとも２回測定し、その濃度の変動を観察することにより胎児発育不全についての情報を提供する方法であり、汎用性の高い免疫学的定量試薬を用いれば短時間で簡便かつ低コストで精度よく胎児発育不全を鑑別可能な試薬を提供することが可能である。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】各妊娠期に採血した血液検体中のオートタキシン濃度を正常妊娠（白抜）、胎児発育不全（網掛）別に濃度分布を示した箱ひげ図

【図2】妊娠初期～中後期、ならびに妊娠中期から中後期に採血し測定した血液検体中のオートタキシン濃度の変動を正常妊娠（白抜）、胎児発育不全別（網掛）に濃度分布を示した箱ひげ図

【発明を実施するための形態】

【0014】

以下に本発明を詳細に説明する。但し本発明は異なる形態による実施が可能であり、以下に示す実施形態、実施例の例示にのみ限定されるものでは無い。なお、本明細書で引用される文献は、その全内容を参照により本明細書の一部として援用される。

【0015】

一実施態様において、本発明は、妊娠期間の少なくとも２つの異なる時点で採取された同一の妊娠被検体由来の血液のオートタキシン濃度をそれぞれ測定し、前記少なくとも２つの異なる時点の間のオートタキシン濃度の変動を指標として、胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法を提供する。

【0016】

本願発明者らは、妊娠期間の少なくとも２つの異なる時点で採取された同一の妊娠被検体由来の血液のオートタキシン濃度をそれぞれ測定し、それらの２つの時点についてのオートタキシン濃度の変動を指標とすることで、対象となる妊娠被検体が胎児発育不全であるか否かを鑑別するための情報を提供できることを見出した。より具体的には、妊娠期間の異なる２つの時点で採取された同一の妊娠被検体由来の血液のオートタキシン濃度の変動量が、正常の妊娠被検体と比較して、胎児発育不全の妊娠被検体では、より小さいことを見出したことにより、本発明を完成させた。

【0017】

本明細書において、「オートタキシン」（「ＡＴＸ」ともいう）とは、例えばヒトにおいては、分子量約１２５ＫＤａの糖蛋白質であり、そのリゾホスホリパーゼＤ活性によりリゾホスファチジルコリンを基質としてリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）を産生する酵素として知られている。サンプル中のオートタキシン濃度は、免疫測定法により測定可能であることが既に知られている（非特許文献１）。

【0018】

本発明においてオートタキシン濃度を測定する方法には特に限定はないが、例えばオートタキシンを特異的に認識する抗体を用いた免疫化学的方法があげられる。抗体を用いたヒトオートタキシン定量方法は、ヒトオートタキシンを特異的に捕捉し、その結果、生成した抗体－ヒトオートタキシン複合体が検出可能な方法であれば手法を選ばない。好ましくは、イムノアッセイで汎用されている、標識抗原と検体中のオートタキシンとの抗体に対する競合を利用した競合法、エピトープの異なる２抗体を用いてオートタキシンとの３者の複合体を形成させるサンドイッチ法が簡便かつ汎用しやすい。特異性、感度、汎用性などの点から、エピトープの異なる２抗体サンドイッチ免疫測定方法が優れている。好ましくは、オートタキシンを特異的に認識する抗体を含有する試薬を用いて行うことができる。このとき、例えば測定対象のオートタキシンを特異的に認識する固相化抗体と、それとは異なる部位で測定対象のオートタキシンを特異的に認識する標識化抗体とを含む試薬を用いてサンドイッチ法により行うことが好ましい。これらの方法は標準的であり充分技術確立されている。

【0019】

また、オートタキシンが有するリゾホスフォリパーゼＤ活性が、オートタキシン濃度と良好に相関することが知られている（非特許文献３、４）。そのため、他の態様において、オートタキシン濃度を測定する方法として、オートタキシンのリゾホスフォリパーゼＤ活性をリゾホスフォリパーゼＤの基質を用いて測定し、リゾホスフォリパーゼＤ活性から直接的に又は間接的に、オートタキシン濃度を換算して求める方法を採用してもよい。

【0020】

本明細書において「妊娠期間」は、妊娠被検体、特にヒト妊娠被検体の最終月経の開始日を「０週０日」として、胎児を出産した時点までの期間を意味する。本明細書において、妊娠期間０～９週を「妊娠前初期」、妊娠期間１０～１７週を「妊娠初期」、妊娠期間１８～２５週を「妊娠中期」、妊娠期間２６～３３週を「妊娠中後期」、妊娠期間３４～４１週以降を「妊娠後期」という。

【0021】

本発明の方法において、オートタキシン濃度が測定される「血液」は、血液であってもよく、血漿であってもよく、又は血清であってもよい。

【0022】

本発明の方法において、オートタキシン濃度の変動を観察するために用いられる血液は、同一妊娠被検体の妊娠期間の少なくとも２つの異なる時点であればよく、例えば、妊娠前初期（０～９週）、妊娠初期（１０～１７週）、妊娠中期（１８～２５週）、妊娠中後期（２６～３３週）、又は妊娠後期（３４～４１週以降）のそれぞれの期間において少なくとも１回測定されたオートタキシン濃度（「第１のオートタキシン濃度」という。）を、当該第１のオートタキシン濃度が測定された期間以外の上記区分の妊娠期間において少なくとも１回測定されたオートタキシン濃度（「第２のオートタキシン濃度」という。）と比較し、その変動を指標とすることで対象となる妊娠被検体が胎児発育不全であるか否かを鑑別するための情報を提供することができる。オートタキシン濃度の変動については、例えば、第１のオートタキシン濃度と第２のオートタキシン濃度の差、好ましくは、２つのオートタキシン濃度について、妊娠期間が後のオートタキシン濃度から、妊娠期間が前のオートタキシン濃度を引くことで、２つの異なる時点におけるオートタキシン濃度の変動量を算出することができる。また、オートタキシン濃度の変動は、第１のオートタキシン濃度と第２のオートタキシン濃度の差を、第１のオートタキシン濃度を測定した時点から第２のオートタキシン濃度を測定した時点まで期間（日数）で除した値、すなわち、1日あたりのオートタキシン濃度の変動として算出されるものであってもよい。

【0023】

本発明の一実施態様において、上記の少なくとも２つの異なる時点は、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点と、それより前の妊娠期（例えば、妊娠初期（１０～１７週）、妊娠中期（１８～２５週）、又は妊娠初期から中期（１０～２５週）の１つの時点）であり得る。

【0024】

本発明の一実施態様において、上記の少なくとも２つの異なる時点は、妊娠初期（１０～１７週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点であり得る。妊娠初期（１０～１７週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までのオートタキシン濃度の変動は、正常の妊娠被検体と比較して、胎児発育不全の妊娠被検体ではより低くなることを見出した。従って、妊娠初期（１０～１７週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までのオートタキシン濃度の変動が所定のカットオフ値よりも高い場合、正常の妊娠被検体であると鑑別し、所定のカットオフ値よりも低い場合、胎児発育不全の妊娠被検体であると鑑別し得る。妊娠初期（１０～１７週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までのオートタキシン濃度の変動のカットオフ値は、臨床試験の規模や母集団の違いなどによって変更される可能性があるが、本願の実施例に基づく場合は、例えば、０．５８ｍｇ／Ｌから０．５９ｍｇ／Ｌの範囲をカットオフ値として設定してもよい。

【0025】

本発明の一実施態様において、上記の少なくとも２つの異なる時点は、妊娠中期（１８～２５週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点であり得る。妊娠中期（１８～２５週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までのオートタキシン濃度の変動は、正常の妊娠被検体と比較して、胎児発育不全の妊娠被検体ではより低くなることを見出した。従って、妊娠中期（１８～２５週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までのオートタキシン濃度の変動が所定のカットオフ値よりも高い場合、正常の妊娠被検体であると鑑別し、所定のカットオフ値よりも低い場合、胎児発育不全の妊娠被検体であると鑑別し得る。妊娠中期（１８～２５週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までのオートタキシン濃度の変動のカットオフ値は、臨床試験の規模や母集団の違いなどによって変更される可能性があるが、本願の実施例に基づく場合は、例えば、－０．１５ｍｇ／Ｌから０．１３ｍｇ／Ｌの範囲をカットオフ値として設定してもよい。

【0026】

本発明の一実施態様において、上記の少なくとも２つの異なる時点は、妊娠初期から中期（１０～２５週）の１つの時点と妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点であり得る。妊娠初期から中期（１０～２５週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までのオートタキシン濃度の変動、特にその期間における１日あたりのオートタキシン濃度の変動は、正常の妊娠被検体と比較して、胎児発育不全の妊娠被検体ではより低くなることを見出した。従って、妊娠初期から中期（１０～２５週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までの、1日あたりのオートタキシン濃度の変動が所定のカットオフ値よりも高い場合、正常の妊娠被検体であると鑑別し、所定のカットオフ値よりも低い場合、胎児発育不全の妊娠被検体であると鑑別し得る。妊娠初期から中期（１０～２５週）の１つの時点から、妊娠中後期（２６～３３週）の１つの時点までの、1日あたりのオートタキシン濃度の変動のカットオフ値は、臨床試験の規模や母集団の違いなどによって変更される可能性があるが、本願の実施例に基づく場合は、例えば、２．４５μｇ／Ｌ／ｄａｙから５．６６μｇ／Ｌ／ｄａｙの範囲をカットオフ値として設定してもよい。

【0027】

本発明は、上記方法に用いられる、オートタキシンからなる、胎児発育不全の妊婦を鑑別するためのマーカーを提供する。

【0028】

また、本発明は、オートタキシン、特にヒトオートタキシンを特異的に認識する抗体を含有することを特徴とする、上記に記載の胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法に使用するための試薬を提供する。当該試薬に含まれる抗体は、オートタキシン、特にヒトオートタキシンを特異的に認識する抗体であり、上述の方法においてオートタキシン濃度を決定するために用いられ得るものであればよい。

【0029】

また、本発明は、リゾホスフォリパーゼＤの基質を含有することを特徴とする、上記に記載の胎児発育不全の妊娠被検体を鑑別するための情報を提供する方法に使用するための試薬を提供する。当該試薬に含まれるリゾホスフォリパーゼＤの基質は、オートタキシン濃度を決定するために用いられ得るものであればよく、例えば、リゾホスフォリパーゼＤの基質として用いられ得るリゾホスファチジルコリン（１４：０－リゾホスファチジルコリン）を用いることができ、さらに当該試薬としては、その基質が分解して遊離される物質、例えばコリンを検出し、定量できる試薬を含むものであってもよい（例えば、非特許文献３を参照のこと）。

【0030】

本発明によれば定量的な指標で胎児発育不全診断を可能とし、正確に鑑別することができ、適切かつ早期診断により、母体、胎児の高い安全分娩が期待できる。

【実施例0031】

以下に実施例を示すが、本発明は実施例に記載された例に限られるものではない。以下の実験を行うに当たっては、各施設の研究倫理委員会での承認のもと実施した。オートタキシン濃度測定は、自動免疫測定装置ＡＩＡシリーズ（東ソー社製）及び非特許文献１記載のサンドイッチ酵素免疫測定法の試薬を用い実施した。

【0032】

＜実施例１：患者背景＞
対象者は婦人科にて血液検体の採取を行った患者群であり、臨床的に正常妊娠、胎児発育不全（ＦＧＲ）を確定診断したものを対象とした。検体採取を行った妊娠期は妊娠期間１２週前後（１０～１７週）を初期、２０週前後（１８～２５週）を中期、３０週前後（２６～３３週）を中後期、３６週前後（３４～４１週以降）を後期とした。正常妊娠、胎児発育不全の患者背景ならびに有意差を表１に示す。また、各妊娠期でのオートタキシン（ＡＴＸ）濃度と有意差を表２に示し、また本患者群において妊娠期ごとのＡＴＸ濃度分布を箱ひげ図１に示す。ＡＴＸは正常妊娠、ＦＧＲいずれにおいても在胎日数進行に伴い濃度上昇を示している。各妊娠期におけるＲＯＣ解析の結果を表３に示す。妊娠初期においてＲＯＣ解析の結果、曲線下面積（ＡＵＣ）が０．７６５を示したが、２群で有意差が認められないため、単点でのＡＴＸ濃度測定値での正常妊娠、ＦＧＲの鑑別は困難であることが示唆された。

【0033】

【表1】

【0034】

【表2】

【0035】

【表3】

【0036】

＜実施例２：正常妊娠、ＦＧＲのＡＴＸ濃度変動による鑑別＞

【0037】

実施例１で示した通り、各妊娠期間単点でのＡＴＸ濃度測定による正常妊娠とＦＧＲの鑑別は困難であることが示された。一方、正常妊娠に比較しＦＧＲでは妊娠経過に伴うＡＴＸ濃度上昇の程度が低いことが推察された。そこで、各妊娠期間でのＡＴＸ濃度変動を指標に鑑別能を解析した。その結果、ＡＴＸ濃度変動によって正常妊娠とＦＧＲの鑑別が可能であることが明らかとなった。各妊娠期間におけるＡＴＸ濃度の変動量を表４に示し、有意差が認められた初期～中後期、中期～中後期の結果を箱ひげ図２に示す。各妊娠期間におけるＡＴＸ濃度変動をもとに、正常妊娠とＦＧＲとの鑑別能についてＲＯＣ解析を行い検証した。ＲＯＣ解析による曲線下面積（ＡＵＣ）並びに、感度、特異度を表５に示す。Ｙｏｕｄｅｎ－Ｉｎｄｅｘによるカットオフ値は、妊娠初期から中後期、妊娠中期から中後期までのＡＴＸ濃度変動量においてそれぞれ０．５９ｍｇ／Ｌ、－０．１０ｍｇ／Ｌであった。また、感度あるいは特異度を８０％とした際のカットオフ値は表６に示すとおりであり、妊娠初期から中後期における濃度変動において、感度８０％以上と設定したカットオフ値に０．５８ｍｇ／Ｌを採用することで確定診断に利用可能であり、特異度８０％以上と設定した際のカットオフ値０．５９ｍｇ／Ｌを使用すれば除外診断を目的に利用可能である。すなわち、カットオフ値を０．５８から０．５９ｍｇ／Ｌの範囲で、用途に応じ設定し利用することが可能である。同様に妊娠中期から中後期でも同様にカットオフ値を－０．１５から０．１３ｍｇ／Ｌの範囲で用途に応じ設定し利用することが可能である。

【0038】

【表4】

【0039】

【表5】

【0040】

【表6】

【0041】

＜実施例３：正常妊娠、胎児発育不全の１日あたりのＡＴＸ濃度変動による鑑別＞

【0042】

妊娠期での分類による濃度変動において、実施例２で示した通り妊娠初期から中後期、中期から中後期においてＡＴＸ濃度変動による正常妊娠と胎児発育不全の鑑別能があることが示された。すなわち、妊娠中後期時点の測定値とそれ以前の測定値間の濃度変動によりＦＧＲの鑑別が可能であることが示された。しかしながら、初期ＡＴＸ測定値が妊娠初期である場合と、妊娠中期である場合で異なる基準で判断する必要があり煩雑である。そこで、妊娠初期又は中期におけるＡＴＸ測定値を第１測定値とし、妊娠中後期におけるＡＴＸ測定値を第２測定値とし、この間のＡＴＸ濃度変動をもってＦＧＲの鑑別が可能であるか評価した。妊娠初期と妊娠中期をまとめた場合、範囲が広く、当然ＡＴＸ濃度変動値も幅が大きくなる。そこで、ＡＴＸ濃度変動値を測定間隔で除した値を用いる、すなわち単位期間あたりのＡＴＸ濃度変動により評価することにより、妊娠初期及び中期にわたる広い範囲の問題を解決できると考えられる。この単位期間は特に限定されるものではないが、例えば１日当たりのＡＴＸ濃度変動を用いることができる。ＡＴＸ濃度変動量を測定間隔の日数で除した値を表７に示す。正常妊娠、胎児発育不全のＡＴＸ濃度変動についてＲＯＣ解析を行い、その鑑別能を検証した。ＲＯＣ解析による曲線下面積（ＡＵＣ）並びに、感度、特異度、Ｙｏｕｄｅｎ－Ｉｎｄｅｘによるカットオフ値を表８に示す。Ｙｏｕｄｅｎ－Ｉｎｄｅｘによるカットオフ値は１日あたりのＡＴＸ変動量において５．６６μｇ／Ｌ／ｄａｙであった。また、感度あるいは特異度を８０％とした際のカットオフ値は表９に示すとおりであり、特異度８０％以上と設定したカットオフ値に２．４５μｇ／Ｌ／ｄａｙを採用することで確定診断に利用可能であり、感度８０％以上と設定した際のカットオフ値５．３４μｇ／Ｌ／ｄａｙを使用すれば除外診断を目的に利用可能であるが、カットオフ値５．６６μｇ／Ｌ／ｄａｙにおいて感度１００％、特異度６８．０％であることより、５．３４μｇ／Ｌ／ｄａｙより５．６６μｇ／Ｌ／ｄａｙが好ましい。すなわち、カットオフ値２．４５から５．６６μｇ／Ｌ／ｄａｙの範囲で用途に応じ設定し利用することが可能である。

【0043】

【表7】

【0044】

【表8】

【0045】

【表9】

【図1】

【図2】